牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種牛奶中β?受體激動劑含量的定性檢測方法，包括：(1)通過酶聯免疫法分別對本底物、陽性質控品及待測牛奶進行檢測，得到本底物的OD值、陽性質控品的OD值及待測牛奶的OD值，其中，所述陽性質控品為含有已知含量β?受體激動劑的復原乳；所述本底物為不含β?受體激動劑的復原乳，所述復原乳是通過將購自新西蘭全脂乳粉溶解于水中所得到的；(2)基于檢測結果，對所述待測牛奶進行定性判定。本發明專利技術的方法操作簡便、準確性強。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及食品領域。具體地，本專利技術涉及牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法。
技術介紹
β-受體激動劑多由苯乙醇胺與叔丁基或異丙基連接而成，根據母核結構中苯環上取代基的不同分為苯胺型、苯酚型和間苯二酚型3類，代表化合物有克侖特羅、沙丁胺醇等。β-受體激動劑在動物體內能促進脂肪分解，增加蛋白質的合成，提高酮體的瘦肉率，但是大劑量的使用容易在可食性動物組織中殘留。人類食用了有藥物殘留的組織后會引發呼吸加劇、頭痛、惡心和肌肉震顫等中毒癥狀，可誘發和加重心腦血管系統患者的病情，甚至導致死亡。因而，我國已經明確將這類藥物列入飼養食品動物禁用藥品目錄。然而，目前對β-受體激動劑含量的檢測方法仍有待改進。
技術實現思路
本專利技術旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本專利技術提出一種牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法，該方法操作簡便、準確性強。需要說明的是，本專利技術是基于專利技術人的下列發現而完成的：動物源性食品中β-受體激動劑多采用氣相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜-質譜聯用法(HPLC-MS)進行檢測。但是，利用色譜法檢測處理步驟較多，耗時長，消耗大量的有機溶劑，而且兩相分離時容易造成被測物的損失，不適用于大批量樣品檢測。進而，專利技術人發現，利用酶聯免疫法檢測β-受體激動劑具有操作簡便、反應快速、無需大量待測液即可完成檢測的優點，可以快速且準確地對大批量的牛奶進行檢測。但是，由于牛奶本身成分差異大，對試劑干擾較大，存在假陽性發生率較高的缺陷。有鑒于此，專利技術人意外地發現，將購自新西蘭全脂乳粉溶解于水中制成復原乳，以含有已知含量β-受體激動劑的復原乳作為陽性質控品，以不含β-受體激動劑的復原乳作為本底物，利用酶聯免疫法分別測定待測牛奶OD值、陽性質控品OD值及本底物OD值，從而能夠基于檢測結果對待測牛奶的β-受體激動劑含量進行定性判斷。該方法操作簡便、準確性強。為此，本專利技術提出了一種牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法。根據本專利技術的實施例，所述方法包括：(1)通過酶聯免疫法分別對本底物、陽性質控品及待測牛奶進行檢測，得到本底物的OD值、陽性質控品的OD值及待測牛奶的OD值，其中，所述陽性質控品為含有已知含量β-受體激動劑的復原乳；所述本底物為不含β-受體激動劑的復原乳，所述復原乳是通過將購自新西蘭全脂乳粉溶解于水中所得到的；(2)基于下列標準，對所述待測牛奶進行定性判定：(a)所述待測牛奶的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β-受體激動劑含量大于所述陽性質控品中β-受體激動劑含量的指示；(b)所述待測牛奶的OD值大于或等于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β-受體激動劑含量小于或等于所述陽性質控品中β-受體激動劑含量的指示；或(c)所述本底物的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是檢測結果無效的指示。