一種維生素D結合肽及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種維生素D結合肽及其應用，維生素D結合肽的基序為LFLLLF。本發明專利技術的維生素D結合肽，可以作為抗原很好地誘導出針對維生素D結合蛋白的抗體，進而對維生素D結合蛋白進行精確定量，實現體內維生素D含量的定量檢測。

Vitamin D binding peptide and application thereof

The invention discloses a vitamin D binding peptide and application thereof. The motif of the vitamin D binding peptide is LFLLLF. The invention of vitamin D binding peptide as antigen, can well induce the vitamin D binding protein antibodies, and the vitamin D binding protein for accurate quantitative, quantitative detection of vitamin D content.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種多肽，特別涉及一種維生素D結合肽及其應用。
技術介紹
維生素D是一種由長的碳氫鏈或稠環組成的脂溶性維生素，是類固醇衍生物。它促進正常骨骼的形成，增強小腸和腎臟對鈣、磷、鐵和鋅離子的吸收，并且能夠調節包括骨骼和心臟在內的所有肌肉的健康、免疫反應、血糖和體內胰島素的水平。對于人類來說，與身體健康狀況密切相關的最重要的兩種維生素D的形式是維生素D2和維生素D3，又分別稱作麥角鈣化醇和膽鈣化醇[1]。麥角鈣化醇和膽鈣化醇能夠從飲食和補充劑攝取[1][2][3]，但很少的食物含有天然的鈣化醇和膽鈣化醇。事實上，無論成年人有多充足的營養，他們都不可能從飲食本身獲得足夠的維生素D。因此，維生素是在紫外線的照射下，通過皮膚的光化學作用合成的。維生素D3是在皮膚的基底層，7-脫氫膽固醇吸收紫外線的B光子，生成維生素D3的前體，隨后經歷一個與溫度變化有關的三烯結構的重排形成維生素D3、光甾醇和速固醇（Fig.1.1）[4][5][6]。在2004年邁克爾指出，維生素D3的合成受季節、生活所在地的緯度、種族、年齡、皮膚色素的沉著和其他的因素。維生素D對人的身體健康非常重要。維生素D激素性的作用包括監管骨骼和肌肉的健康，調節免疫反應，調節胰島素和血糖，,調節鈣、磷分解代謝。所以，維生素D缺乏是威脅人類健康的一個重大問題。測量血清25羥基維生素D (25(OH)D) 的濃度是確定維生素D狀態最好的測試方法。體內25(OH)D的水平分段如下[14]：維生素D不足：21-29 ng/mL (52.5-72.5 mmol/L)維生素D缺乏：< 20 ng/mL (< 50 mmol/L)雖然對維生素D不足的診斷并不總是必需的，但其在一定程度上反映人體的健康狀況。血清甲狀旁腺激素水平的測定可能有助于確立維生素D不足的診斷，如維生素D不足的患者往往有甲狀旁腺激素水平的升高，提示繼發性甲狀旁腺功能亢進。維生素D缺乏已被證明幾乎在每一個重大疾病中發揮一定作用。這包括:骨質疏松癥和骨量減少,17個類型的癌癥(包括乳腺癌、前列腺癌和結腸癌)、心臟病、高血壓、肥胖、代謝綜合征、糖尿病、自身免疫性疾病、多發性硬化癥、風濕性關節炎、骨關節炎、黏液囊炎、痛風、不孕和經前綜合癥,帕金森氏癥、抑郁癥和季節性情緒失調,阿爾茨海默氏癥、慢性疲勞綜合癥、纖維肌痛、慢性疼痛、牙周疾病,牛皮癬等。接下來詳細介紹維生素D缺乏與這些疾病發生的密切關系。在骨骼系統中，骨骼、腸道和腎臟中存在很多維生素D的特異性受體，能夠發揮其骨骼生物效應，促進鈣的吸收利用。1, 25 （OH）2VD3調節甲狀旁腺激素（PTH）和成纖維細胞生長因子23（FGF23）的分泌，對維持體內正常骨礦平衡和骨的形成起重要的作用。如果成年人體內VD缺乏，就會引起骨軟化癥，老年人維生素D缺乏就會發生骨質疏松，而其發生在嬰幼兒體內時，就會出現佝僂病。而且維生素D缺乏還會引起肌肉無力，增加骨折和跌倒的風險等嚴重后果。在免疫系統方面，1, 25 （OH）2VD3可抑制淋巴細胞增殖及免疫球蛋白的產生，延緩B淋巴細胞活化成漿細胞的過程，對自身免疫性疾病具有益處，還能誘導抗菌肽表達,殺傷病原微生物[15]。VD水平降低時能增加自身免疫疾病的風險，如1型糖尿病、多發性硬化癥和克隆氏病[16]。