黨參中抗衰老成分的提取方法及應用技術

本發明專利技術涉及中藥提取物技術領域，特別涉及一種黨參中抗衰老成分的提取方法：黨參粉碎后脫脂，用乙醇回流去除小分子化合物；水加熱回流提取若干次，提取液合并減壓濃縮，離心取上清液，醇沉得醇沉多糖，經過洗滌、溶劑揮干后得到黨參粗多糖；黨參粗多糖制成溶液，用0.45μm的濾膜抽濾，使用300KD、30KD和5KD的超濾膜超濾，分別得到黨參多糖組分Co1、Co2、Co3。本發明專利技術將得到的三個黨參多糖組分分別進行體外抗氧化實驗，通過還原能力、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力四個指標綜合、全面地分析了黨參各組分的抗氧化能力。為進一步進行體內的抗氧化實驗奠定了基礎。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及中藥提取物
，特別涉及一種黨參中抗衰老成分的提取方法，還涉及提取到的黨參中抗衰老成分的應用。
技術介紹
中藥品種繁多，且大多數中藥中含有多糖類成分，因此，如何充分利用好這一寶貴的自然資源是目前亟待解決的課題。目前對中藥中多糖類成分的研究還存在以下主要問題：(1)分離純化工藝較繁瑣，成本較高，不利于工業化；(2)結構研究還較膚淺，大多僅確定了部分一級結構，而對其高級結構未見報道；(3)活性研究一般用的都是粗多糖，缺乏多糖結構與活性關系的研究。因此，實用、高效的分離純化技術研究和深入、系統的構-效關系研究應是今后中藥中多糖類成分研究的主要方向。黨參為桔梗科植物黨參Cdoonopisispilosula(Farneh.)Nan-nf,素花黨參CodonoPsispilouslaNannfvar.modesatN(annf)L.T.shen或川黨參Codonopisisatngshenoliv.的干燥根，是我國常用的補益中藥。本品性甘、味平，主治脾肺虛弱，氣短心悸，內熱消渴等癥，臨床上廣泛用于降血脂、降血糖、抗衰老等癥。黨參化學成分的研究主要集中在香豆素、黃酮等小分子化合物，而對其中多糖類成分尚停留在粗多糖的含量測定及提取工藝優化的層面，缺乏進一步的分離精制過程研究；另外，對黨參藥理活性的研究大多僅針對粗提物，不利于明確藥理活性物質基礎，更阻礙了深入探討黨參化學成分與藥理活性之間關系的作用機制研究。因此，進行黨參多糖的分離純化、進一步尋找藥材黨參的活性成分并闡述相應的構-效關系，是目前亟待解決的問題。只有不斷地、更加深入地解決這些問題才能使黨參這一傳統中藥更好的服務于人類的健康事業。
技術實現思路
針對目前對黨參多糖的研究多集中在粗多糖的藥理活性研究上，對其進一步的分離純化還需要更深入的研究，本專利技術旨在建立黨參粗多糖的提取和分離方法，獲得黨參多糖分級組分，并進一步尋找、追蹤黨參多糖的抗衰老活性部位，為探索黨參參多糖的構-效關系、完善藥材黨參的質量評價體系乃至新藥資源開發奠定了基礎，提供了一種黨參中抗衰老成分的提取方法。本專利技術還提供了提取到的黨參中抗衰老成分的應用。本專利技術是通過以下步驟得到的：一種黨參中抗衰老成分的提取方法，包括以下步驟：(1)黨參粉碎后脫脂，用乙醇回流去除小分子化合物，得藥渣，晾干；(2)藥渣用水加熱回流提取若干次，提取液合并后減壓濃縮，離心取上清液，采用80％乙醇醇沉得醇沉多糖，醇沉多糖經過洗滌、溶劑揮干后得到黨參粗多糖；(3)黨參粗多糖制成溶液，用0.45μm的濾膜抽濾，選擇300KD的超濾膜進行超濾，然后依次用30KD和5KD的超濾膜分別對黨參粗多糖進行超濾，分別得到黨參多糖組分Co1、Co2、Co3。所述的提取方法，優選步驟(3)中超濾壓力為0.21MPa，溫度為25℃。所述的提取方法，優選步驟(1)中脫脂用的萃取液為石油醚，用量為黨參體積的3倍，冷凝水回流脫脂5-6h，棄去萃取液，重復操作3次。所述的提取方法，優選步驟(1)中去除小分子化合物使用95％的乙醇溶液，體積為黨參粉末體積的3倍，回流提取，棄去提取液，循環重復3次，回流時間分別為2.0、1.5、1.0h。所述的提取方法，優選步驟(2)中水的加入量為黨參質量的10-12倍，85℃加熱回流提取2次，回流時間分別均為1.0h。所述的提取方法，優選步驟(2)中2次水提取液合并后減壓濃縮至十到十六分之一體積，離心取上清液，采用80％乙醇醇沉。所述的提取方法，優選步驟(2)中醇沉多糖依次以無水乙醇、丙酮、無水乙醚洗滌。所述的提取方法，優選步驟(2)中離心轉速4000r/min，時間15min。提取方法提取得到的參多糖組分Co3在制備抗衰老藥物中的應用。本專利技術的有益效果：1.本專利技術選用超濾分級多糖技術，耗時短，操作簡便，試驗之前的準備工作即為超濾杯的清洗和超濾膜的預處理，且超濾膜的清潔也十分簡便，只需2～4天即可完成分級，而用常規的離子柱層析分級則需要約10天，不但耗時長且耗費大量的試劑和人工，同時給環境帶來污染。同常規的分離方法相比，超濾膜分級具有分離效率高、能耗低、設備簡單、無污染等優點，是行之有效的、具有廣闊發展前景的分離方法。2.