專利技術人發現，在檢測牛奶中β-受體激動劑含量過程中，為提高檢測效率、節約成本，可以先采用酶聯免疫法對待測牛奶進行定性檢測，以初步確定β-受體激動劑含量的范圍，再對無法確定含量范圍或需要進一步確定準確含量的待測牛奶進行色譜檢測。定性檢測主要是將檢測試劑分別與待測牛奶、陽性質控品、本底物進行反應，并測定反應產物的OD值，通過OD值的比較以確定含量。專利技術人意外地發現，利用不同物質作為陽性質控品所得到的檢測結果不同。經過深入研究發現，對于不同廠家或不同產地的牛奶而言，因本身成分并不相同，作為陽性質控品進行檢測時，會對反應體系造成不同影響，某些產品對反應體系的干擾較大，導致檢測結果不準確。專利技術人驚奇地發現，將購自新西蘭全脂乳粉溶解于水中所得到的復原乳對反應體系的干擾較小，通過向上述復原乳中加入已知含量β-受體激動劑，制成陽性質控品，能夠有效地避免假陽性或假陰性現象出現，從而保證檢測結果的準確性。具體地，新西蘭全脂乳粉可以購自恒天然公司。進一步地，專利技術人發現，僅比較陽性質控品與待測牛奶的OD值，并不能完全準確地保證結果的準確性，還需比較本底物(與陽性質控品的區別僅在于不含已知含量β-受體激動劑)與陽性質控品的OD值。若本底物的OD值低于陽性質控品的OD值，則說明檢測試劑、操作過程等出現問題，檢測結果無效。由此，根據本專利技術實施例的牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法能夠準確、快速地對牛奶中β-受體激動劑含量進行定性檢測，且操作簡便。需要說明的是，本領域技術人員可以根據實際需要確定陽性質控品中β-受體激動劑的含量。根據本專利技術的實施例，所述陽性質控品含有0.15ng/mL的β-受體激動劑。在此條件下，待測樣品本底(除β-受體激動劑)的OD值顯著低于陽性質控品的OD值，從而避免了樣品本底對檢測結果的影響，防止出現假陽性現象。若陽性質控品中β-受體激動劑濃度太高，容易造成陽性樣品的漏檢，存在風險；而濃度過低，測定待測樣品OD值時，樣品本底的OD值與陽性質控品的OD值接近，導致出現假陽性現象。根據本專利技術的實施例，在進行步驟(1)之前，分別將所述本底物、陽性質控品及待測牛奶進行離心處理，并將收集的上清液進行所述酶聯免疫法檢測。根據本專利技術的另一個實施例，所述離心處理是在2～8℃的溫度、3000g的轉速下進行10min。專利技術人發現，通過酶聯免疫法進行檢測之前，分別將本底物、陽性質控品及待測牛奶進行離心處理，能夠有效地除去雜質，從而避免其對反應體系造成干擾，影響檢測結果。專利技術人經過大量實驗得到上述最優離心處理條件，在此條件下能夠有效地除去雜質，從而保證檢測結果的準確性。根據本專利技術的實施例，所述OD值是在450nm波長下進行測定的。專利技術人發現，在此波長下，β-受體激動劑具有最大的光吸收，進而能夠基于OD值結果對牛奶中β-受體激動劑含量進行定性檢測。根據本專利技術的實施例，所述復原乳中新西蘭全脂乳粉與水的質量比為1:7。專利技術人經過大量實驗發現，將新西蘭全脂乳粉按照1:7的質量比溶解于水中所得到的復原乳的干擾較小，從而保證檢測結果的準確性。在本專利技術的第二方面，本專利技術提出了另一種牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法。根據本專利技術的實施例，所述方法包括：1)分別將本底物、陽性質控品及待測牛奶在2～8℃的溫度、3000g的轉速下離心10min，并收集上清液，分別將所述上清液加入微孔管中，每孔50μL，其中，所述陽性質控品為含有已知含量β-受體激動劑的復原乳；所述本底物為不含β-受體激動劑的復原乳，所述復原乳是通過將購自新西蘭全脂乳粉按照1:7的質量比溶解于水中所得到的；2)分別向含有所述本底物、陽性質控品和待測牛奶的微孔管中加入25μL酶結合物；3)分別向含有所述酶結合物的微孔管中加入25μL抗體溶液；4)用膠條封板，并搖板1min，于2℃-8℃下在暗處孵育1小時；5)除去所述微孔管中的液體，并向所述微孔管中注入250μL清洗液，混勻并倒掉微孔管中液體，重復操作3遍；6)分別向所述微孔管中加入100μL底物溶液，置于20-25℃下暗處溫育30min；7)分別向含有所述底物溶液的微孔管中加入100μL終止液，并讀取450nm波長下的吸光值；8)基于下列標準，對所述待測牛奶進行定性判定：(a)所述待測牛奶的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β-受體激動劑含量大于所述陽性質控品中β-受體激動劑含量的指示；(b)所述待測本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種牛奶中β?