茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯的用途制造技術

本發明專利技術公開了茶黃素?3,3’?雙沒食子酸酯的用途，具體為茶黃素?3,3’?雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。與現有技術相比，本發明專利技術具有以下優點：(1)采用本發明專利技術所述藥物治療假體周圍骨溶解時，骨表面陷窩數、陷窩面積明顯減少，骨密度、骨體積分數明顯增加，骨溶解程度明顯減輕，骨膜增厚程度減輕，成熟破骨細胞數量減少；(2)本發明專利技術所述藥物能夠抑制RANKL誘導的破骨細胞活化，且抑制作用呈濃度依賴性；(3)本發明專利技術所述藥物能明顯抑制ERK信號通路的活化；抑制ERK下游靶因子c?fos和NFATc1的表達，而對ERK上游調節激酶MEK1/2的活性無影響。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于藥物新用途領域，涉及一種假體周圍骨溶解的藥物，尤其涉及茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。
技術介紹
人工關節置換術(total joint arthroplasty，TJA)是二十世紀最成功的骨科手術之一，能達到有效解決患者關節疼痛、重建關節功能、提高患者生活質量的目的。2007年《Lancet》上曾發表述評文章，將TJA稱為“世紀性的手術”(The Operation of the Century)。目前，TJA已成為治療嚴重骨關節炎、類風濕性關節炎及股骨頭壞死終末期病變等的首選方法。據統計，在美國，每年大約有70萬患者接受TJA，預計到2030年每年接受TJA的患者可超過400萬。然而隨著該技術的廣泛應用以及假體使用年限的延長，假體后期松動問題日益突出。Ranawat等研究發現，TJA術后15-20年，10-15％的人工假體將失效，需要更換新的人工假體。Dobzyniak等統計發現，在需行翻修手術的患者中，無菌性松動(aseptic loosening，AL)引起的占到了75％。目前，AL已成為制約人工假體使用壽命的關鍵因素，也是導致假體翻修的主要原因。無菌性松動的發生機制復雜，至今尚不完全清楚。人工假體周圍的微環境是一個動態變化的過程，多種致病因素都可以參與到AL的發生。目前多數學者認為AL的致病因素基本可歸納為兩大類：一類為機械性因素，如假體設計、循環負荷、液體壓力、假體微動、應力遮擋等；另一類為生物學因素，即由磨損顆粒引起的生物學反應。雖然機械因素可以通過不同的方式對人工假體的穩定產生影響，但磨損顆粒引起的假體周圍骨溶解被認為是引起假體AL的主要原因。破骨細胞活性改變是引起各種骨代謝疾病的主要原因，也是研究的熱點。目前，多數學者認為磨損顆粒引起的破骨細胞活化是導致假體周圍骨溶解的首要因素。研究發現松動假體周圍組織中成熟的破骨細胞數量明顯增多；體外研究也證實聚乙烯、鈦、PMMA等顆粒能促進破骨細胞前期細胞分化為成熟的破骨細胞。因此，抑制破骨細胞活化已成為藥物預防和治療假體周圍骨溶解和假體無菌性松動的首要研究方向。茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate，TF3)是一類具有苯駢卓酚酮結構的物質，通過兒茶素苯并環化作用而形成；其分子式為C43H32O20，分子量為868.70，CAS NO.33377-72-9，結構式如下所示：TF3是紅茶的主要活性成分，大量的研究證實TF3具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗病毒以及降血脂等作用。目前TF3與磨損顆粒誘導假體周圍骨溶解和假體無菌性松動的關系尚不明確。
技術實現思路
解決的技術問題：為了克服現有技術的缺陷，開發茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯的新用途，且尋找預防和治療假體周圍骨溶解和假體無菌性松動的有效藥物，本專利技術提供了茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。技術方案：茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。所述假體周圍骨溶解為人工關節置換術后發生的假體周圍骨溶解。一種假體周圍骨溶解藥物，包含茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯。優選的，所述茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在藥物中的質量分數為1％～99％，優選10％～90％。其中，藥物中選用的輔料為茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在藥學上可接受的載體。