鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗及其制備方法，屬于鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備領域。本發明專利技術首先公開了一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，包括：鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗。本發明專利技術所述鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的安全性好，免疫后誘導的中和抗體效價高于單價疫苗，而且雛鴨的被動保護期長，對種鴨的免疫持續期長達5個月，能夠有針對性的防治1型和3型鴨甲肝病毒引起的鴨病毒性肝炎。本發明專利技術進一步公開了一種所述鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備方法，包括：將鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗混合均勻，即得。本發明專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備方法簡單，能夠規模化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及鴨病毒性肝炎滅活疫苗，尤其涉及鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，本專利技術還涉及所述鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備方法，屬于鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備領域。
技術介紹
鴨病毒性肝炎(DVH)，是由鴨甲肝病毒(DHAV)引起雛鴨的一種急性接觸傳染病。鴨甲肝病毒，屬小RNA病毒科，禽肝炎病毒屬。目前DHAV分為3個血清型，即：血清I型，血清Ⅱ型和血清Ⅲ型。其中血清I型為傳統鴨肝炎病毒，血清Ⅱ型和血清Ⅲ型為近幾年發現的新型病毒株，分別對應臺灣新型和韓國新型。3個血清型之間無交叉反應。鴨病毒性肝炎主要危害3周齡以內的雛鴨，死亡率高達90％。近幾年隨著養鴨業的迅猛發展，鴨病毒性肝炎的危害日趨嚴重，給養鴨生產造成了很大的經濟損失。隨著DHAV I型雞胚化弱毒疫苗、高免卵黃抗體的研制成功及臨床應用，使本病在很大程度上得到很好的控制。但近幾年，在中國多地區免疫接種過DHAV I型弱毒疫苗或注射過DHAV I型高免卵黃抗體的鴨群中仍發生鴨肝炎，死亡率為20％-80％，經病毒分離鑒定為血清Ⅲ型。因此，目前亟待需要研制一種能夠同時有效預防鴨甲肝病毒I型和Ⅲ型的鴨病毒性肝炎二價疫苗，有針對性的防治鴨病毒性肝炎的感染與爆發。
技術實現思路
本專利技術所要解決的第一個技術問題是提供一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，該二價滅活疫苗由鴨肝炎病毒強毒株SD株(血清1型)滅活疫苗和JS株(血清3型)滅活疫苗混合制成，不僅誘導的中和抗體效價高，免疫持續期長，而且安全性好。本專利技術所要解決的另一個技術問題是提供一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備方法，工藝簡單。為解決上述技術問題，本專利技術所采取的技術方案是：本專利技術首先公開了一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，包括：預防上有效量的鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗。其中，鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗與鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗的體積比為1-5：1-5，優選為1：1。本專利技術所述鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗中，所述鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗的制備包括：(1)培養鴨肝炎病毒SD株，收獲病毒液，濃縮；(2)將濃縮后的病毒液滅活，制備水相；(3)制備油相；(4)將水相與油相混合，乳化，即得。所述鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗的制備包括：(1)培養鴨肝炎病毒JS株，收獲病毒液，濃縮；(2)將濃縮后的病毒液滅活，制備水相；(3)制備油相；(4)將水相與油相混合，乳化，即得。其中，步驟(1)所述培養鴨肝炎病毒SD株，包括：將鴨肝炎病毒SD株接種雞胚，優選為11日齡雞胚，選擇在24-96小時內死亡的雞胚，收取胚體和胚液，勻漿、凍融、然后離心，取上清夜，即得。所述培養鴨肝炎病毒JS株，包括：將鴨肝炎病毒JS株接種鴨胚，優選為10日齡鴨胚，選擇在24-96小時內死亡的鴨胚，收取胚體和胚液，勻漿、凍融、然后離心，取上清液，即得。步驟(1)所述濃縮為濃縮10倍，即濃縮至終體積為病毒液體積的1/10；優選的，每0.2ml濃縮后的病毒液的病毒含量≥106.0ELD50。按照體積比計，步驟(2)所述滅活是向濃縮后的病毒液中加入終濃度為0.2％甲醛溶液，37℃作用48小時；優選的，每6-8小時振搖1次。步驟(2)所述水相的制備包括：向滅活后的病毒液中加入吐溫-80，振搖使吐溫-80溶解，即得；其中，按照體積比計，每96份滅活后的病毒液加入4份吐溫-80。步驟(3)所述油相的制備包括：將白油、司本-80和硬脂酸鋁混合，加熱熔解，滅菌，即得；其中，按照體積比計，白油94份、司本-80 6份、硬脂酸鋁1.5份；所述滅菌為115℃滅菌40分鐘。步驟(4)所述水相與油相按照體積比1-5：1-5混合；優選的，水相與油相按照體積比1：1.5混合。本專利技術進一步公開了一種所述鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的制備方法，包括：將鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗混合均勻，即得。