IL-9的抗原表位肽及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種IL?9的抗原表位肽及其應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)所提供的IL?9抗原表位肽，其氨基酸序列為如下任一：(1)序列1；(2)序列1的第9?13位；(3)序列2；(4)序列2的第1?5位；(5)序列3；(6)序列3的第5?10位；(7)序列3的第6?11位；(8)序列3的第4?10位；(9)序列3的6?13位。本發(fā)明專利技術(shù)所提供的IL?9抗原表位肽及確定的核心表位可用于制備高效靈敏的抗IL?9的抗體。本發(fā)明專利技術(shù)對于IL?9表達異常相關(guān)疾病的診斷和防治具有重要意義。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物
，涉及一種IL-9的抗原表位肽及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
IL-9是1988年首次在Th細胞上清中分泌得到的細胞因子，主要由新型效應(yīng)Th9細胞分泌，此外，Th2、Th17等細胞也能分泌。成熟的IL-9是由144個氨基酸和一段18個氨基酸的信號肽構(gòu)成的分子量大小為14000的糖蛋白。IL-9參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程，由于不同疾病微環(huán)境的不同，IL-9在不同疾病中起促進或者抑制的作用。在自身免疫性疾病的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-9參與疾病炎癥進展過程；研究發(fā)現(xiàn)在自身免疫性結(jié)腸炎患者病理組織中IL-9mRNA較健康對照組升高，在小鼠模型中外源性注射Th9細胞后，小鼠結(jié)腸炎癥加重，而在IL-9基因敲除或使用IL-9抗體中和后，小鼠結(jié)腸炎內(nèi)鏡表現(xiàn)及組織病理變化則明顯減輕。另外在支氣管哮喘病人病理組織中發(fā)現(xiàn)IL-9mRNA及蛋白水平升高，提示IL-9參與哮喘的發(fā)生、發(fā)展；研究證實，IL-9轉(zhuǎn)基因小鼠在抗原刺激下可表現(xiàn)出呼吸道高反應(yīng)性，伴有炎性細胞浸潤增多，IgE水平增高等哮喘急性發(fā)作的特征。而在剔除鼠或引入IL-9抗體后，呼吸道炎癥及呼吸道高反應(yīng)性較前明顯下降。而在幽門螺桿菌感染人體后發(fā)現(xiàn)IL-9和IL-9mRNA在胃黏膜病理組織中明顯較健康對照組升高，而在敲除IL-9基因的小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，幽門螺桿菌在小鼠胃黏膜的定植量和小鼠胃黏膜炎癥程度比正常感染組小鼠高，首次證實IL-9在幽門螺桿菌誘導宿主免疫反應(yīng)中起保護作用。另外在乙型病毒性肝炎患者血清中發(fā)現(xiàn)IL-9明顯高于健康對照者，而且在病毒載量小于105時，IL-9的水平隨病毒負荷量增高而增高，但是在病毒負載量大于105時，IL-9的血清水平反而下降。在活動性結(jié)核病人中也發(fā)現(xiàn)IL-9的血清水平明顯高于健康對照者，提示IL-9參與機體對結(jié)核菌的免疫反應(yīng)。綜上所述，IL-9是一種多效應(yīng)的細胞因子，它參與機體多種疾病的免疫應(yīng)答過程，而IL-9抗體可能作為多種疾病的診斷和治療。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的一個目的是提供一種IL-9的抗原表位肽。本專利技術(shù)所提供的IL-9抗原表位肽，其氨基酸序列可為如下任一：(1)序列表中序列1；(2)序列表中序列1的第9-13位(核心表位)；(3)序列表中序列2；(4)序列表中序列2的第1-5位(核心表位)；(5)序列表中序列3；(6)序列表中序列3的第5-10位(核心表位)；(7)序列表中序列3的第6-11位(核心表位)；(8)序列表中序列3的第4-10位(核心表位)；(9)序列表中序列3的第6-13位(核心表位)。相應(yīng)的，本專利技術(shù)還提供了一種IL-9抗原，具體為將所述IL-9抗原表位肽與載體蛋白偶聯(lián)而成。在本專利技術(shù)中，所述載體蛋白具體可為匙孔血藍蛋白(KLH)或者牛血清白蛋白(BSA)。當然，符合實驗要求的其他載體蛋白均可。更加具體的，在本專利技術(shù)的實施例中，當作為免疫原用于免疫動物制備抗體時，所述載體蛋白具體為匙孔血藍蛋白(KLH)；當作為包被原用于篩選單克隆細胞株時，所述載體蛋白具體為牛血清白蛋白(BSA)。所述IL-9抗原表位肽或所述IL-9抗原在作為免疫原制備抗IL-9的抗體中的應(yīng)用也屬于本專利技術(shù)的保護范圍。其中，所述應(yīng)用既可為非疾病診斷治療的應(yīng)用，也可為疾病診斷治療的應(yīng)用。以所述IL-9抗原表位肽或所述IL-9抗原作為免疫原制備所得的抗IL-9的抗體當然也屬于本專利技術(shù)的保護范圍。所述抗體在檢測IL-9或制備用于檢測IL-9的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本專利技術(shù)的保護范圍。其中，所述應(yīng)用既可為非疾病診斷治療的應(yīng)用，也可為疾病診斷治療的應(yīng)用。所述IL-9抗原表位肽或所述IL-9抗原或所述抗體在如下(a)或(b)中的應(yīng)用也屬于本專利技術(shù)的保護范圍。