多聚體Fc蛋白制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及結(jié)合人Fc受體的多聚體融合蛋白。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及包含所述蛋白的藥物組合物，以及它們在治療免疫性病癥中的用途。融合蛋白在位置309上的半胱氨酸殘基不存在的情況下包含尾部。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】本專利技術(shù)涉及結(jié)合人Fc受體的多聚體融合蛋白。本專利技術(shù)還涉及包含所述多聚體融合蛋白的治療組合物，以及它們在治療免疫性病癥中的用途。背景免疫性病癥包括具有不同病征、癥狀、病因?qū)W和致病機(jī)制的多種疾病。許多這類疾病的特征在于致病性抗體和/或致病性免疫復(fù)合物的積極參與。在某些疾病諸如ITP(可變地稱為免疫性血小板減少癥、免疫性血小板紫癜、特發(fā)性血小板減少性紫癜)中，針對致病性抗體的靶抗原(Hoemberg,Scand HJ Immunol，第74卷(5),p489-495,2011)和疾病進(jìn)程是相當(dāng)清楚的。通常利用多種常規(guī)藥劑(作為單一療法或組合地)來治療此類免疫性病癥。此類藥劑的實(shí)例是皮質(zhì)類固醇(其與許多副作用相關(guān))、靜脈注射免疫球蛋白(IVIG)和抗D?？贵w，通常被稱為免疫球蛋白，是包含通過鏈間二硫鍵保持在一起的兩條相同的重(H)鏈和兩條相同的輕(L)鏈的Y形分子。每一條鏈由在序列上變化的并且負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域(V)組成。每一條鏈還由至少一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(C)組成。在輕鏈中，存在單個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域。在重鏈中，存在至少3個(gè)，有時(shí)4個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域，這取決于同種型(IgG、IgA和IgD具有3個(gè)，IgM和IgE具有4個(gè))。在人中，存在稱為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM的5個(gè)不同種類或同種型的免疫球蛋白。所有這些種類具有基本的4鏈Y形結(jié)構(gòu)，但它們相異在于它們的重鏈(分別稱為α、δ、ε、γ和μ)。IgA還可被進(jìn)一步細(xì)分成2個(gè)亞類，稱為IgA1和IgA2。存在4個(gè)亞類的IgG，稱為IgG1、IgG2、IgG3和IgG4?？贵w的Fc結(jié)構(gòu)域通常包含每一條重鏈的至少最后兩個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域，所述恒定結(jié)構(gòu)域二聚化以形成Fc結(jié)構(gòu)域。Fc結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)提供抗體效應(yīng)子功能，包括決定抗體半衰期(原理上通過對FcRn的結(jié)合)、遍布身體的分布、固定補(bǔ)體的能力以及對細(xì)胞表面Fc受體的結(jié)合?？贵w同種型之間的差異最明顯地在于Fc結(jié)構(gòu)域中，并且這導(dǎo)致在對抗原結(jié)合后不同效應(yīng)子功能的觸發(fā)。結(jié)構(gòu)差異還導(dǎo)致抗體的聚合狀態(tài)的差異。因此，IgG、IgE和IgD通常是單體，而IgM以五聚體和六聚體兩種形式存在，IgA在血清中主要以單體形式存在并且在漿液粘液性分泌中主要以二聚體形式存在。靜脈注射免疫球蛋白(IVIG)是來自成千上萬的健康血液供體的混合免疫球蛋白。IVIG最初被用作IgG替代療法來預(yù)防具有低IgG水平的患者的機(jī)會(huì)致病菌感染(綜述于Baerenwaldt,Expert Rev Clin Immunol，第6卷(3),p425-434,2010中)。在具有ITP的兒童中發(fā)現(xiàn)IVIG的抗炎性質(zhì)(Imbach,Helv Paediatri Acta，第36卷(1),p81-86,1981)后，IVIG現(xiàn)被許可用于治療ITP、Guillain-Barré綜合征、川崎病和慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(Nimmerjahn,Annu Rev Immunol，第26卷，p513-533,2008)。在牽涉致病性免疫復(fù)合物的疾病中，已有人提出，少部分成分免疫球蛋白級(jí)分不成比例地有效。據(jù)觀測，微量(通常1-5％)的IgG以多聚體形式存在于IVIG內(nèi)。大多數(shù)該多聚體級(jí)分被認(rèn)為是二聚物和較少量的三聚體及更高級(jí)形式。還已提出，另外的二聚體可在輸注后通過接受者的抗獨(dú)特型抗體的結(jié)合形成。有一種理論認(rèn)為，這些多聚體形式因它們增強(qiáng)的親合力而與免疫復(fù)合物競爭對低親和力Fcγ受體的結(jié)合(Augener,Blut,第50卷,p249-252,1985；Teeling,Blood第98卷(4),p1095-1099,2001；Machino,Y.,Clin Exp Immunol,第162卷(3),p415-424,2010；Machino,Y.等，BBRC,第418卷,p748-753,2012)。另一個(gè)理論是IVIG內(nèi)的IgG的唾液酸糖形式，尤其是高水平的α2-6唾液酸形式的存在，引起Fcγ受體激活狀態(tài)的變化(Samuelsson,Science,第291卷,p484-486,2001；Kaneko,Science,第313卷,p670-673,2006；Schwab,European J Immunol第42卷,p826-830,2012；Sondermann,PNAS,第110卷(24),p9868-9872,2013)。在牽涉致病性抗體的疾病中，已有人提出，向人施用的非常大劑量的IVIG(1-2g/kg)有效地越過了通過FcRn進(jìn)行的正常IgG動(dòng)態(tài)平衡機(jī)制。有效地供體IVIG對接受者IgG的巨大稀釋導(dǎo)致患者致病性抗體的增強(qiáng)的分解代謝和較短的血清半衰期。