基因重組人溶菌酶面膜及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種基因重組人溶菌酶面膜，包含：(1)溶菌酶凍干粉，包括基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液，二者的比例是0.5?0.8g∶1ml；(2)溶媒，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.35g?0.5g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.2g?0.6g、三甲基甘氨酸3g?7g、乳酸鈉40ml?80ml、山梨醇30ml?50ml、羥乙基纖維素1.5g?3g、甘草酸二鉀1.5g?3g、EDTA?2Na?0.4g?0.7g和余量的磷酸鈉緩沖液。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了基因重組人溶菌酶面膜的制備方法，包括制備溶菌酶凍干粉的步驟和制備溶媒的步驟。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于化妝品領(lǐng)域，具體地，本專利技術(shù)涉及一種面膜及其制備方法，特別是涉及一種基因重組人溶菌酶面膜及其制備方法。
技術(shù)介紹
面膜是一種特殊的美容化妝品，涂敷于面部皮膚形成一層薄膜，將皮膚與外界隔離開，面膜中的有效成分可滲入皮膚，起滋潤皮膚、增加營養(yǎng)、促進皮膚機能和新陳代謝作用，從而使面部皮膚潔白、柔軟、舒爽，保持青春活力。目前，市售的面膜制品按其形態(tài)分為膏狀、液體狀、啫膠和粉狀。從組成成分看，中藥面膜居多，而活性蛋白面膜卻較為少見。溶菌酶(Lysozyme，LYZ)，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，廣泛存在于人體多種組織中，鳥類和家禽的蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁等液體以及微生物中也含此酶，其中以蛋清含量最為豐富。溶菌酶是很穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，有較強的抗熱性；不會因為有機溶劑的處理而失活，當轉(zhuǎn)移到水溶液中時，活力可全部恢復(fù)；可被冷凍或干燥處理，且活力穩(wěn)定；抗菌譜較廣，安全性高。用于皮膚表面可起到祛痘，消腫止痛，除菌的作用。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種基因重組人溶菌酶面膜及其制備方法。一方面，本專利技術(shù)提供了一種基因重組人溶菌酶面膜，包含：(1)溶菌酶凍干粉，包括基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液，二者的比例是0.5-0.8g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液；(2)溶媒，其中，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.35g-0.5g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.2g-0.6g、三甲基甘氨酸3g-7g、乳酸鈉40ml-80ml、山梨醇30ml-50ml、羥乙基纖維素1.5g-3g、甘草酸二鉀1.5g-3g、EDTA-2Na 0.4g-0.7g和余量的磷酸鈉緩沖液。前述的基因重組人溶菌酶面膜，在溶菌酶凍干粉中，基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液的配比是0.68g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液。前述的基因重組人溶菌酶面膜，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.45g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.5g、三甲基甘氨酸5g、乳酸鈉60ml、山梨醇40ml、羥乙基纖維素2g、甘草酸二鉀2g、EDTA-2Na 0.5g和余量的磷酸鈉緩沖液。前述的基因重組人溶菌酶面膜，所述基因重組人溶菌酶由130個氨基酸組成，其氨基酸序列為：KVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNTRATNYNAGDRSTDYGIFQINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLQDNIADAVACAKRVVRDPQGIRAWVAWRNRCQNRDVRQYVQGCGV。前述的基因重組人溶菌酶面膜，所述甘露醇磷酸鹽緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5-6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)；所述甘露醇磷酸鹽緩沖液中甘露醇的質(zhì)量百分含量是2％-5％(優(yōu)選3％)。前述的基因重組人溶菌酶面膜，所述透明質(zhì)酸鈉的分子量為120-150萬道爾頓；所述低分子透明質(zhì)酸鈉的分子量為20-40萬道爾頓。前述的基因重組人溶菌酶面膜，所述磷酸鈉緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5-6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)。前述的基因重組人溶菌酶面膜，在使用時，先將1ml溶媒加入溶菌酶凍干粉中溶解均勻后吸出、回輸至溶媒中混合均勻，然后注射至面膜紙上浸濕。另一方面，本專利技術(shù)提供了前述的基因重組人溶菌酶面膜的制備方法，包括如下步驟：(1)制備溶菌酶凍干粉(1.1)將0.5g-0.8g基因重組人溶菌酶溶解于無菌的甘露醇磷酸鹽緩沖液中，隨后過濾除菌，得到濾液；(1.2)向濾液中加入無菌的甘露醇磷酸鹽緩沖液定容至100ml，混合均勻得到溶菌酶溶液；(1.3)將溶菌酶溶液分裝、凍干，得到溶菌酶凍干粉；其中，上述步驟(1.1)至(1.3)在無菌條件下進行；(2)制備溶媒(2.1)將0.35g-0.5g(優(yōu)選0.45g)透明質(zhì)酸鈉和0.2g-0.6g(優(yōu)選0.5g)低分子透明質(zhì)酸鈉溶于磷酸鈉緩沖液中得到透明質(zhì)酸鈉溶液；(2.2)將1.5g-3g(優(yōu)選2g)羥乙基纖維素溶于磷酸鈉緩沖液中得到羥乙基纖維素溶液；(2.3)將透明質(zhì)酸鈉溶液加入羥乙基纖維素溶液中，混合均勻得到混合溶液；(2.4)依次向混合溶液中加入3g-7g(優(yōu)選5g)三甲基甘氨酸、1.5g-3g(優(yōu)選2g)甘草酸二鉀、0.4g-0.7g(優(yōu)選0.5g)EDTA-2Na、40ml-80ml(優(yōu)選60ml)乳酸鈉和30ml-50ml(優(yōu)選40ml)山梨醇，隨后加入磷酸鈉緩沖液定容至1000ml，混合均勻得到溶媒溶液；(2.5)將溶媒溶液分裝、滅菌，得到溶媒。前述的制備方法，在步驟(1.1)中，采用孔徑為0.22μm的水相濾器進行過濾除菌。前述的制備方法，步驟(2.1)和(2.2)在50-70℃(優(yōu)選60℃)進行。前述的制備方法，在步驟(2.5)中，所述滅菌是在121℃滅菌30分鐘。