優選的，所述藥物為適用于胃腸道的藥物制劑，劑型為片劑、膠囊劑或控釋、緩釋制劑。本專利技術所述的藥學上可接受的載體為組合物中制劑使用的輔料，可采用本領域常規的輔料，以不和本專利技術活性成分發生反應或不影響本專利技術藥物的療效為前提，所述制劑的制備方法可采用本領域常規的制備方法進行制備。本專利技術中，組合物的制備方法沒有限制，TF3直接做成制劑，或者分別或/和輔料混合后做成制劑，然后按照本領域常規的方式進行包裝，與其它輔料混合制成制劑。本專利技術中的藥物組合物的給藥劑量根據給藥對象、給藥途徑或藥物的制劑形式不同可以進行適當的變化，但以保證該藥物組合物在哺乳動物體內能夠達到有效的血藥濃度為前提。有益效果：(1)采用本專利技術所述藥物治療假體周圍骨溶解時，骨表面陷窩數、陷窩面積明顯減少，骨密度、骨體積分數明顯增加，骨溶解程度明顯減輕，骨膜增厚程度減輕，成熟破骨細胞數量減少；(2)本專利技術所述藥物能夠抑制RANKL誘導的破骨細胞活化，且抑制作用呈濃度依賴性；(3)本專利技術所述藥物能明顯抑制ERK信號通路的活化；抑制ERK下游靶因子c-fos和NFATc1的表達，而對ERK上游調節激酶MEK1/2的活性無影響。附圖說明圖1為micro-CT掃描各實驗組小鼠顱骨的二維圖像及小鼠顱骨陷窩數、陷窩面積、骨密度(BMD)及骨體積分數(BV/TV)檢測值分析圖；其中A為四組實驗中小鼠顱骨micro-CT掃描圖，B為四組實驗中小鼠骨密度檢測值分析圖，C為四組實驗中小鼠骨體積分數檢測值分析圖，D為四組實驗中小鼠顱骨陷窩數檢測值分析圖，E為四組實驗中小鼠顱骨陷窩面積檢測值分析圖。圖2為各實驗組小鼠顱骨H&E、TRAP染色結果及顱骨骨溶解面積、骨膜厚度及破骨細胞數量檢測值分析圖；其中A為各實驗組小鼠顱骨H&E、TRAP染色結果圖，B為各實驗組小鼠顱骨骨溶解面積檢測值分析圖，C為各實驗組小鼠顱骨骨膜厚度檢測值分析圖，D為各實驗組小鼠顱骨破骨細胞數量檢測值分析圖。圖3為BMM細胞活性檢測結果圖。圖4為TF3對BMMs分化的作用結果圖；其中A為不同濃度的TF3與BMMs細胞共培養后TRAP染色結果，B為不同濃度的TF3與BMMs細胞共培養后顯微鏡下計數TRAP-陽性細胞數檢測值，C為不同處理時間的TF3與BMMs細胞共培養后TRAP染色結果，D為不同處理時間的TF3與BMMs細胞共培養后顯微鏡下計數TRAP-陽性細胞數檢測值。圖5為骨吸收培養板及F-actin染色結果圖；其中A為不同濃度的TF3對破骨細胞F-actin環形成的影響，B為不同濃度的TF3對破骨細胞吸收面積的影響，C為TF3對破骨細胞F-actin環形成的劑量效應。圖6為破骨細胞活化相關基因RT-PCR檢測結果圖；其中A為不同濃度的TF3對相關基因表達的影響結果，B為不同加入時間，TF3對相關基因表達的影響結果圖7為NF-κB、PI3K/AKT和MAPK通路關鍵蛋白Western blot檢測結果圖。圖8為ERK及其上下游調節蛋白Western blot檢測結果圖。具體實施方式以下實施例進一步說明本專利技術的內容，但不應理解為對本專利技術的限制。在不背離本專利技術精神和實質的情況下，對本專利技術方法、步驟或條件所作的修改和替換，均屬于本專利技術的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。實施例1 建立本專利技術所述藥物的應用模型1、主要藥品及試劑茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯(TFDG)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色試劑盒、乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物(EDTA)、封片劑購自美國Sigma公司；RANKL、m-CSF購自美國R&D公司，切片石蠟購自德國Lecia公司，RT-PCR試劑盒購自美國Invitrogen公司。2、主要儀器設備Micro-CT(SkyScan 1176，比利時)本文檔來自技高網...

【技術保護點】
茶黃素?3,3’?雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。

【技術特征摘要】
1.茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯在制備假體周圍骨溶解藥物中的用途。2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述假體周圍骨溶解為人工關節置換術后發生的假體周圍骨溶解。3.一種假體周圍骨溶解藥物，其特征在于，包含茶黃素-3,3’-雙沒食子酸酯。4.根據權利要求3所述的一種假體周圍骨溶解藥物，其特征在于，所述茶黃素-...

【專利技術屬性】
技術研發人員：耿德春，胡宣洋，平子川，朱雪松，毛海青，徐耀增，楊惠林，
申請(專利權)人：蘇州大學附屬第一醫院，
類型：發明
國別省市：江蘇;32