一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物，所述生物標志物包括KRT9蛋白或其活性片段；編碼所述KRT9蛋白的mRNA；編碼所述KRT9蛋白的基因。本發明專利技術公開了一種與腦卒中相關的蛋白KRT9，并進一步證實該KRT9蛋白或其活性片段在腦卒中組織中表達上調。利用該蛋白檢測缺血性腦卒中不僅能夠快速有效的做到早期檢測，而且為基因治療、藥物治療等臨床應用提供了治療靶點和重要依據。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物醫藥領域，具體涉及一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物及其應用。
技術介紹
腦卒中又稱“中風”、“腦血管意外”(cerebralvascular accident，CVA)。是一種急性腦血管疾病，是由于腦部血管突然破裂或因血管阻塞導致血液不能流入大腦而引起腦組織損傷的一組疾病，包括缺血性和出血性卒中。缺血性腦卒中又稱腦梗死，中醫稱之為中風。本病系由各種原因所致的局部腦組織區域血液供應障礙，導致腦組織缺血缺氧性病變壞死，進而產生臨床上對應的神經功能缺失表現。缺血性腦卒中依據發病機制的不同分為腦血栓形成、腦栓塞和腔隙性腦梗死等主要類型。其中腦血栓形成是腦梗死最常見的類型，約占全部腦梗死的60％，因而通常所說的‘腦梗死’實際上指的是腦血栓形成。缺血性腦卒中病因：由于缺血性腦卒中的主要分類——腦血栓形成的病因基礎主要為動脈粥樣硬化，因而產生動脈粥樣硬化的因素是發生腦梗死最常見的病因。由于動脈粥樣硬化好發于大血管的分叉處和彎曲處，故腦血栓形成的好發部位為頸動脈的起始部和虹吸部、大腦中動脈起始部、椎動脈及基底動脈中下段等。當這些部位的血管內膜上的斑塊破裂后，血小板和纖維素等血液中有形成分隨后黏附、聚集、沉積形成血栓，而血栓脫落形成栓子可阻塞遠端動脈導致缺血性腦卒中。近期在全球范圍內進行的INTERSTROKE研究結果顯示：腦梗死風險中的90％可歸咎于10個簡單的危險因素，它們依次是高血壓病、吸煙、腰臀比過大、飲食不當、缺乏體育鍛煉、糖尿病、過量飲酒、過度的精神壓力及抑郁、有基礎心臟疾病和高脂血癥。腦卒中是我國繼心血管疾病、惡性腫瘤疾病之后的第三大致死性疾病，每年發病率為150/10萬，死亡率為120/10萬。腦卒中分為缺血卒中和出血性卒中。其中，臨床上缺血性卒中更為常見，約占全部腦卒中的70％。約有50％～75％的腦卒中與高血壓有關，高血壓史使腦卒中的風險增加2.5倍以上。如果應用更嚴格的高血壓定義——血壓＞160/90mm Hg，這種風險因素的相關性會增加。缺血性腦卒中的病死率約為10％，致殘率可達50％以上。存活者的復發率高達40％，缺血性腦卒中復發可嚴重削弱患者的日常生活和社會功能，而且可明顯增加死亡率。目前，識別引起腦卒中的原因是主要根據頭顱CT掃描，核磁共振成像技術和動脈造影。但CT、MRI掃描并不是完全可信的方法，因為在診斷早期CT對缺血性腦卒中只有16％的靈敏度，而對于出血性腦卒中卻有89％的靈敏度。20％缺血性腦卒中并不能夠被MRI掃描技術探測到。且影像診斷技術并不存在于所有診療中心中，這些都阻礙了腦卒中的快速診斷和藥物的及時應用。生物標志物是藥物研發過程中的有效工具，它提供了藥物性能及疾病進程的相關信息，反映了具體的藥物治療效果。糖尿病及免疫性疾病等多種疾病都已經根據生物標志物進行治療。然而，在腦血管病中生物標志物仍相對缺乏。因此，探索缺血性腦卒中的生物標志物有著重要的意義。由于傳統診斷不足，找到診斷腦卒中的新穎的生物標志成為了一種迫切的需求。針對辨認生物學標志物用iTRAQ和高分辨率的質譜來進行相對定量是一項很有前途的技術。識別體液中的缺血性腦卒中生物學標志物對于影像學診斷具有輔助性作用。
技術實現思路
為了實現腦卒中的早期發現，早期干預，本專利技術的目的在于提供一種角蛋白，I型細胞骨架蛋白9(Keratin，type I cytoskeletal 9(KRT9))蛋白在作為缺血性腦卒中生物標志物中的應用。為實現上述目的，本專利技術首先提供了一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物，所述生物標志物包括KRT9蛋白或其活性片段；編碼所述KRT9蛋白的mRNA；編碼所述KRT9蛋白的基因。本專利技術的第二方面提供了所述生物標志物在診斷缺血性腦卒中和/或評估罹患缺血性腦卒中風險的產品中的應用。本專利技術的第三方面提供了所述生物標志物在評估腦卒中的治療效果或者判斷腦卒中的預后產品中的應用。優選的，所述產品包括芯片或試劑盒。優選的，所述KRT9蛋白在缺血性腦卒中生物樣品中表達上調。優選的，所述檢測包括基因水平的檢測和蛋白水平的檢測。