本發明專利技術提供了一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物包括豬肺炎支原體全菌抗原和免疫原性蛋白，還包括獸醫學上可接受的載體，其中免疫原性蛋白包括XylF、P78蛋白中的至少一種。本發明專利技術還公開了含所述疫苗組合物在制備預防和/或治療豬支原體肺炎的藥物中的應用。所述疫苗組合物比單獨使用全菌疫苗或亞單位疫苗免疫時，全菌抗原或免疫原性蛋白的含量明顯降低，且免疫效果增強；其中的蛋白部分可通過基因工程手段進行大量重組表達，不僅耗時短，還可便于大規模生產。另，所述疫苗組合物免疫動物時對其所含的豬肺炎支原體抗原對其它抗原的免疫效果無影響。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于獸用生物制品
，具體涉及豬支原體肺炎疫苗組合物及其應用。
技術介紹
豬支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine,MPS)又稱豬喘氣病或豬地方性流行性肺炎(李彥明,張映.豬肺炎支原體生物學研究進展,動物醫學進展,2003,24(3):25-27)，是由豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)所引起的一種豬接觸性慢性呼吸道疾病，分布十分廣泛，以慢性、接觸性、高度傳染性、高發病率以及低死亡率等為特點，主要表現為咳嗽和呼吸困難，解剖可見肺組織呈肉變或大理石樣病變。該病還可導致豬只生長遲緩，飼料轉化率低，嚴重危害著養豬業的發展。衣阿華大學Ross研究發現：Mhp感染后淋巴細胞產生抗體的能力下降，細胞免疫力下降，肺泡巨噬細胞對病原的吞噬和清除能力亦下降，抑制性T細胞的活動增強，導致呼吸道免疫力減弱，抗病力下降，從而使其他病原體更容易侵入，可繼發感染豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環等，從而導致多種疫苗接種失敗。Mhp可經空氣傳播，易與其他細菌性疾病如豬肺疫、傳染性胸膜肺炎等并發(王茂文,豬肺炎支原體病的特點及其防制措施.畜禽業,2008(2):16-17；Dee S,Otake S,Oliveira S,et al.Evidence of long distance airborne transport of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and Mycoplasma hyopneumoniae.Veterinary research,2009,40(4):39)，對養豬業造成重大的經濟損失，是當前最常發生、最廣流行、最難凈化的重要疫病之一。目前，對于豬支原體肺炎的防治主要是使用藥物、疫苗接種。其中，藥物主要是抗生素，雖有一定的效果，但國家對抗生素的濫用日
益重視、管理嚴格。應用的疫苗主要是弱毒疫苗、滅活疫苗，弱毒疫苗需要胸腔注射，對動物刺激大，易引起應激甚至死亡，導致推廣困難；滅活疫苗雖通過肌肉注射、操作便易，但會出現一過性體溫升高以及短暫性精神沉郁、食欲減退、過敏等副反應，而且主要以輝瑞、海博萊、勃林格為首的國外公司壟斷，疫苗價格昂貴致使防疫成本變高。另外，目前商品化的疫苗是通過在含血清的培養基上生長所得的支原體生物體制備而成，但是引起了對于免疫物質中存在的血清組分(如免疫復合物或非免疫原性特異性蛋白)誘導副反應發生(見中國專利CN104334186A)。近年來，人們開始嘗試利用現代分子生物學手段從研究Mhp的致病機理和主要抗原蛋白入手，利用外源表達載體獲得大量Mhp相關的抗原蛋白，同時使其他相關刺激因子重組表達而制備成新型豬支原體肺炎亞單位疫苗。這種新型的豬支原體肺炎亞單位疫苗不含全菌疫苗的核酸，不僅不存在滅活不徹底造成的安全隱患，而且由于其不含全菌的所有抗原，有利于疾病的凈化。但目前豬支原體肺炎亞單位疫苗免疫效果不佳，不能給豬提供完全的保護(Fagan PK,Djordievic SP.Chin J,et al.Oral immunization of mice with attenuated Salmonella typhimurium aroA expressing a recombinant Mycoplasma hyopeumoniae antigen(NrdF).Infection and immunity,1997,65:2502-2507)。
技術實現思路