前述的制備方法，所述基因重組人溶菌酶由130個氨基酸組成，其氨基酸序列為：KVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNTRATNYNAGDRSTDYGIFQINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLQDNIADAVACAKRVVRDPQGIRAWVAWRNRCQNRDVRQYVQGCGV。前述的制備方法，所述甘露醇磷酸鹽緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5-6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)；所述甘露醇磷酸鹽緩沖液中甘露醇的質(zhì)量百分含量是2％-5％(優(yōu)選3％)。前述的制備方法，所述磷酸鈉緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5—6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)提供的基因重組人溶菌酶面膜及其制備方法具有如下優(yōu)點：(1)采用的溶菌酶原料為基因重組人溶菌酶，采用生物工程技術(shù)改造畢赤酵母，通過大規(guī)模發(fā)酵、表達及純化制備而成，純度高、活性高，安全性好，且成本較低。(2)克服活性蛋白在水溶液中長時間保存易于降解失活的不足，制備成凍干粉，保證溶菌酶的活性，且不含防腐劑。具體實施方式為充分了解本專利技術(shù)之目的、特征及功效，借由下述具體的實施方式，對本專利技術(shù)做詳細說明。針對目前市場上的面膜以中藥面膜居多，活性蛋白面膜較少，且效果不理想的問題，在第一方面，本專利技術(shù)提供了一種基因重組人溶菌酶面膜，該基因重組人溶菌酶面膜包括如下組分：(1)溶菌酶凍干粉，包括基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液，二者的比例是0.5-0.8g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液，優(yōu)選地，二者的比例是0.68g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液。其中，基因重組人溶菌酶是采用基因工程方法生產(chǎn)的，與人體的溶菌酶是同源的，其由130個氨基酸組成，氨基酸序列為：KVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNTRATNYNAGDRSTDYGIFQINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLQDNIADAVACAKRVVRDPQGIRAWVAWRNRCQNRDVRQYVQGCGV。該溶菌酶是以畢赤酵母為宿主菌，篩選得到表達溶菌酶的畢赤酵母基因工程菌，再經(jīng)過發(fā)酵生產(chǎn)得到的。本專利技術(shù)采本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，包含：(1)溶菌酶凍干粉，包括基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液，二者的比例是0.5?0.8g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液；(2)溶媒，其中，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.35g?0.5g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.2g?0.6g、三甲基甘氨酸3g?7g、乳酸鈉40ml?80ml、山梨醇30ml?50ml、羥乙基纖維素1.5g?3g、甘草酸二鉀1.5g?3g、EDTA?2Na?0.4g?0.7g和余量的磷酸鈉緩沖液。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，包含：(1)溶菌酶凍干粉，包括基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液，二者的比例是0.5-0.8g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液；(2)溶媒，其中，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.35g-0.5g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.2g-0.6g、三甲基甘氨酸3g-7g、乳酸鈉40ml-80ml、山梨醇30ml-50ml、羥乙基纖維素1.5g-3g、甘草酸二鉀1.5g-3g、EDTA-2Na 0.4g-0.7g和余量的磷酸鈉緩沖液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，在溶菌酶凍干粉中，基因重組人溶菌酶和甘露醇磷酸鹽緩沖液的配比是0.68g基因重組人溶菌酶：1ml甘露醇磷酸鹽緩沖液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，每1000ml溶媒包括透明質(zhì)酸鈉0.45g、低分子透明質(zhì)酸鈉0.5g、三甲基甘氨酸5g、乳酸鈉60ml、山梨醇40ml、羥乙基纖維素2g、甘草酸二鉀2g、EDTA-2Na 0.5g和余量的磷酸鈉緩沖液。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，所述基因重組人溶菌酶由130個氨基酸組成，其氨基酸序列為：KVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNTRATNYNAGDRSTDYGIFQINSRYWCNDGKTPGAVNACHLSCSALLQDNIADAVACAKRVVRDPQGIRAWVAWRNRCQNRDVRQYVQGCGV。5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，所述甘露醇磷酸鹽緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5-6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)；所述甘露醇磷酸鹽緩沖液中甘露醇的質(zhì)量百分含量是2％-5％(優(yōu)選3％)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，所述透明質(zhì)酸鈉的分子量為120-150萬道爾頓；所述低分子透明質(zhì)酸鈉的分子量為20-40萬道爾頓。7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，所述磷酸鈉緩沖液的pH值是6.5-7.2(優(yōu)選是7.0)，濃度是4.5-6.0mmol/L(優(yōu)選是5mmol/L)。8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜，其特征在于，在使用時，先將1ml溶媒加入溶菌酶凍干粉中溶解均勻后吸出、回輸至溶媒中混合均勻，然后注射至面膜紙上浸濕。9.權(quán)利要求1-8任一項所述的基因重組人溶菌酶面膜的制...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高恩，侯增淼，李曉穎，李敏，楊小琳，趙金禮，
申請(專利權(quán))人：陜西慧康生物科技有限責(zé)任公司，
類型：發(fā)明
國別省市：陜西;61