受體激動劑含量的定性檢測方法，其特征在于，包括：1)分別將本底物、陽性質控品及待測牛奶在2～8℃的溫度、3000g的轉速下離心10min，并收集上清液，分別將所述上清液加入微孔管中，每孔50μL，其中，所述陽性質控品為含有已知含量β?受體激動劑的復原乳；所述本底物為不含β?受體激動劑的復原乳，所述復原乳是通過將購自新西蘭全脂乳粉按照1:7的質量比溶解于水中所得到的；2)分別向含有所述本底物、陽性質控品和待測牛奶的微孔管中加入25μL酶結合物；3)分別向含有所述酶結合物的微孔管中加入25μL抗體溶液；4)用膠條封板，并搖板1min，于2℃?8℃下在暗處孵育1小時；5)除去所述微孔管中的液體，并向所述微孔管中注入250μL清洗液，混勻并倒掉微孔管中液體，重復操作3遍；6)分別向所述微孔管中加入100μL底物溶液，置于20?25℃下暗處溫育30min；7)分別向含有所述底物溶液的微孔管中加入100μL終止液，并讀取450nm波長下的吸光值；8)基于下列標準，對所述待測牛奶進行定性判定：(a)所述待測牛奶的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β?受體激動劑含量大于所述陽性質控品中β?受體激動劑含量的指示；(b)所述待測牛奶的OD值大于或等于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β?受體激動劑含量小于或等于所述陽性質控品中β?受體激動劑含量的指示；或(c)所述本底物的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是檢測結果無效的指示。...

【技術特征摘要】
1.一種牛奶中β-受體激動劑含量的定性檢測方法，其特征在于，包括：1)分別將本底物、陽性質控品及待測牛奶在2～8℃的溫度、3000g的轉速下離心10min，并收集上清液，分別將所述上清液加入微孔管中，每孔50μL，其中，所述陽性質控品為含有已知含量β-受體激動劑的復原乳；所述本底物為不含β-受體激動劑的復原乳，所述復原乳是通過將購自新西蘭全脂乳粉按照1:7的質量比溶解于水中所得到的；2)分別向含有所述本底物、陽性質控品和待測牛奶的微孔管中加入25μL酶結合物；3)分別向含有所述酶結合物的微孔管中加入25μL抗體溶液；4)用膠條封板，并搖板1min，于2℃-8℃下在暗處孵育1小時；5)除去所述微孔管中的液體，并向所述微孔管中注入250μL清洗液，混勻并倒掉微孔管中液體，重復操作3遍；6)分別向所述微孔管中加入100μL底物溶液，置于20-25℃下暗處溫育30min；7)分別向含有所述底物溶液的微孔管中加入100μL終止液，并讀取450nm波長下的吸光值；8)基于下列標準，對所述待測牛奶進行定性判定：(a)所述待測牛奶的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β-受體激動劑含量大于所述陽性質控品中β-受體激動劑含量的指示；(b)所述待測牛奶的OD值大于或等于所述陽性質控品的OD值，是所述待測牛奶中β-受體激動劑含量小于或等于所述陽性質控品中β-受體激動劑含量的指示；或(c)所述本底物的OD值小于所述陽性質控品的OD值，是檢測結果無效的指示。2.一種...

【專利技術屬性】
技術研發人員：解鑫，喻東威，趙媛，梁春梅，許璐，袁鳳琴，任麗，劉美霞，李秋琴，宋曉東，
申請(專利權)人：內蒙古蒙牛乳業集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：內蒙古;15