如，所述基因水平的檢測包括real-time PCR法、Northern blot、Southern blot、基因芯片、原位雜交或RNA酶保護實驗等。所述蛋白水平的檢測包括免疫檢測、Western blot或蛋白芯片等。為了簡化實驗程序，所述蛋白水平的檢測還包括蛋白檢測試劑盒，如ELISA檢測試劑盒、膠體金檢測試劑盒、免疫共沉淀試劑盒、化學發光試劑盒、免疫熒光試劑盒等。所述試劑盒中一般配備有相應的使用說明書，說明書一般包括公司標志及名稱、試劑盒名稱、試劑盒組成、保質期、使用領域、使用方法等項目，用戶按照說明書不需或只需少量的優化即可得到滿意的結果。優選的，所述免疫方法為ELISA法檢測和/或膠體金檢測。所述ELISA法為使用ELISA檢測試劑盒，所述的試劑盒包括：包被KRT9單克隆抗體的固相載體，酶標抗體，酶的底物，蛋白標準品，陰性對照品，稀釋液，洗滌液，酶反應終止液等。本專利技術的第四方面提供了所述生物標志物在篩選預防或治療腦卒中的藥物的應用。優選的，所述KRT9蛋白在缺血性腦卒中生物樣品中表達上調。優選的，所述的樣品為血液，如血清、血漿或全血。本專利技術的第五方面提供了能夠抑制血液中KRT9蛋白表達的物質在制備預防或治療腦卒中藥物中的應用。本專利技術的第六方面提供了用于檢測腦卒中發生的系統，該系統包括檢測KRT9蛋白或其活性片段的物質。優選的，所述系統包括數據處理裝置，所述數據處理裝置內設采集比較模塊a和處理模塊b，所述采集比較模塊a的功能為：采集并比較待測者與對照者的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量；所述處理模塊b的功能為根據比較的結果按照如下方法確定待測者是否為腦卒中患者：若所述待測者的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量顯著高于所述對照組的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量，則所述待測者為或候選為腦卒中患者；反之，則所述待測者不為或候選不為腦卒中患者；所述對照者為健康人。優選地，處理模塊b中判斷上調的標準是待測者的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量比對照者至少提高30％。優選地，處理模塊b中判斷上調的標準是待測者的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量比對照者至少提高60％。優選地，處理模塊b中判斷上調的標準是待測者的組織樣本中所述KRT9蛋白或其活性片段的表達量比對照者至少提高90％。本專利技術的有益效果如下：本專利技術公開了一種與腦卒中相關的蛋白KRT9，并進一步證實該KRT9蛋白或其活性片段在腦卒中組織中表達上調。利用該蛋白檢測腦卒中不僅能夠快速有效的做到早期檢測，而且為基因治療、藥物治療等臨床應用提供了治療靶點和重要依據。附圖說明圖1本專利技術實施例2中的色譜圖；圖2本專利技術實施例3中的KRT9表達量標準曲線。具體實施方式以下實施例用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用的試劑可以商業購買得到。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常為本領域常規方法。本專利技術的專利技術人對6例腦卒中樣本及6例對照樣本進行高通量測序，結合生物信息學方法進行篩選，挑選出候本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物，其特征在于，所述生物標志物包括KRT9蛋白或其活性片段；編碼所述KRT9蛋白的mRNA；編碼所述KRT9蛋白的基因。

【技術特征摘要】
1.一種檢測缺血性腦卒中的生物標志物，其特征在于，所述生物標志物包括KRT9蛋白或其活性片段；編碼所述KRT9蛋白的mRNA；編碼所述KRT9蛋白的基因。2.如權利要求1所述的生物標志物在診斷缺血性腦卒中和/或評估罹患缺血性腦卒中風險的產品中的應用。3.如權利要求1所述的生物標志物在評估腦卒中的治療效果或者判斷腦卒中的預后產品中的應用。4.如權利要求2或3所述的應用，其特征在于，所述產品包括芯片或試劑盒。5.如權利要求2或3所述的應用，其特征在于，所述KRT9蛋白在缺血性腦卒中生物樣品中表達上調。6.如權利要求1所述的生物標志物在篩選預防或治療腦卒中的藥物的應用。7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述KRT9蛋白在缺血性腦卒中生物樣品中表達上調。8.如權利要求7的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李永旺，麻莉，康艷娜，馬玉恒，張樹峰，韓月鵬，
申請(專利權)人：李永旺，
類型：發明
國別省市：北京;11