一種復合酶法提取靈芝多糖的方法技術

本發明專利技術屬于食用菌深加工技術領域，具體涉及一種復合酶法提取靈芝多糖的方法。本發明專利技術采用復合酶法提取靈芝多糖，與傳統的熱水提取法相比，粗多糖得率和多糖含量都能得到較大提高。例如同樣使用40目的靈芝子實體原料，酶法提取靈芝粗多糖得率為4.41%，多糖含量為64.10%；傳統的熱水提取法粗多糖得率為3.12%，多糖含量為55.81%。粗多糖得率提高41.3%，多糖含量提高14.85%。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于食用菌深加工
，具體涉及一種復合酶法提取靈芝多糖的方法。
技術介紹
食用菌對人類的健康作用越來越受到國際社會的廣泛重視。食用菌多糖作為食用菌的主要活性成分之一，現已成為世界健康產業的研究熱點。大量研究表明，食用菌多糖具有免疫調節、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗氧化、降血糖、血脂和血壓等多種生物活性。目前，以中國為首的亞洲國家以及歐美等國已經對靈芝、香菇、姬松茸、灰樹花、雞腿菇等多種食用菌多糖進行了較為系統的研究，其中靈芝(Ganoderma lucidum)以及靈芝多糖以其獨特的保健功能成為研究的熱點。靈芝多糖是由三股單糖鏈構成的、具有螺旋狀立體構型(三級結構)的葡聚糖，其立體構型與脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，是一種大分子化合物，分子量從幾千到幾十萬。靈芝多糖存在于靈芝的細胞壁內壁上，可以從靈芝孢子粉或靈芝子實體中提取獲得。靈芝多糖的單糖組成主要為葡萄糖，其次還含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、鼠李糖等單糖，但含量較少。靈芝多糖能溶于熱水，不溶于高濃度的乙醇，因此利用該性質采用水提醇沉法可以提取靈芝多糖。傳統的提取方法主要有熱水提取法、酸提取法、堿提取法等。由于靈芝子實體由纖維素、半纖維素、木質素等主要成分構成，結構緊密，且活性多糖有效成分附著在細胞壁內側，因此傳統的水提法浸提時間長、活性成分提取率低。酸提取法和堿提取法雖然能提高多糖提取率，但對設備要求高，且活性多糖的結構極易遭到破壞，得到的靈芝多糖產品顏色深、雜質多，不利于作為功能性食品或藥品進行進一步研究與開發，還存在環境污染問題。隨后發展起來的超聲波提取法和微波提取法用于靈芝多糖的提取效果顯著。與水提法相比，具有提取率高、提取時間短等明顯優勢，但所需設備投資成本太大，到目前為止尚未實現工業化生產。
技術實現思路
為了克服現有技術中所存在的問題，本專利技術的目的在于提供一種復合酶法提取靈芝多糖的方法。為了實現上述目的以及其他相關目的，本專利技術采用如下技術方案：本專利技術的第一方面，提供了一種復合酶法提取靈芝多糖的方法，為采用纖維素酶、果膠酶、破壁酶、蛋白酶作為復合酶用于提取靈芝多糖。優選地，所述蛋白酶選自木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶中的任一種或多種的組合。所述纖維素酶、果膠酶、破壁酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶均可通過市售途徑獲得。優選地，所述方法包括如下步驟：(1)粉碎：將干燥的靈芝進行粉碎獲得靈芝粉；(2)酶解：將步驟(1)中所得靈芝粉按照一定的固液比加水，攪拌均勻，調節體系pH值，加入所述復合酶，并加熱攪拌，進行酶解；酶解結束后，水解液煮沸滅酶；(3)第一次水提：調整反應體系溫度，水提一定時間，提取結束后離心，獲得第一次上清液和第一次殘渣；(4)第二次水提：將步驟(3)中所得第一次殘渣，按照一定的固液比加水，進行第二次水提，提取結束后離心，得第二次上清液和第二次殘渣；(5)濃縮：合并第一次上清液和第二次上清液，濃縮去除水分，獲得濃縮液；(6)醇沉、過濾、干燥：將步驟(5)所得濃縮液中加入乙醇，沉淀，過濾、干燥獲得靈芝多糖。優選地，步驟(1)中，粉碎時采用中草藥粉碎機或超微粉碎機進行粉碎。優選地，步驟(1)中，所述靈芝粉的目數為10～2000目。優選地，步驟(1)中，所述復合酶中每種酶的添加量為靈芝粉質量的0.5～5％。進一步優選地，所述復合酶中每種酶的添加量為靈芝粉質量的1～3％。進一步優選地，所述蛋白酶的添加質量為靈芝粉質量的1.0～5.0％。所述破壁酶的添加質量為靈芝粉質量的2.0～5.0％。所述纖維素酶的添加質量為靈芝粉質量的1.5～5.0％。所述果膠酶的添加量為靈芝粉質量的0.5～2.0％。優選地，步驟(2)中，所述固液比的范圍是：1:10～1:30。優選地，步驟(2)中，所述pH值的范圍是：3.0～7.0。優選地，步驟(2)中，所述酶解時的溫度范圍是35～60℃。所述酶解的時間范圍是：1～4h。優選地，步驟(2)中，酶解結束后，水解液煮沸滅酶5～10min滅酶。優選地，步驟(3)中，所述水提時的溫度范圍是：80～100℃。所述水提時的時間范圍是：1～2h。