其它提出的功效機(jī)制包括致病性抗體的抗獨(dú)特型中和以及補(bǔ)體因子的瞬時(shí)減少(Mollnes,Mol Immunol，第34卷，p719-729,1997；Crow,Transfusion Medicine Reviews，第22卷(2),p103-116,2008；Schwab,I.和Nimmerjahn,F.Nature Reviews Immunology，第13卷，p176-189,2013)。IVIG的臨床使用存在明顯的不利方面。IVIG因生產(chǎn)方法和供體庫的固有差異而在制造商之間具有可變的產(chǎn)品質(zhì)量(Siegel,Pharmacotherapy第25卷(11)p78S-84S,2005)。以非常大的劑量，通常以1-2g/kg的量級(jí)給予IVIG。該大劑量使得必須進(jìn)行長持續(xù)時(shí)間的輸注(4-8小時(shí)，有時(shí)持多天)，這可令患者不悅并且可導(dǎo)致輸注相關(guān)的不良事件。嚴(yán)重的不良事件可發(fā)生，IgA不足的個(gè)體中的反應(yīng)是眾所周知的。還可在接受IVIG的患者中觀測到細(xì)胞因子釋放，但這通過劑量和輸注速率的細(xì)心控制得以大大地減少至最少。作為每患者使用的大量和對人供體的依賴的結(jié)果，IVIG的生產(chǎn)是昂貴的，并且全球供應(yīng)受到嚴(yán)重限制。總體上IVIG的不利方面意味著有必要在能夠干擾致病性抗體和致病性免疫復(fù)合物的疾病生物學(xué)的分子的臨床供應(yīng)、管理和功效方面進(jìn)行改善。用作IVIG療法的潛在替代的多聚體Fc融合蛋白已在文獻(xiàn)中進(jìn)行了描述。(Mekhaiel等；Nature Scientific Reports 1:124，2011年10月19日出版的)。Mekhaiel等描述了六聚hIgG1-FC-LH309/310CL-尾部(tailpiece)。本專利技術(shù)人已經(jīng)產(chǎn)生了含有修飾蛋白質(zhì)的效應(yīng)子功能的突變的多聚體融合蛋白，修飾蛋白質(zhì)的效應(yīng)子功能包括Fc受體結(jié)合改變和/或補(bǔ)體結(jié)合改變。所述修飾大大改善本專利技術(shù)的多聚體融合蛋白的安全性和功效。因此，在本專利技術(shù)中，我們提供具有改進(jìn)的可制造性和更大的功效及安全性的改進(jìn)的多聚體融合蛋白，其解決了IVIG和現(xiàn)有技術(shù)替代方案的許多不利方面。可在細(xì)心控制的條件下大量產(chǎn)生所述蛋白，從而消除了有限供應(yīng)和質(zhì)量可變的問題。此外，改進(jìn)的功效及安全性允許施用更小的劑量并降低了不良事件的風(fēng)險(xiǎn)。由Mekhaiel等描述的蛋白質(zhì)被開發(fā)來主要用作疫苗，并且通常將其與稱為“融合伴侶”諸如抗原、病原體相關(guān)分子模式(PAMP)、藥物、配體、受體、細(xì)胞因子或趨化因子的不同蛋白質(zhì)融合。在一個(gè)實(shí)例中，本專利技術(shù)的蛋白質(zhì)不包含融合伴侶。多聚體融合蛋白已在現(xiàn)有技術(shù)中進(jìn)行了描本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種包含兩個(gè)或更多個(gè)多肽單體單元的多聚體融合蛋白；其中每一個(gè)多肽單體單元包含含有兩個(gè)重鏈Fc區(qū)的抗體Fc?結(jié)構(gòu)域；其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)在位置309上包含半胱氨酸殘基以及改變FcR結(jié)合和/或補(bǔ)體結(jié)合的至少一個(gè)另外突變，并且在其C末端與尾部融合，所述尾部使所述單體單元組裝成多聚體；并且其中每一個(gè)多肽單體單元不包含抗體可變區(qū)。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2014.03.05 GB 1403914.3;2014.03.05 GB 1403915.0;201.一種包含兩個(gè)或更多個(gè)多肽單體單元的多聚體融合蛋白；其中每一個(gè)多肽單體單元包含含有兩個(gè)重鏈Fc區(qū)的抗體Fc-結(jié)構(gòu)域；其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)在位置309上包含半胱氨酸殘基以及改變FcR結(jié)合和/或補(bǔ)體結(jié)合的至少一個(gè)另外突變，并且在其C末端與尾部融合，所述尾部使所述單體單元組裝成多聚體；并且其中每一個(gè)多肽單體單元不包含抗體可變區(qū)。2.權(quán)利要求1的多聚體融合蛋白，其中所述抗體Fc-結(jié)構(gòu)域來源于IgG。3.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中所述重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域。4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于的IgG1的CH3結(jié)構(gòu)域。5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其在位置355上包含精氨酸殘基。6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其在位置355上包含半胱氨酸殘基。7.權(quán)利要求1至3的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置355上的谷氨酰胺殘基已被精氨酸殘基(Q355R)或半胱氨酸殘基(Q355C)取代。8.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgM的CH4結(jié)構(gòu)域。9.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中尾部來源于IgM或IgA。10.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)在其N末端具有鉸鏈區(qū)。11.權(quán)利要求10的多聚體融合蛋白，其中所述鉸鏈區(qū)包含突變的序列CPPC。12.