維生素D缺乏還能增加病毒性感染的風險，包括艾滋病病毒（HIV）和流行性感冒[17][18][19]，也是患結核病的一個危險因素[20]。補充1, 25 （OH）2VD3對這些疾病及炎癥性關節炎、炎性腸病和肺結核等具有預防或治療作用，還可以減少發生系統性紅斑狼瘡的風險。在腫瘤方面，有生物活性的1, 25 （OH）2VD3對大多數細胞具有抗增殖和促進分化作用，具有潛在的抗腫瘤活性。特別是1, 25 （OH）2VD3刺激細胞周期抑制子p21和p27及細胞粘附分子E-鈣粘蛋白的表達，同時抑制β-連環蛋白的轉錄活性。維生素D也可以抵抗細菌和病毒感染。體內充足的維生素D營養狀況可以預防一系列的癌癥，如膀胱癌、前列腺癌、甲狀腺癌、淋巴瘤、胃癌等[21]。但研究發現，服用維生素D補充劑對患癌癥的風險沒有顯著影響[22]。而一些研究已經表明,維生素D3降低癌癥的死亡率,但關于這方面的數據的性質被關注[23]。活性維生素D調節激素分泌，胰腺的β細胞內存在VDR和調節胞內鈣濃度的鈣結合蛋白-D28K，1,25(OH)2VD與維生素D受體（VDR）結合可調節胰島素分泌。維生素D缺乏，能夠增加發生2型糖尿病的風險。血清25（OH） VD可以作為免疫調節劑用于腎移植，血清25（OH） D在腎移植中具有保護移植腎的功能[24]。在心血管疾病方面，維生素D缺乏人群冠心病、心力衰竭和周圍血管疾病的患病率顯著增加[25] 。維生素D缺乏易引起呼吸道的感染，并且與哮喘的發生存在著相關性。在精神疾病方面，維生素D的缺乏可能增加抑郁癥、精神分裂癥，認知障礙和孤獨癥譜系障礙等心理疾病的風險；.也是慢性腎臟病發生的危險因素。妊娠期間VD缺乏與子癇前期、胰島素抵抗和妊娠期糖尿病相關。維生素D在體內的營養狀態，與臨床上多個系統、多種疾病的發生發展都有密切的關系，被稱為“疾病預防的明日之星”[26]。但長期或大劑量的使用維生素D，能使血清25（OH） VD的濃度升高和高鈣血癥，臨床上表現出中毒癥狀。有研究者認為，血清25（OH） VD>100ng/ml稱維生素D中毒。因此，維生素D在人體內扮演著重要的角色，檢測體內維生素D的水平也成為一種趨勢。維生素D是有生物學上的惰性，其必須在體內經過兩次羥基化才能被激活具有生物活性。維生素D進入體內循環系統，與血液中的載體蛋白即維生素D結合蛋白結合，然后運輸到靶組織和儲存的位點，主要是脂肪和肌肉[7]。當維生素D運送到肝臟，它經過C25位點的CYP27A1酶的羥化作用轉化成25羥基維生素D，又稱為骨化二醇（25OHD）。這是維生素D 在體內的第一次代謝，6個六個細胞色素P450亞型(CYP27A1,CYP2R1、CYP2C11 CYP3A4,CYP2D25和CYP2J3)全部參與了維生素D3 25羥基化的活動[8]。25羥基維生素D轉運出肝臟與維生素D結合蛋白結合，然后轉運到腎臟在C1α位點的CYP27B1酶再次羥基化的作用下，最后轉變成具有生物活性的骨化三醇，即1α,25（OH）2D。當體內1α,25（OH）2D含量充足時，它在CYP24酶的作用下轉化成24,25(OH)2D（Fig.1.2）。骨化三醇是腎臟中的活化形式，并且也能與維生素D結合蛋白結合，被轉運到有維生素D受體表達的靶組織，主要有骨骼，小腸和甲狀旁腺，然后以基因組或者非基因組的形式發揮其作用。25羥基維生素D的濃度最高，最穩定，半衰期最長（大于兩周），是維生素D在體內的主要運輸形式。因此，血清25(OH)D水平是評價體內的維生素D狀態的最有效的指標[9]。參考文獻：[1] Holick M F . High prevalence of vitamin D inadequacy and implications for health [J]. Mayo Clin. Proc. 2006,81(3): 353–373.[本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種維生素D結合肽，其基序為LFLLLF。

【技術特征摘要】
1.一種維生素D結合肽，其基序為LFLLLF。2.根據權利要求1所述的維生素D結合肽，其特征在于：基序的一端連接有不多于3個的氨基酸。3.根據權利要求1所述的維生素D結合肽，其特征在于：其序列為LFLLLF。4.維生素D結合肽在制備維生素D結合蛋白抗原中的應用，其中，維生素D結合肽如權利要求1～3任意一項所述。5.一種維生素D結合蛋白抗體，其特征在于：由偶聯有權利要求1～3任意一項所述維生素D結合肽的載體誘導動物體得到。6.一種維...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧偉民，王海彬，姜冰潔，安娜，張俊龍，
申請(專利權)人：廣州軍區廣州總醫院，
類型：發明
國別省市：廣東;44