本發明專利技術涉及一種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，該方法包括如下步驟：(1)、HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，混勻后肝腫瘤細胞密度為5×106/ml，混合細胞在2-8℃條件下將運輸至放療科；(2)、將混合細胞放置于血液輻照容器，設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2；使用醫用直線加速器進行30Gy輻照，該直線加速器能量為6MeV；(3)、輻照后使用密度為1.063g/ml的Percoll行密度梯度離心法分離腫瘤細胞株和紅細胞。本發明專利技術的有益效果為：線性加速器30Gy有效且安全的滅活混雜在回收紅細胞中的HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫學
，具體涉及一種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法。
技術介紹
術中自體血液回收方法有效節約血液資源，并大大減少異體輸血反應，已廣泛用于多種手術。但在腫瘤手術中的應用一直有爭議，主要擔心手術回收的血液含有腫瘤細胞，并經濃縮后回輸給患者會引起腫瘤的轉移。僅僅使用自體血液回收機是不能完全去除回收血液中的腫瘤細胞。目前白細胞過濾器和γ射線輻照是研究最多的兩種方法。但有報道腫瘤手術中回收血液混有的腫瘤細胞數量超過107時，使用白細胞過濾器是不安全的。而術中腫瘤破裂就會引起回收血液的腫瘤細胞負荷大大增加，如超過2×107/200ml。故在腫瘤手術中使用白細胞過濾進行自體血液回收仍然是不安全的。而有報道使用137Cs血液輻照儀對回收含有腫瘤細胞的血液進行γ射線輻照，可以有效且安全的殺滅至少10log的腫瘤細胞。盡管如此，關于γ射線輻照仍有一些問題。因為γ射線源一般為137Cs和60Co，使用這些活性射線源有很多的安全問題：需要合適有效措施來保障活性射線源的放置的安全，防治非法分子盜取活性射線源嚴重危害公共安全；需要特殊的保護措施和檢測方法來保障員工的身體安全。使用γ射線輻照的方法另外很大的缺陷就是很難普及和推廣應用，因為它的安全問題及費用問題，很多醫院是沒有血液輻照儀的，只有少數的血液中心才可以獲得。若使用γ射線輻照就需要外送至血液中心，這樣會大大延長血液回收的時間。眾所周知X線直線加速器的主要用于腫瘤病人的放療，而X線直線加速器是γ射線源最好的替代方法。目前在一些腫瘤醫院，直線加速器也廣泛的用于血液輻照。研究表明同劑量的X線輻照和137Cs的γ輻照的生物作用是沒有臨床差異的，同樣的最低25Gy可以有效預防輸血相關性移植物抗宿主病，而不超過50Gy的劑量就不損傷血液細胞。但是X線直線加速器用于滅活回收血液中混有的腫瘤細胞沒有研究過。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，研究X線直線加速器滅活回收血液中混有的肝腫瘤細胞(HepG2,SK-Hep1,Huh7)的有效性，及對回收血液中紅細胞質量的影響。本專利技術的目的是通過如下技術方案來完成的。這種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，該方法包括如下步驟：(1)、HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，混勻后肝腫瘤細胞密度為5×106/ml，混合細胞在2-8℃條件下將運輸至放療科；(2)、將混合細胞放置于血液輻照容器，設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2；使用醫用直線加速器進行30Gy輻照，該直線加速器能量為6MeV；(3)、輻照后使用密度為1.063g/ml的Percoll行密度梯度離心法分離腫瘤細胞株和紅細胞。采用MTT法、EdU法、平板克隆形成法、裸鼠皮下移植瘤模型檢測輻照后腫瘤細胞株的增殖活力、DNA復制、克隆性、成瘤性；同時檢測輻照后紅細胞的Na+-K+-ATPase活性，2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平，游離血紅蛋白(free Hb)水平，滲透脆性，及血氣值變化。本專利技術的有益效果為：線性加速器30Gy有效且安全的滅活混雜在回收紅細胞中的HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量。使用X射線的線性加速器與血液輻照儀γ射線放射源相比有更多優勢，不僅更有效的以更低劑量滅活肝腫瘤細胞；而且不是活性放射源，對操作員更安全；同時不需要運輸至血液中心進行輻照，節約了成本/時間。附圖說明圖1是30Gy和50Gy的X線輻照完全抑制各株腫瘤細胞的克隆形成的示意圖；圖2是30Gy和50Gy的X線輻照完全抑制各株腫瘤細胞的皮下移植瘤的形成的示意圖；圖3是X線輻照對紅細胞質量的影響示意圖。具體實施方式下面通過具體實施方式對本專利技術作進一步闡述，實施例將幫助更好地理解本專利技術，但本專利技術并不僅僅局限于下述實施例。本專利技術所述的這種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，該方法包括如下步驟：(1)、HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，混勻后肝腫瘤細胞密度為5×106/ml，混合細胞在2-8℃條件下將運輸至放療科；(2)、將混合細胞放置于血液輻照容器，設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2；使用醫用直線加速器進行30Gy輻照，該直線加速器能量為6MeV；(3)、輻照后使用密度為1.063g/ml的Percoll行密度梯度離心法分離腫瘤細胞株和紅細胞。采用MTT法、EdU法、平板克隆形成法、裸鼠皮下移植瘤模型檢測輻照后腫瘤細胞株
