本發明專利技術屬于基因工程領域，具體為針對免疫球蛋白Fc段的單域重鏈抗體，其具有SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，可用于免疫檢測、抗原富集純化等領域。本發明專利技術所提供的氨基酸序列可以作為前體，通過隨機或定點突變技術進行改造，能夠獲得性質(親和性、特異性、穩定性等)更好的突變體，用來發展進一步用于醫藥、工業、農業的蛋白質或多肽。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及單域重鏈抗體技術(又稱為納米抗體技術)，以及基因工程抗體技術，特別是涉及針對免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)Fc段(fragment crystalline，Fc)的單域重鏈抗體或多肽。技術背景重鏈抗體(Heavy-chain antibody)是一種天然缺失輕鏈，僅由重鏈組成的抗體，存在于駱駝、鯊魚等動物中。單域重鏈抗體(又稱為納米抗體，VHH抗體，variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody，下同)是指僅由重鏈抗體可變區(Variable region)組成的基因工程抗體。與普通抗體相比，單域重鏈抗體具有分子量小，穩定性高，水溶性好等優點，目前已廣泛應用于基礎研究、醫學診斷和檢測、藥物研發等領域。免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈組成。每條鏈都含有可變區(variable region，V區)和恒定區(constant region，C區)，其中可變區提供抗原結合位點和特異性，恒定區構成免疫球蛋白的框架，具有生物效應功能。用木瓜蛋白酶消化IgG，可將其分成3個功能區，即2個相同的抗原結合片段(fragment antigen binding，Fab)和一個可結晶片段(fragment crystalline，Fc)。Fc段位于恒定區，由兩條重鏈羧基端的一半組成。由于Fc段遠離抗原結合部位，因此提供了一個與抗體結合而不影響抗原抗體反應的區域，是最有效的二抗試劑結合的表位區。目前，已有針對IgG Fc段的多克隆抗體、單克隆抗體等傳統抗體的公開報道。與單域重鏈抗體相比，傳統抗體存在生產成本較高，制備過程繁瑣等缺點。
技術實現思路
本專利技術之目的是提供針對免疫球蛋白G的Fc段的單域重鏈抗體(包括含有所述單域重鏈抗體全部或部分功能區域的蛋白質或多肽)及其氨基酸序列，可被用于制備檢測或純化、富集IgG的試劑和工具。本專利技術提供一種針對免疫球蛋白G的Fc段的單域重鏈抗體(即本專利技術一種免疫庫來源的結合免疫球蛋白Fc段的納米抗體)，具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。其氨基酸序列的IMGT編號和結構域的劃分包括四個框架區(Framework region,FR)和三個互補決定區(Complementarity-determining region,CDR)。互補決定區主要負責抗原的識別，框架區結構相對穩定，主要起著維持蛋白質結構的作用。本專利技術提供一個核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.:1，通過遺傳密碼子可以隨時獲得該核酸分子的具體序列。本專利技術還提供一個核酸分子，其特征是編碼SEQ ID NO.:1部分結構域，通過遺傳密碼子可以隨時獲得該核酸分子的具體序列。可以為SEQ ID NO.:2核酸分子。本專利技術所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通過合適的表達系統進行表達以得到相應的蛋白質或多肽。這些表達系統包括細菌，酵母菌，絲狀真菌，動物細胞，昆蟲細胞，植物細胞，或無細胞表達系統。本專利技術還提供一種載體，包含所述核酸序列。由于遺傳密碼子具有簡 并性，該核酸序列可以根據不同的應用目的而不同。本專利技術還提供一種宿主細胞，包括所述蛋白質或表達載體。本專利技術還提供了一種純化或檢測免疫球蛋白G的方法，其特征是含有上述蛋白質或多肽。基于本專利技術提供的蛋白質或多肽與免疫球蛋白G特異性結合的能力，建立免疫球蛋白G的純化或檢測方法。其中，優選的方法包括酶聯免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，熒光免疫法(Fluoroimmunoassay，FIA)，免疫芯片法和親和層析法。