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其包含6個(gè)或12個(gè)多肽單體單元。13.權(quán)利要求1-6和9-12的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG1的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置234上的亮氨酸殘基和/或位置331上的脯氨酸殘基已被另一種氨基酸取代。14.權(quán)利要求1-13的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG1的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置234上的亮氨酸殘基已被苯丙氨酸殘基取代并且位置331上的脯氨酸殘基已被絲氨酸殘基取代(L234F/P331S)。15.權(quán)利要求1-12的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來自IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中選自位置234上的苯丙氨酸殘基、位置296上的苯丙氨酸殘基、位置327上的甘氨酸殘基、位置330上的絲氨酸殘基和位置331上的絲氨酸殘基的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已被另一種氨基酸取代。16.權(quán)利要求1-12或15的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置234上的苯丙氨酸殘基已被亮氨酸殘基取代(F234L)。17.權(quán)利要求1-12或15的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置234上的苯丙氨酸殘基已被亮氨酸殘基取代并且位置296上的苯丙氨酸殘基已被酪氨酸殘基取代(F234L/F296Y)。18.權(quán)利要求1-12或15的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置327上的甘氨酸殘基已被丙氨酸殘基取代并且位置330上的絲氨酸殘基已被丙氨酸殘基取代(G327A/S330A)。19.權(quán)利要求1-12或15的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置327上的甘氨酸殘基已被丙氨酸殘基取代并且位置331上的絲氨酸殘基已被脯氨酸殘基取代(G327A/S331P)。20.權(quán)利要求1-12或15的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，其中位置330上的絲氨酸殘基已被丙氨酸殘基取代并且位置331上的絲氨酸殘基已被脯氨酸殘基取代(S330A/S331P)。21.權(quán)利要求1-12的任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)是包含來源于IgG4的CH2結(jié)構(gòu)域和來源于IgG1的CH3結(jié)構(gòu)域的雜交體。22.權(quán)利要求21的多聚體融合蛋白，其中每一個(gè)重鏈Fc區(qū)中選自位置234上的苯丙氨酸殘基、位置296上的苯丙氨酸殘基、位置327上的甘氨酸殘基、位置330上的絲氨酸殘基和位置331上的絲氨酸殘基的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已被另一種氨基酸取代。23.權(quán)利要求21的多聚體融合蛋白，其中位置234上的苯丙氨酸殘基已被亮氨酸殘基取代，并且位置296上的苯丙氨酸殘基已被酪氨酸殘基取代(F234L/F296Y)。24.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其包含增加抑制巨噬細(xì)胞對抗體包被的靶細(xì)胞的吞噬作用的效力的一個(gè)或多個(gè)突變。25.權(quán)利要求24的多聚體融合蛋白，其包含選自F234L、F234L和F296Y、G327A、G327A和S331P、S330A和S331P以及G327A和S330A的一個(gè)或多個(gè)突變。26.權(quán)利要求25的多聚體融合蛋白，其中所述重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG4的CH2結(jié)構(gòu)域和來源于IgG1或IgG4的CH3結(jié)構(gòu)域。27.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其包含減少細(xì)胞因子釋放的一個(gè)或多個(gè)突變。28.權(quán)利要求27的多聚體融合蛋白，其包含選自L234F、L234F和P331S、A327G以及Y296F的一個(gè)或多個(gè)突變。29.權(quán)利要求28的多聚體融合蛋白，其中所述重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG1的CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。30.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其包含減少血小板活化的一個(gè)或多個(gè)突變。31.權(quán)利要求30的多聚體融合蛋白，其包含選自L234F以及L234F和P331S的一個(gè)或多個(gè)突變。32.權(quán)利要求31的多聚體融合蛋白，其中所述重鏈Fc區(qū)包含來源于IgG1的CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。33.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的多聚體融合蛋白，其包含改變其Fc-受體結(jié)合特征譜的一個(gè)或...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：F·法拉赫阿拉尼，R·A·格里芬，D·P·漢弗萊斯，S·J·彼得斯，B·J·史密斯，P·E·斯蒂芬斯，
申請(專利權(quán))人：UCB生物制藥私人有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：比利時(shí);BE