的增殖活力、DNA復制、克隆性、成瘤性；同時檢測輻照后紅細胞的Na+-K+-ATPase活性，2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平，游離血紅蛋白(free Hb)水平，滲透脆性，及血氣值變化。對比實驗：(1)、HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，肝腫瘤細胞接種密度為5×106/ml，(n＝14)，混合細胞分：A(對照組)，B(30Gy)，C(50Gy)。2-8℃條件下運輸至我院放療科，使用線性加速器(Varian Trilogy,USA)，能量為6MeV。(2)、B組或C組放置于血液輻照容器，其材質為聚酸甲酯，大小為24×24×5.5cm3，箱子頂和壁為1cm厚，底為0.5cm。設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2。B組或C組使用醫用直線加速器(Varian Trilogy,USA)行30Gy或50Gy輻照，該直線加速器能量為6MeV，A組不輻照；(3)、輻照后使用密度為1.063g/ml的Percoll行密度梯度離心法分離腫瘤細胞株和紅細胞。采用MTT法、EdU法、平板克隆形成法、裸鼠皮下移植瘤模型檢測輻照后腫瘤細胞株的增殖活力、DNA復制、克隆性、成瘤性。同時檢測輻照后紅細胞的Na+-K+-ATPase活性，2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平，游離血紅蛋白(free Hb)水平，滲透脆性，及血氣值變化。其中，圖1X線輻照對腫瘤細胞的克隆形成的殺滅作用。A三株腫瘤細胞的未輻照組第7天的克隆形成Giemsa染色圖片；B三株腫瘤細胞第14的克隆形成的統計圖。圖2X線輻照對腫瘤細胞的皮下移植瘤形成的殺滅作用。各輻照劑量HepG2(A),Huh7(B),和SK-Hep1(C)細胞接種裸鼠后裸鼠體重的變化，D三株腫瘤細胞未輻照組接種裸鼠后，皮下移植瘤體積的變化。圖3X線輻照對紅細胞質量的影響。各輻照組紅細胞ATP(A)，2,3-DPG(B)，free Hb(C)及滲透脆性(D)。30Gy X線輻照對回收紅細胞ATP，2,3-DPG，free Hb及滲透脆性均沒有明顯影響；而50Gy X線輻照對回收紅細胞的滲透脆性有明顯影響。結果：線性加速器30Gy可以有效抑制HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞的DNA復制、克隆性及成瘤性，并對紅細胞的攜氧能力、膜完整性、滲透脆性均本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：(1)、HepG2，SK?Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，混勻后肝腫瘤細胞密度為5×106/ml，混合細胞在2?8℃條件下將運輸至放療科；(2)、將混合細胞放置于血液輻照容器，設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2；使用醫用直線加速器進行30Gy輻照，該直線加速器能量為6MeV；(3)、輻照后使用密度為1.063g/ml的Percoll行密度梯度離心法分離腫瘤細胞株和紅細胞。采用MTT法、EdU法、平板克隆形成法、裸鼠皮下移植瘤模型檢測輻照后腫瘤細胞株的增殖活力、DNA復制、克隆性、成瘤性；同時檢測輻照后紅細胞的Na+?K+?ATPase活性，2,3?二磷酸甘油酸(2,3?DPG)水平，游離血紅蛋白(free?Hb)水平，滲透脆性，及血氣值變化。
【技術特征摘要】
1.一種采用直線加速器滅活自體血回收中混雜的肝腫瘤細胞并保存紅細胞質量的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：(1)、HepG2，SK-Hep1和Huh7肝腫瘤細胞株分別與經過血液回收機濃縮后的紅細胞混合混勻，混勻后肝腫瘤細胞密度為5×106/ml，混合細胞在2-8℃條件下將運輸至放療科；(2)、將混合細胞放置于血液輻照容器，設置箱子距離輻照源為60cm，輻照面積為40×40cm2；使用醫用直線加速器進行30...
【專利技術屬性】
技術研發人員：嚴敏，張馮江，楊瑾婷，王文娜，劉云青，
申請(專利權)人：浙江大學，
類型：發明
國別省市：浙江;33
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。