安全性檢驗結果表明，本專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗單次使用劑量、單次超劑量或單劑量重復免疫不同日齡鴨，均無局部及全身反應，安全性好。效力比較結果表明，單次免疫不同日齡鴨21天后，本專利技術鴨病毒性肝炎二價苗產生的抗體對鴨肝炎病毒SD株的中和抗體效價均不低于1：78，對鴨肝炎病毒JS株的中和抗體效價均不低于1：78；而單價SD株滅活苗和JS株滅活苗對鴨肝炎病毒SD株和JS株的中和抗體效價均不高于1：42。第二次免疫14天后檢測血清中和抗體效價，本專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗對鴨肝炎病毒SD株的中和抗體效價均不低于1：700，對鴨肝炎病毒JS株的中和抗體效價均不低于1：790。而單價SD株或JS株滅活苗對鴨肝炎病毒SD株或JS株的中和抗體效價均不高于1：350。攻毒試驗(后代雛鴨被動保護)結果表明，本專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗免疫種鴨，雛鴨的被動保護期為21天，雛鴨出殼第4-21天的攻毒保護率均為90％以上；而單價苗對雛鴨的被動保護期為14天。種鴨免疫持續期試驗結果表明，疫苗第二次免疫種鴨后1-5個月，免疫組鴨血清中鴨肝炎病毒SD株和JS株的中和抗體效價均不低于1：700。本專利技術比較了SD株分別與JS株或另一株鴨肝炎病毒血清3型分離株JT株所制備的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗的效力，對不同月齡鴨進行單次免疫21天后檢測血清中和抗體效價，結果以鴨肝炎病毒SD株為檢測毒株，二價苗(SD株+JS株)和二價苗(SD株+JT株)的中和抗體效價均不低于1：78；以鴨肝炎病毒JS株為檢測毒株，二價苗(SD株+JS株)的中和抗體效價不低于1：78；二價苗(SD株+JT株)的中和抗體效價不低于1：51。第二次免疫14天后檢測血清中和抗體效價，以鴨肝炎病毒SD株為檢測毒株，二價苗(SD株+JS株)和二價苗(SD株+JT株)誘導的中和抗體效價均不低于1：790；以鴨肝炎病毒JS株為檢測病毒，二價苗(SD株+JS株)誘導的中和抗體效價不低于1：790；二價苗(SD株+JT株)誘導的中和抗體效價不低于1：613。攻毒試驗(后代雛鴨被動保護)結果表明，二價苗(SD株+JS株)免疫種鴨，雛鴨的被動保護期為21天，雛鴨出殼第4-14天的攻毒保護率為100％，雛鴨出殼第4-21天的攻毒保護率為90％以上；而二價苗(SD株+JT株)對雛鴨的被動保護期為14天，雛鴨出殼第4-14天的攻毒保護率僅為70％。證明，與SD株和JT株制備的二價苗相比，鴨肝炎病毒SD株和JS株制備的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗誘導的中和抗體效價更高，而且雛鴨的被動保護期更長，雛鴨的攻毒保護率更高。本專利技術技術方案與現有技術相比，具有以下有益效果：本專利技術利用具有優良免疫原性的鴨肝炎病毒強毒株SD株(血清1型)和JS株(血清3型)，制備得到一種安全、有效、可控的1型和3型鴨病毒性肝炎滅活疫苗。本專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗免疫不同日齡鴨后，誘導的中和抗體效價均明顯高于單價苗，而且雛鴨的被動保護期長、攻毒保護率高，種鴨免疫持續期長達5個月。本專利技術鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗有利于鴨病毒性肝炎的防控，可以有針對性的防治鴨病毒性肝炎的感染與爆發，同時簡化了生產工藝，可規模化生產并應用于臨床。具體實施方式下面結合具體實施例來進一步描述本專利技術，本專利技術的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但是應理解所述實施例僅是范例性的，不對本專利技術的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于，包括：預防上有效量的鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗。

【技術特征摘要】
1.一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于，包括：預防上有效量的鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗和鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗。2.按照權利要求1所述的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于，所述鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗與鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗的體積比為1-5：1-5，優選為1：1。3.按照權利要求1所述的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于，所述鴨肝炎病毒SD株滅活疫苗的制備方法包括：(1)培養鴨肝炎病毒SD株，收獲病毒液，濃縮；(2)將濃縮后的病毒液滅活，制備水相；(3)制備油相；(4)將水相與油相混合，乳化，即得。4.按照權利要求1所述的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于，所述鴨肝炎病毒JS株滅活疫苗的制備方法包括：(1)培養鴨肝炎病毒JS株，收獲病毒液，濃縮；(2)將濃縮后的病毒液滅活，制備水相；(3)制備油相；(4)將水相與油相混合，乳化，即得。5.按照權利要求3或4所述的鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗，其特征在于：步驟(1)所述濃縮為濃縮10倍；優選的，每0.2ml濃縮后的病毒液的病毒含量≥106.0ELD50；按照體積比計，步驟(2)所述滅活是向濃縮后的病毒液中加入終濃度為0.2％甲醛溶液，37℃作用48小時；優選的，每6-8小時振搖1次。6.按照權利要求3或4所述的鴨病毒性肝炎二價...

【專利技術屬性】
技術研發人員：宋揚，藏玉婷，鄭鐵鑫，尹堯，丁國杰，梁宛楠，王彬，張鳳強，
申請(專利權)人：哈藥集團生物疫苗有限公司，
類型：發明
國別省市：黑龍江;23