抗體的包被工藝以及該工藝制成的肌紅蛋白測定試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種抗體的包被工藝以及該工藝制成的肌紅蛋白測定試劑盒，解決了現有抗體與微球的偶聯效率通常是通過多種化學物質搭橋來提高，該方式導致抗體微球的配制工藝更加復雜、成本更高的問題。本發明專利技術包括步驟一、將微球和活化劑分別溶于pH6.0的緩沖液中；步驟二、利用活化劑對微球表面的羧基進行活化得到活化微球；步驟三、將抗體加入到活化微球中進行偶聯；步驟四、再將pH8.0的緩沖液加入到抗體偶聯的活化微球中繼續反應；步驟五、反應完成后加入封閉劑完成封閉即可。本發明專利技術具有大大提高了化學偶聯的效率、簡化操作步驟、降低生產成本等優點。

Antibody coated process and myoglobin assay kit made by the process

The invention discloses an antibody coated process and myoglobin in the process made the determination kit, solves the coupling efficiency of the existing antibody and microspheres is usually enhanced by a variety of chemical substances which lead to bypass, preparation of antibody microspheres more complex, the higher the problem. The present invention includes the steps of a buffer, microspheres and activator were respectively dissolved in pH6.0; step two, using activated carboxyl agent on the microspheres were activated by activation of microspheres; step three, will be added to the activation of antibody coupled microspheres; step four, and then added to the buffer of pH8.0 antibody activated microspheres the coupling continues to react; step five, after the completion of the reaction can be completed with sealant sealing. The invention has the advantages of greatly improving the efficiency of chemical coupling, simplifying the operation steps and reducing the production cost.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種包被工藝，具體涉及一種抗體的包被工藝，并提供了該工藝制成的肌紅蛋白測定試劑盒。
技術介紹
肌紅蛋白是一種小分子蛋白質，其分子結果與血紅蛋白相似，具有在肌細胞內轉運和貯存氧的功能。人體心肌、骨骼肌內含有大量肌紅蛋白，正常人的血液中很少，主要由腎臟代謝并排泄。當心肌或橫紋肌有損傷時，肌紅蛋白便釋放入血中，血清中的肌紅蛋白即可明顯升高，因此肌紅蛋白測定可用于某些肌病和心臟病的診斷，如急性心肌梗死(AMI)、急性肌損傷、急慢性腎衰竭、嚴重充血性心力衰竭、長時間休克、肌營養不良、肌萎縮和多發性肌炎等疾病。膠乳增強免疫比濁法中，需采用物理或化學的方法將抗體吸附或偶聯到膠乳微球的表面。其中物理吸附法存在穩定性不佳，抗體容易脫落下來，同時對于樣本中的干擾物質的抗性差，容易產生假陽性的測定結果。化學偶聯法將抗體隨機偶聯到微球表面，因偶聯的隨機性，可能導致部分抗體損失結合力，大大增加了試劑的成本。而現有采用化學偶聯的方法制備的肌紅蛋白測定試劑盒中，抗體與微球之間通常是采用多種化學物質搭橋來提高偶聯效率，該方式會導致抗體微球的配制工藝更加復雜、成本更高。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是：現有抗體與微球的偶聯效率通常是通過多種化學物質搭橋來提高，該方式導致抗體微球的配制工藝更加復雜、成本更高；本專利技術的目的在于提供僅僅只使用一種活化劑即可有效提高抗體與微球之間偶聯效率的抗體包被工藝，并提供了包括該工藝制備的抗體微球的肌紅蛋白測定試劑盒。本專利技術通過下述技術方案實現：一種抗體的包被工藝，包括：步驟一、將微球和活化劑分別溶于pH6.0的緩沖液中；步驟二、利用活化劑對微球表面的羧基進行活化得到活化微球；步驟三、將抗體加入到活化微球中進行偶聯；步驟四、再將pH8.0的緩沖液加入到抗體偶聯的活化微球中繼續反應；步驟五、反應完成后加入封閉劑完成封閉即可。本專利技術采用的是不同于常規的抗體與聚苯乙烯微球化學偶聯的方法，在常規的化學偶聯的工藝上對包被過程中的pH值進行調整，將抗體與聚苯乙烯羧基微球有效連接，提高抗體與微球之間的有效結合，大大提高了化學偶聯的效率，同時有效節約成本。進一步，所述緩沖液采用磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液，所述微球采用聚苯乙烯膠乳微球，所述活化劑為EDAC。EDAC或EDC為同一物質，均為常用的水溶性碳二亞胺，是1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)能夠催化羧基，使其與氨基縮合形成酰胺鍵，反應條件溫和、方便易行，只要蛋白質與要偶聯的標記分子及EDC按一定比例混合到一起，室溫下中性pH即可反應，一般1-2小時即可完成。更進一步地，所述步驟二中微球活化時間為30min，所述步驟三中抗體與微球的偶聯時間為1h，所述步驟四中反應時間為1h。優選地，所述步驟五中封閉劑為酪蛋白或/和甘氨酸。為了能提高試劑的穩定性能，所述步驟五的封閉時間為30min，封閉完成后再加入pH8.0的緩沖液，調節pH后加入保護劑。優選地，所述保護劑為海藻糖或/和木糖醇。一種肌紅蛋白測定試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，所述R1試劑的配比為：磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液50-150mmol/L，酪蛋白1-10g/L，Triton X-100 5-10g/L，氯化鉀15-30g/L，聚乙二醇5-30g/L，疊氮鈉1g/L；所述R2試劑的配比為：磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液50-150mmol/L，酪蛋白1-10g/L，疊氮鈉1g/L，海藻糖20-50g/L，木糖醇20-50g/L，甘氨酸1-10g/L，采用上述工藝制成的結合有肌紅蛋白抗體的聚苯乙烯膠乳微球，所述結合有肌紅蛋白抗體的聚苯乙烯膠乳微球占R2試劑總體積的3-5％。本專利技術與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果：1、本專利技術通過對包被過程中pH值的調整，使抗體與聚苯乙烯羧基微球有效連接，大大提高了化學偶聯的效率；2、本專利技術僅僅只采用一種活化劑即可實現抗體與聚苯乙烯羧基微球之間的偶聯，且偶聯效率明顯高于現有方法偶聯的效率，操作更加簡單、成本更加低廉，效果更加顯著。具體實施方式為使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚明白，下面結合實施例，對本專利技術作進一步的詳細說明，本專利技術的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本專利技術，并不作為對本專利技術的限定。實施例1一種抗體的包被工藝，具體過程如下：步驟一、將微球和活化劑分別溶于pH6.0的緩沖液中；本步驟中所述緩沖液采用磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液，所述微球采用聚苯乙烯膠乳微球，所述活化劑為EDAC。步驟二、利用活化劑對微球表面的羧基進行活化；即將包含有EDAC的緩沖液加入到溶解后的微球中進行微球表面羥基的活化，活化時間為30min。步驟三、然后將抗體加入到活化后的微球中進行偶聯，偶聯時間為1h；步驟四、再將pH8.0的磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液加入到抗體偶聯的微球中繼續反應，反應時間為1h；步驟五、反應完成后加入酪蛋白和甘氨酸完成封閉，封閉時間為30min；封閉完成后再加入pH8.0的磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液并調整pH值至7.5，然后加入海藻糖和木糖醇作為保護劑后保存即可。由于微球和抗體的添加量，以及封閉劑和保護劑的類型與添加量均與現有技術相同，因此上述各物質的添加量和添加種類不再一一贅述。本專利技術中僅僅只采用一種活化劑，即EDAC，并通過整個過程中pH梯度包被的方式有效實現抗體與微球之間偶聯效率的增加，其檢測結果如表1和圖1所示。實施例2本實施例為實施例1的對照實施例，本實施例與實施例1的區別在于，本實施例修改了步驟三以后的具體操作過程，同時，本實施例整個過程中的pH值不同，該步驟三以后的具體過程如下：步驟三、然后將抗體加入到活化后的微球中進行偶聯，偶聯時間為2h；步驟四、反應完成后加入酪蛋白和甘氨酸完成封閉，封閉時間為30min；封閉完成后再加入與步驟一中pH值相同的磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液，并調整pH值至7.5，然后加入海藻糖和木糖醇作為保護劑后保存即可。本實施例分別采用不同pH值的緩沖液進行試驗，檢測出不同pH包被后校準曲線的數值，檢測出的數值結果如表1所示。表1濃度(ng/ml)pH5.0pH6.0pH7.0pH8.0pH梯度包被0142511221510010520027824534520025438758751171140054875411521015148280010101584227521012904并檢測出不同PH條件下抗體與微球之間的偶聯效率圖，如圖1所示。通過圖1中偶聯效率的顯示可知，采用實施例1中pH梯度包被的方式，能極大地增加偶聯效率，效果十分顯著。實施例3本實施例與實施例1和實施例2的區別在于，本實施例中采用的活化劑選擇為EDAC和Sulfo-NHS兩種，即在活化過程中，同時采用EDAC和Sulfo-NHS對微球進行活化，其他操作步驟與實施例1和實施例2完全相同。本實施例同時給出了采用實施例1和實施例2中兩種活化包被方法進行包被后的校準曲線的數值，該數值如表1所示，并檢測出不同pH條件下的偶聯效率圖，如圖2所示。表2通過圖2的結果顯示可知，采用本專利技術中pH梯度包被的方式相對pH固定值而言，抗體與微球之間的偶聯效率有一定的提高。但本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種抗體的包被工藝，其特征在于，包括：步驟一、將微球和活化劑分別溶于pH6.0的緩沖液中；步驟二、利用活化劑對微球表面的羧基進行活化得到活化微球；步驟三、將抗體加入到活化微球中進行偶聯；步驟四、再將pH8.0的緩沖液加入到抗體偶聯的活化微球中繼續反應；步驟五、反應完成后加入封閉劑完成封閉即可。