本專利技術所提供的氨基酸序列可以作為前體，通過隨機或定點突變技術進行改造，能夠獲得性質(水溶性、穩定性、親和力以及特異性等)更好的突變體，用來發展進一步用于醫藥、工業、農業的蛋白質或多肽。本專利技術還涉及前述針對免疫球蛋白G Fc段的納米抗體在免疫檢測、富集以及純化中的應用。這些免疫檢測指的是非疾病診斷治療目的的免疫檢測。本專利技術還涉及針對免疫球蛋白G的Fc段的免疫親和吸附材料，包括載體，搭載在載體上的配基，其特征在于該材料以針對免疫球蛋白G的Fc段的納米抗體作為配基，所述針對免疫球蛋白G的Fc段的納米抗體具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。載體材料不限于瓊脂糖凝膠，也可以選用硅球、納米磁珠等。本專利技術中所敘述的一些術語具有如下含義：同源性：描述兩個或更多氨基酸序列的相似程度，第一個氨基酸序列和第二個氨基酸序列之間同源性的百分比可以通過【第一氨基酸序列中與第二氨基酸序列中相應位置處的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的數量】除 以【第一個氨基酸序列中氨基酸總數】再乘以【100％】來計算，其中第二氨基酸序列中的某個氨基酸的缺失、插入、替換或添加(與第一氨基酸相比)被認為是有差別。備選地，同源性百分比也可以利用已知的用于序列匹配的計算機運算程序如NCBI Blast獲得。結構域：蛋白質三級結構的基本結構單位，通常具有一定的功能。IMGT編號：IMGT數據庫(The International ImMunoGeneTics Database)中的一種已經標準化的抗體氨基酸序列編號方法。具體編號方法可以參考文獻(Ehrenmann,F.,Q.Kaas,et al.(2010).\IMGT/3Dstructure-DB and IMGT/DomainGapAlign:a database and a tool for immunoglobulins or antibodies,T cell receptors,MHC,IgSF and MhcSF.\Nucleic Acids Res 38(Database issue):D301-307.Lefranc,M.P.,C.Pommie,et al.(2003).\IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains.\Dev Comp Immunol 27(1):55-77.)中的描述。密碼子(codon)：又稱為三聯體密碼(triplet code)，指對應于某種氨基酸的核苷酸三聯體。在轉譯過程中決定該種氨基酸插入生長中多肽鏈的位置。本專利技術提供了從免疫文庫中獲取的識別IgG Fc段的單域重鏈抗體，該單域重鏈抗體經過了親和力成熟，具有更高的親和力，識別位點是Fc的優勢抗原表位。具體實施方式下面通過單域中鏈抗體的制備、分析以及應用，對本專利技術作進一步說明，這些具體實施例不應以任何方式被解釋為限制本專利技術的應用范圍。實施例1：抗Fc單域重鏈抗體免疫文庫的構建取300μg Fc重組蛋白(該蛋白可通過商業途徑獲得)與弗氏完全佐劑乳化后，對羊駝(Lama pacos)進行皮下多點注射免疫。加強免疫采用150μg Fc重組蛋白與弗氏不完全佐劑乳化，間隔2周進行，每次免疫7天后靜脈取血，采用間接ELISA法測定血清效價，選擇血清效價最高的樣品分離淋巴細胞，提取RN本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種免疫庫來源的結合免疫球蛋白Fc段的納米抗體，具有SEQ?ID?NO.:1所示的氨基酸序列。
【技術特征摘要】
1.一種免疫庫來源的結合免疫球蛋白Fc段的納米抗體，具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。2.一種核酸分子，其特征是編碼權利要求1中所述氨基酸序列。3.根據權利要求2所述的核酸分子，其特征在于序列如SEQ ID NO.:2。4.一種包含權利要求2所述的核酸序列的載體。5.一種包含權利要求4所述的載體的宿主細胞。6.權利要求1所述的結合免疫球蛋白Fc段的納米抗體在免疫檢測、富集純化特異性識別免疫球蛋白中的應用。7.權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：付金衡，周鵬，涂追，許楊，
申請(專利權)人：南昌大學，
類型：發明
國別省市：江西;36
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。