本專利技術將得到的三個黨參多糖組分分別進行體外抗氧化實驗，通過還原能力、DPPH自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力四個指標綜合、全面地分析了黨參各組分的抗氧化能力。為進一步進行體內的抗氧化實驗奠定了基礎。3.本專利技術最終將體外抗氧化活性最高的組分進行了體內的抗氧化實驗驗證，通過黨參多糖對D-半乳糖所致的衰老作用，得出黨參多糖具有顯著的抗衰老活性，為開發有效的抗衰老藥物提供依據。附圖說明圖1為Co1組分紫外光譜掃描圖，圖2為Co2組分紫外光譜掃描圖，圖3為Co3組分紫外光譜掃描圖，圖4為Co1組分紅外光譜，圖5為Co2組分紅外光譜圖，圖6為Co3組分紅外光譜圖，圖7為黨參多糖三組分還原能力比較，濃度單位為mg/mL，圖8為黨參多糖組分Co1、Co2、Co3清除率比較，圖9為黨參多糖組分Co1、Co2、Co3清除率比較，圖10為黨參多糖組分Co1、Co2、Co3超氧陰離子清除能力比較。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術進行進一步說明：實施例11.儀器與試藥1.1儀器TU-1901紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；中空纖維超濾試驗裝置(北京旭邦膜設備有限責任公司)；中空纖維超濾組件截留分子量分別為300KD、150KD、30KD、10KD、5KD、3KD(內壓式超濾膜有效膜面積為0.3m2，外壓式超濾膜有效膜面積為0.9m2)(北京旭邦膜設備有限責任公司)；漩渦震蕩器(北京華爾博科技有限責任公司)；LGJ-10冷凍干燥機(北京四環科學儀器四廠)；高速冷凍離心機(Hettich有限責任公司)；ML503電子天平(Mettler Toledo儀器(上海)有限公司)。1.2試藥考馬斯亮藍G-250(上海邁坤化工有限公司)；牛血清白蛋白(北京恒業中遠化工有限公司)；安捷倫1260(Agilent 1260Infinity)系統色譜柱型號：安捷倫(Agilent Zorbox SB-C18,4.6×150mm,5m)。2.實驗方法與結果2.1分析方法2.1.1紫外光譜掃描將黨參多糖樣品配成0.1mg/ml的溶液，用紫外-可見分光光度計在波長190～900nm范圍內進行紫外掃描。2.1.2黨參粗多糖含量測定總糖含量的測定采用硫酸-苯酚比色法(同“方法2.2”)。2.1.蛋白含量的測定多糖樣品的蛋白含量采用考馬斯亮藍法(同“方法2.3”)。2.2實驗方法2.2.1黨參多糖粗提液的制備(1)取黨參藥材100.0g，置1000mL圓底燒瓶中，加入3倍體積的石油醚回流脫脂3次，每次6h，將脫脂后的藥材揮干溶劑，再用95％乙醇回流3次，每次乙醇加入量均為600mL，回流時間分別為2.0、1.5、1.0h，以去除單糖等小分子化合物，過濾，藥渣晾干；(2)藥渣用水加熱回流提取2次，每次蒸餾水加入量均為1200mL，回流時間分別均為1.0h，2次提取液合并后減壓濃縮至150mL，離心(4000r/min，15min)取上清液，采用80％乙醇醇沉，醇沉多糖依次以無水本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種黨參中抗衰老成分的提取方法，其特征在于包括以下步驟：（1）黨參粉碎后脫脂，用乙醇回流去除小分子化合物，得藥渣，晾干；（2）藥渣用水加熱回流提取若干次，提取液合并后減壓濃縮，離心取上清液，采用80%乙醇醇沉得醇沉多糖，醇沉多糖經過洗滌、溶劑揮干后得到黨參粗多糖；（3）黨參粗多糖制成溶液，用0.45μm的濾膜抽濾，選擇300KD的超濾膜進行超濾，然后依次用30KD和5KD的超濾膜分別對黨參粗多糖進行超濾，分別得到黨參多糖組分Co1、Co2、Co3。

【技術特征摘要】
1.一種黨參中抗衰老成分的提取方法，其特征在于包括以下步驟：（1）黨參粉碎后脫脂，用乙醇回流去除小分子化合物，得藥渣，晾干；（2）藥渣用水加熱回流提取若干次，提取液合并后減壓濃縮，離心取上清液，采用80%乙醇醇沉得醇沉多糖，醇沉多糖經過洗滌、溶劑揮干后得到黨參粗多糖；（3）黨參粗多糖制成溶液，用0.45μm的濾膜抽濾，選擇300KD的超濾膜進行超濾，然后依次用30KD和5KD的超濾膜分別對黨參粗多糖進行超濾，分別得到黨參多糖組分Co1、Co2、Co3。2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟（3）中超濾壓力為0.21MPa，溫度為25℃。3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟（1）中脫脂用的萃取液為石油醚，用量為黨參體積的3倍，冷凝水回流脫脂5-6h，棄去萃取液，重復操作3次。4.根據權利要求1所述的提取方法...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李啟艷，謝強勝，于海英，李俊婕，胡德福，
申請(專利權)人：山東省食品藥品檢驗研究院，
類型：發明
國別省市：山東;37