【技術特征摘要】
1.一種抗體的包被工藝，其特征在于，包括：步驟一、將微球和活化劑分別溶于pH6.0的緩沖液中；步驟二、利用活化劑對微球表面的羧基進行活化得到活化微球；步驟三、將抗體加入到活化微球中進行偶聯；步驟四、再將pH8.0的緩沖液加入到抗體偶聯的活化微球中繼續反應；步驟五、反應完成后加入封閉劑完成封閉即可。2.根據權利要求1所述的一種抗體的包被工藝，其特征在于，所述緩沖液采用磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液，所述微球采用聚苯乙烯膠乳微球，所述活化劑為EDAC。3.根據權利要求1所述的一種抗體的包被工藝，其特征在于，所述步驟二中微球活化時間為15-45min，所述步驟三中抗體與微球的偶聯時間為0.5-1.5h，所述步驟四中反應時間為0.5-1.5h。4.如權利要求1所述的一種抗體的包被工藝，其特征在于，所述步驟五中封閉劑為酪蛋白或/和甘氨酸。5.如權利要求1所述的一種抗體的包被工藝的配置方法，其特征在于，所述步驟五的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林婷婷，林源，譚韜，
申請(專利權)人：四川新健康成生物股份有限公司，
類型：發明
國別省市：四川;51