一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒及其制備方法技術

本發明專利技術屬于臨床醫學診斷領域，特別涉及一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒及其制備方法,該試劑盒包括R1試劑、R2試劑、血清淀粉樣蛋白A質控品、血清淀粉樣蛋白A校準品。該方法使用的樣本量較少。與其他檢測方法相比具有簡單、準確、快速的特點，并可直接在全自動分析儀上批量分析實現高通量。該試劑盒穩定性好、靈敏度高、線性范圍寬、使用樣本量少、可檢測全血、并可與配套儀器使用實現高通量。且價格低廉，可廣泛應用大、中、小醫院，用于門診臨床快速診斷感染及其感染預后的評估。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于臨床醫學診斷領域，特別涉及一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒及其制備方法。
技術介紹
血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A，SAA)是組織淀粉樣蛋白A的前體物質，屬于急性時相蛋白，在組織損傷和炎癥反應時升高，影響細胞的黏附、遷移、增殖和聚集。SAA是淀粉樣變中主要組成成分淀粉樣A蛋白的血清前體，是由肝細胞產生后被分泌到血清中的一種急性時相蛋白，雖然隨處可見，但是在正常情況下，在體中表達依然很低，然而機體一旦發生炎癥、感染或組織損傷時，SAA水平可在5～6h內迅速升高約1000倍。CRP是研究較多且臨床應用較廣泛的急性時相反應蛋白，但CRP對病毒感染不敏感、不升高，除非病毒感染后期并發細菌感染時，CRP才升高。因此SAA用于鑒定細菌感染和病毒感染。近年來認為炎癥過程參與動脈粥樣硬化的形成，研究發現急性心肌梗死(AMI)后3d SAA顯著升高，可達正常值的5000倍，而同時CRP升高為正常值的100倍，認為SAA作為AMI的輔助診斷指標優于CRP。Johnson等人針對705名懷疑有心肌缺血的女性患者進行了多中心研究，發現SAA水平與冠脈造影證實的冠狀動脈疾病存在相關性，認為SAA可以作為預測心血管事件的一個獨立指標。最近研究發現SAA/LDL復合物作為監測穩定型冠狀動脈疾病預后的指標，比CRP或單獨的SAA更為敏感。Hogarth等人對平均年齡為83歲的66名女性和平均年齡為84歲的33名男性進行了前瞻性調查研究，比較了SAA和CRP在診斷和監測感染性疾病預后中的作用。結果發現CRP和SAA均可預示較差的預后，比如復發或死亡，而監測感染急性期反應，SAA是比CRP更敏感的指標，有7％的CRP正常的感染性疾病患者可通過SAA檢測出。CRP和SAA是兩種不同的蛋白質，兩者聯合檢測有助于指導急性期反應的臨床治療和監測預后。在小兒感染性疾病早期，很難鑒別是細菌感染還是病毒感染。CRP對病毒感染缺乏敏感性，而SAA在細菌和病毒感染早期均可升高。研究發現SAA和CRP的比值與小兒感染性疾病的嚴重程度存在相關性，監測SAA/CRP比值比單獨檢測SAA或CRP更有應用價值。移植排斥反應是器官移植失敗的主要原因，如果能及時檢測出早期的移植排異反應，立即進行抗排異治療，有助于逆轉移植物的排斥。腎移植后3月內亞臨床排斥反應的發生率大概是30％左右，研究認為是否用皮質甾類藥物治療亞臨床排斥反應會影響移植術后的結果。早期治療亞臨床排斥反應，有助于減低急性排斥反應的發生率，維持較低的血清肌酐濃度，改善移植后器官功能。Hartmann等研究發現在器官移植排異反應早期SAA即顯著升高，而CRP在急性和超急性排異反應前后變化不明顯，而且SAA會在最短的時問內對成功的抗排異治療作出反應，認為在診斷移植排異和評估抗排異療效時，SAA優于CRP。SAA作為診斷移植排異反應的指標，在肝、腎、骨髓、胰腺等器官移植排異反應中的應用均有報道。SAA是判斷RA和SLE病情活動度的敏感指標，病情活躍時SAA水平顯著、高于穩定期，監測SAA水平變化有助于指導臨床用藥。SAA可以作為預測急性胰腺炎嚴重程度的早期指標，且預測作用優于CRP。SAA還可以作為膀胱炎和腎盂腎炎的血清標志物。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，該試劑盒能具有檢測簡單、準確、快速的特點，并可直接在全自動分析儀上批量分析實現高通量。本專利技術還提供了定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒的制備方法。本專利技術還提供了SAA的檢測方法。為了實現以上技術效果，本專利技術是通過如下步驟實現：一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括R1試劑、R2試劑、血清淀粉樣蛋白A質控品、血清淀粉樣蛋白A校準品。所述R1試劑包括緩沖液、電解質、穩定劑、表面活性劑、防腐劑；所述的R2試劑包括偶聯有抗SAA抗體的乳膠微球、緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑；所述的血清淀粉樣蛋白A質控品包括血清淀粉樣蛋白A質控品蛋白和質控品稀釋液。所述的血清淀粉樣蛋白A校準品包括血清淀粉樣蛋白A校準品蛋白和校準品稀釋液。所述微球是含有聚苯乙烯的多聚物，表面含有羧基基團，粒徑在70-200nm之間，所述抗SAA抗體是通過化學交聯的方法偶聯到乳膠微球表面的，所述化學交聯的方法是通過化學交聯劑在交聯緩沖液中進行的；所述的血清淀粉樣蛋白A質控品用于對所述的血清淀粉樣蛋白A校準品曲線的校準；所述化學交聯劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、碳化亞胺、酰肼、異氰酸鉀一種或兩種以上的混合物；所述交聯緩沖液選自不含氨基的緩沖液，為2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)、PB、HEPES、MOPSO緩沖液其中的一種，pH在6.0-8.0。所述的血清淀粉樣蛋白A質控品稀釋液包括緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑；所述的血清淀粉樣蛋白A校準品稀釋液包括緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑。所述血清淀粉樣蛋白A校準品可以是高濃度單點校準品，也可以使用時用校準品稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的校準品，濃度為0-200mg/L。所述血清淀粉樣蛋白A質控品可以是高濃度單點質控品，也可以使用時用質控品稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的質控品，濃度為10-100mg/L。所述電解質選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂中一種或兩種以上的混合物，濃度在0.5％-5％之間；所述穩定劑選自酪蛋白、甘露醇、殼聚糖、牛血清白蛋白中一種或兩種以上的混合物，濃度在1‰-5‰；所述表面活性劑選自吐溫、脂肪醇聚乙二醇醚、辛基苯基聚氧乙烯醚中一種或兩種以上的混合物，濃度在0.5‰-3‰；所述防腐劑選自疊氮鈉、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、Proclin系列其中的一種，濃度在0.5‰-4‰。優選的，所述電解質為氯化鈉，濃度為1％-4％；優選的，所述穩定劑為牛血清白蛋白；優選的，所述表面活性劑為辛基苯基聚氧乙烯醚。所述試劑盒的制備：(1)R1試劑的制備：R1試劑包括，pH為6.4-8.0的100mmol/L PB、1％-4％氯化鈉或者氯化鉀、0-5％PEG6000、0.5‰-3‰表面活性劑、0.5‰-2‰防腐劑。優選的，R1試劑包括：pH為7.2的100mmol/L PB、1％-4％氯化鈉、0-5％PEG6000、0.5‰-3‰辛基苯基聚氧乙烯醚、0.5‰-2‰對羥基苯甲酸。(2)R2試劑的制備：將100mg含有羧基的乳膠微球放入pH5.0-6.0 100mmol/L的MES溶液中，羧基的乳膠微球的終濃度為0.5％-2％。加入EDC和NHS，EDC的終濃度為0.05％-0.1％，NHS的終濃度為0.1％-0.2％。室溫攪拌15min-30min，離心取上清，用50mmol/L的PB溶液復溶，復溶后乳膠微球的終濃度在0.2％-0.4％。取10mg抗SAA抗體，用50-100mmol/L的PB進行稀釋，SAA抗體終濃度在0.5-2mg/ml。將取100mg復溶的乳膠微球和稀釋SAA抗體充分混合，乳膠微球和SAA抗體質量比為10mg：1mg，室溫攪拌2h，離心，獲得偶聯抗SAA抗體的乳膠微本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括R1試劑、R2試劑、血清淀粉樣蛋白A質控品、血清淀粉樣蛋白A校準品；所述的R1試劑包括緩沖液、電解質、穩定劑、表面活性劑、防腐劑；所述的R2試劑包括偶聯有抗SAA抗體的乳膠微球、緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑；所述的血清淀粉樣蛋白A質控品包括血清淀粉樣蛋白A質控品蛋白和稀釋液；所述的血清淀粉樣蛋白A校準品包括血清淀粉樣蛋白A校準品蛋白和稀釋液。

【技術特征摘要】
1.一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括R1試劑、R2試劑、血清淀粉樣蛋白A質控品、血清淀粉樣蛋白A校準品；所述的R1試劑包括緩沖液、電解質、穩定劑、表面活性劑、防腐劑；所述的R2試劑包括偶聯有抗SAA抗體的乳膠微球、緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑；所述的血清淀粉樣蛋白A質控品包括血清淀粉樣蛋白A質控品蛋白和稀釋液；所述的血清淀粉樣蛋白A校準品包括血清淀粉樣蛋白A校準品蛋白和稀釋液。2.根據權利要求1所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述乳膠微球是含有聚苯乙烯的多聚物，表面含有羧基基團，粒徑在70-200nm之間；所述抗SAA抗體是通過化學交聯的方法偶聯到乳膠微球表面的，所述化學交聯的方法是通過化學交聯劑在交聯緩沖液中進行的；所述的血清淀粉樣蛋白A質控品用于對所述的血清淀粉樣蛋白A校準品曲線的校準。3.根據權利要求2所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述化學交聯劑選自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、碳化亞胺、酰肼、異氰酸鉀一種或兩種以上的混合物；所述交聯緩沖液選自不含氨基的緩沖液，為2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)、PB、HEPES、MOPSO緩沖液其中的一種，pH在6.0-8.0。4.根據權利要求1所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述稀釋液包括緩沖液、穩定劑、電解質、防腐劑。5.根據權利要求1所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述血清淀粉樣蛋白A校準品是高濃度單點校準品或使用標稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的校準品，濃度為0-200mg/L。6.根據權利要求1所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述血清淀粉樣蛋白A質控品是高濃度單點質控品或使用稀釋液梯度稀釋，直接制備出不同濃度的質控品，濃度為10-100mg/L。7.根據權利要求1或4所述的定量檢測血清淀粉樣蛋白A的乳膠增強免疫比濁試劑盒，其特征在于：所述電解質選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂中一種或兩種以上的混合物，濃度在0.5％-5％之間；所述穩定劑選自酪蛋白、甘露醇、殼聚糖、牛血清白蛋白中一種或兩種以上的混合物，濃度在1‰-5‰；所述表面活...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳海燕，顧金華，楊晶，李福剛，徐建新，
申請(專利權)人：上海奧普生物醫藥有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31