優選地，步驟(4)中，所述水提時的溫度范圍是：90～100℃。所述水提時的時間范圍是：1～2h。優選地，步驟(4)中，所述固液比的范圍是：1:10～1:30。優選地，步驟(5)中，所述濃縮時采用真空濃縮。優選地，步驟(6)中，加入乙醇至乙醇的終濃度為50～90％。優選地，步驟(6)中，干燥時，采用真空干燥或冷凍干燥。與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：本專利技術采用復合酶法提取靈芝多糖，與傳統的熱水提取法相比，粗多糖得率和多糖含量都能得到較大提高。例如同樣使用40目的靈芝子實體原料，酶法提取靈芝粗多糖得率為4.41％，多糖含量為64.10％；傳統的熱水提取法粗多糖得率為3.12％，多糖含量為55.81％。粗多糖得率提高41.3％，多糖含量提高14.85％。附圖說明圖1：本專利技術復合酶法提取靈芝多糖的工藝流程圖。具體實施方式在進一步描述本專利技術具體實施方式之前，應理解，本專利技術的保護范圍不局限于下述特定的具體實施方案；還應當理解，本專利技術實施例中使用的術語是為了描述特定的具體實施方案，而不是為了限制本專利技術的保護范圍。下列實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規條件，或者按照各制造商所建議的條件。當實施例給出數值范圍時，應理解，除非本專利技術另有說明，每個數值范圍的兩個端點以及兩個端點之間任何一個數值均可選用。除非另外定義，本專利技術中使用的所有技術和科學術語與本
技術人員通常理解的意義相同。除實施例中使用的具體方法、設備、材料外，根據本
的技術人員對現有技術的掌握及本專利技術的記載，還可以使用與本專利技術實施例中所述的方法、設備、材料相似或等同的現有技術的任何方法、設備和材料來實現本專利技術。本專利技術采用如圖1所示的復合酶法提取靈芝多糖。具體實施例如下：實施例1稱取粉碎至10目的靈芝子實體粉末，按照固液比1:30加水，攪拌均勻，調節體系pH值為3.0，按靈芝粉質量為基準，加入酸性蛋白酶1.0％、破壁酶2.5％、纖維素酶5.0％、果膠酶1.0％，在60℃溫度下加熱攪拌，酶解提取4h。酶解結束后，水解液煮沸5min滅酶。之后將反應體系升溫至100℃，第一次水提2h，提取結束后12000r/min離心15min，上清液備用，殘渣按初始原料固液比1:30加水，100℃進行第二次水提，提取結束后12000r/min離心15min，合并兩次上清液。利用旋轉蒸發儀將上清液濃縮至原體積的1/10，往濃縮液中加入無水乙醇至乙醇終濃度為90％，-4℃放置過夜，以沉淀靈芝大分子多糖，過濾，固體冷凍干燥得到靈芝多糖。經分析，靈芝粗多糖得率為3.34％，多糖含量為60.58％。實施例2稱取粉碎至2000目的靈芝子實體粉末，按照固液比1:10加水，攪拌均勻，調節體系pH值為7.0，按靈芝粉質量為基準，加入中性蛋白酶3.0％、破壁酶5.0％、纖維素酶2.0％、果膠酶0.5％，在55℃溫度下加熱攪拌，酶解提取1h。酶解結束后，水解液煮沸5min滅酶。之后將反應體系升溫至80℃，第一次水提2h，提取結束后12000r/min離心15min，上清液備用，殘渣按初始本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種復合酶法提取靈芝多糖的方法，為采用纖維素酶、果膠酶、破壁酶、蛋白酶作為復合酶用于提取靈芝多糖。

【技術特征摘要】
1.一種復合酶法提取靈芝多糖的方法，為采用纖維素酶、果膠酶、破壁酶、蛋白酶作為復合酶用于提取靈芝多糖。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶選自木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶中的任一種或多種的組合。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：(1)粉碎：將干燥的靈芝進行粉碎獲得靈芝粉；(2)酶解：將步驟(1)中所得靈芝粉按照一定的固液比加水，攪拌均勻，調節體系pH值，加入所述復合酶，并加熱攪拌，進行酶解；酶解結束后，水解液煮沸滅酶；(3)第一次水提：調整反應體系溫度，水提一定時間，提取結束后離心，獲得第一次上清液和第一次殘渣；(4)第二次水提：將步驟(3)中所得第一次殘渣，按照一定的固液比加水，進行第二次水提，提取結束后離心，得第二次上清液和第二次殘渣；(5)濃縮：合并第一次上清液和第二次上清液，濃縮去除水分，獲得濃縮液；(6)醇沉、過濾、干燥：將步驟(5)所得濃縮液中加入乙醇，沉淀，過濾、干燥獲得靈芝多糖。4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，粉碎時采用中草藥粉碎機或...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉莉，史吉平，姜標，朱玲，
申請(專利權)人：中國科學院上海高等研究院，
類型：發明
國別省市：上海;31