(a)制備用于診斷IL-9表達異常相關(guān)疾病的產(chǎn)品；(b)制備用于治療和/或預防IL-9表達異常相關(guān)疾病的產(chǎn)品。本專利技術(shù)還保護活性成分為所述IL-9抗原表位肽或所述IL-9抗原或所述抗體的產(chǎn)品；所述產(chǎn)品具有如下功能中至少一種：(A)診斷IL-9表達異常相關(guān)疾病；(B)治療和/或預防IL-9表達異常相關(guān)疾病。其中，所述IL-9表達異常是指與未患病的健康對照相比，患者體內(nèi)的IL-9的表達水平表現(xiàn)出顯著差異。在本專利技術(shù)的一個實例中，所述IL-9表達異常相關(guān)疾病具體為活動性結(jié)核病。另外，編碼所述IL-9抗原表位肽的核酸分子以及含有所述核酸分子的表達盒、重組載體或重組細胞系也屬于本專利技術(shù)的保護范圍。在本專利技術(shù)中，所述IL-9為人源IL-9。實驗證明，本專利技術(shù)所提供的IL-9抗原表位肽及確定的核心表位可用于制備高效靈敏的抗IL-9的抗體。本專利技術(shù)對于IL-9表達異常相關(guān)疾病的診斷和防治具有重要意義。具體實施方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、IL-9抗原的制備一、IL-9抗原中表位肽序列的確定1、在NCBI搜索IL-9蛋白的序列信息如下：IL-9蛋白的序列如下：m l l a m v l t s a l l l c s v a g q g c p t l a g i l d i n f l i n k m q e d p a s k c h c s a n v t s c l c l g i p s d n c t r p c f s e r l s q m t n t t m q t r y p l i f s r v k k s v e v l k n n k c p y f s c e q p c n q t t a g n a l t f l k s l l e i f q k e k m r g m r g k i.IL-9蛋白序列總體比較特異，沒有與之相似的蛋白序列。2、根據(jù)Uniprot數(shù)據(jù)庫信息進行分析，得到IL-9可能的糖基化位點，避開信號肽和糖基化位點，選擇如下3個區(qū)域做為抗原位點：IL9-pep1：DINFLINKMQEDPASKC(序列1)；IL9-pep2：CIFQKEKMRGMRGKI(序列2)；IL9-pep3：SRVKKSVEVLKNNKC(序列3)。其中，IL9-pep2中的第一個氨基酸“C”并非來自于IL-9蛋白的序列，而是為了用于偶聯(lián)載體而額外添加的。二、IL-9抗原的制備使用多肽合成儀人工合成序列表中序列1-3所示的三條多肽序列(IL9-pep1，IL9-pep2和IL9-pep3)，并將三條多肽分別與匙孔血藍蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)進行偶聯(lián)，得到“表位肽-載體蛋白偶聯(lián)物”。其中，偶聯(lián)KLH的用于免疫小鼠制備抗IL-9抗體時使用；偶聯(lián)BSA的用于篩選抗血清時作為ELISA包被原使用。經(jīng)檢測，偶聯(lián)所得的兩種“表位肽-載體蛋白偶聯(lián)物”的純度大于90％，10mg。實施例2、針對實施例1中IL-9抗原的單克隆抗體的制備及抗原表位鑒定一、針對實施例1中IL-9抗原的單克隆抗體的制備及特性鑒定1、動物免疫用實施例1制備的偶聯(lián)了KLH的三條多肽(IL9-pep1，IL9-pep2和IL9-pep3)分別免疫4只SPF級的BALB/c雌性小鼠。具體免疫策略如下：(1)初次免疫：偶聯(lián)了KLH的多肽的劑量為60μg(偶聯(lián)后的總質(zhì)量)，佐劑為弗氏完全佐劑，佐劑的劑量為200μl，腹部皮下注射免本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
IL?9抗原表位肽，其氨基酸序列為如下任一：(1)序列表中序列1；(2)序列表中序列1的第9?13位；(3)序列表中序列2；(4)序列表中序列2的第1?5位；(5)序列表中序列3；(6)序列表中序列3的第5?10位；(7)序列表中序列3的第6?11位；(8)序列表中序列3的4?10位；(9)序列表中序列3的6?13位。

【技術(shù)特征摘要】
1.IL-9抗原表位肽，其氨基酸序列為如下任一：(1)序列表中序列1；(2)序列表中序列1的第9-13位；(3)序列表中序列2；(4)序列表中序列2的第1-5位；(5)序列表中序列3；(6)序列表中序列3的第5-10位；(7)序列表中序列3的第6-11位；(8)序列表中序列3的4-10位；(9)序列表中序列3的6-13位。2.IL-9抗原，為將權(quán)利要求1所述的IL-9抗原表位肽與載體蛋白偶聯(lián)而成。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的IL-9抗原，其特征在于：所述載體蛋白為匙孔血藍蛋白或者牛血清白蛋白。4.權(quán)利要求1所述的IL-9抗原表位肽或權(quán)利要求2或3所述的IL-9抗原在作為免疫原制備抗IL-9的抗體中的應(yīng)用。5.以權(quán)利要求1所述的IL-9抗原表位肽或權(quán)利要求2或3所述的IL-9抗原作為免...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：廖莎，孫照剛，霍鳳敏，武劍楠，許紹發(fā)，
申請(專利權(quán))人：首都醫(yī)科大學附屬北京胸科醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11