為了解決現有技術的不足，本專利技術提供了一種豬支原體肺炎疫苗組合物及其應用。本專利技術的第一方面在于提供一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述豬支原體肺炎疫苗組合物包括豬肺炎支原體免疫原性蛋白XylF蛋白和/或P78蛋白。術語“豬支原體肺炎”在臨床上的癥狀包括(但不限于)：呼吸癥狀(嚴重急性臨床肺炎、咳嗽、呼吸困難、呼吸速迫)、發熱、高度傳染性、高發病率、低死亡率、壞死性細胞支氣管炎及繼發性細菌性呼吸道感染增加。術語“豬支原體肺炎疫苗組合物”是指能夠用于預防和/或治療由豬肺炎支原體感染所知病癥或疾病的疫苗，該疫苗組合物可包括任何能夠有效預防和/或治療豬肺炎支原體感染的疫苗，能夠用于豬支原體肺炎疫苗組合物包括(但不限于)完全或部分豬支原體肺炎細胞制劑、上清液、滅活或改良活體疫苗、亞單位疫苗。所述滅活疫苗是指含有不再能夠復制或生長的感染性生物體或病原體的疫苗組合物，病原體可以通過各種方法包括凍融、化學處理(例如，用硫柳汞或福爾馬林處理)、聲處理、照射、熱或任何其它足以阻止生物體復制或生長的常用方法來實現滅活而維持其免疫原性。所述改良活體疫苗是指在人工條件下促使其變異，失去致病性但保留免疫原性、繁衍能力和剩余毒力的疫苗，接種后在動物體內有一定程度的繁殖或復制，但不會導致發病。所述“亞單位疫苗”包含一個或多個豬肺炎支原體衍生的多肽或蛋白質，或所述多肽或蛋白質的免疫原性片段，或編碼所述一個或多個豬肺炎支原體衍生多肽或蛋白質，或所述多肽或蛋白質免疫原性片段的一個或多個豬肺炎支原體基因或核酸，且所述基因或核酸能在豬體內進行表達。豬肺炎支原體多肽、蛋白質、所述多肽和蛋白質的免疫原性片段、或豬肺炎支原體基因或核酸可用于本領域公知技術合成或重組制備。術語“預防和/或治療”在涉及豬肺炎支原體感染時是指抑制豬肺炎支原體細菌的復制、抑制豬肺炎支原體的傳播或防止豬肺炎支原體在其宿主體內定居，以及減輕豬肺炎支原體感染所之疾病或病癥的癥狀。若細菌荷載量減少、肺部感染減輕和/或攝食量和/或生長增加，那么就可以認為所述治療達到了治療效果。術語“豬”是指任何屬于豬科(Suidae)成員的動物，即小豬(piglets)，swine，pigs，porcine，大母豬(sows)，小母豬(gilts)，barrows，公豬(boars)以及豬科的成員。術語“免疫原性蛋白”包括免疫活性的全蛋白和/或蛋白質片段，施用于宿主后，能夠引起針對蛋白質的體液和/或細胞類型的免疫應答。優選地，蛋白質片段使得它具有與全蛋白基本相同的免疫活性，具體
為至少一個表位或抗原決定簇，或基本上由至少一個表位或抗原決定簇組成，或由至少一個表位或抗原決定簇組成。術語“表位”涉及能夠誘導體液類型(B細胞)和/或細胞類型(T細胞)的免疫應答的蛋白質位點。術語“免疫原性蛋白”進一步考慮了對序列的缺失、添加和置換，特別優選地置換一般在性質上是保守的，即在氨基酸家族內發生的那些置換，如氨基酸一般分成4個家族：(1)酸性-天冬氨酸和谷氨酸，(2)堿性-賴氨酸、精氨酸、組氨酸，(3)非極性-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有時分類為芳香族氨基酸。可合理地預測用異亮氨酸或纈氨酸分別替換亮氨酸，或反之亦然；用谷氨酸替換天冬氨酸，或反之亦然；或氨基酸用結構上相關的氨基酸的相似保守替換，對生物活性將沒有主要影響。術語“XylF蛋白”為ABC轉運木糖結合脂蛋白(ABC transporter xylose-binding lipoprotein)的免疫原性片段，約446AA組成。術語“P78蛋白”為脂蛋白(lipoprot本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物包括豬肺炎支原體免疫原性蛋白XylF蛋白和/或P78蛋白。
【技術特征摘要】
1.一種豬支原體肺炎疫苗組合物，所述疫苗組合物包括豬肺炎支原體免疫原性蛋白XylF蛋白和/或P78蛋白。2.根據權利要求1所述疫苗組合物，其特征在于，所述XylF蛋白、P78蛋白的氨基酸序列為J株(NCBI登錄號為AE017243.1)、168株(NCBI登錄號為CP002274.1)、168-L株(NCBI登錄號為CP003131.1)、7448株(NCBI登錄號為AE017244.1)、232株(NCBI登錄號為AE017332.1)、7422株(NCBI登錄號為CP003802.1)中任一毒株相應蛋白的氨基酸序列。3.根據權利要求1所述疫苗組合物，其特征在于，所述XylF蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3，所述P78蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6。4.根據權利要求1所述疫苗組合物，其特征在于，所述疫苗組合物還包括豬肺炎支原體全菌抗原。5.根據權利要求4所述疫苗組合物，其特征在于，所述豬肺炎支原體全菌抗原為滅活的、改良的活的或減毒的豬肺炎支原體，或豬肺炎支原體上清液。6.根據權利要求5所述疫苗組合物，其特征在于，所述豬肺炎支原體全菌抗原為...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張許科，孫進忠，廖永洪，王瑩，田克恭，
申請(專利權)人：普萊柯生物工程股份有限公司，
類型：發明
國別省市：河南;41
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