本發明專利技術公開了苯甲氧羰基?L?谷氨酸在制備BLyS拮抗劑的用途，競爭ELISA實驗結果表明：苯甲氧羰基?L?谷氨酸能夠抑制BLyS與TACI?Fc的結合。抑制作用與苯甲氧羰基?L?谷氨酸的濃度呈正相關。苯甲氧羰基?L?谷氨酸能夠抑制BLyS與BCMA?Fc的結合；抑制作用與苯甲氧羰基?L?谷氨酸的濃度呈正相關。苯甲氧羰基?L?谷氨酸可以作為潛在的BLyS小分子拮抗劑。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，涉及苯甲氧羰基-L-谷氨酸作為BLyS拮抗劑的用途。
技術介紹
B淋巴細胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)，又稱為B細胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)，是TNF家族中的一員。由單核細胞和巨噬細胞持續合成、分泌。BLyS能夠結合B細胞表面的三種受體，B細胞成熟抗原(B cell mature antigen,BCMA)，跨膜激活物和CAML結合物(Transmembrane activator and CAML-interactor,TACI)以及BAFF受體3(BR3)。受體結合BAFF后，減少成熟B細胞的凋亡。如果敲除BAFF，小鼠體內的成熟B細胞完全缺失。由于BLyS在B淋巴細胞活化、增殖中發揮重要作用，而B淋巴細胞產生的抗體所介導的體液免疫在眾多已發現的自身免疫性疾病當中處于中心地位。目前認為BLyS在體內的過量表達與某些自身免疫性疾病如系統性紅斑狼瘡(SLE)、類風濕性關節炎(RA)等病程的發生、發展密切相關。因此，以阻斷BLyS生物學功能為策略，探討BLyS抑制拮抗劑治療系統性紅斑狼瘡和類風濕性關節炎等自身免疫性疾病和B細胞腫瘤疾病的研究正在國外如火如荼的進行中。目前，針對BLyS的抑制劑的研究主要集中在研制具有中和BLyS作用的BLyS誘餌受體(decoy receptor)、抗BLyS抗體和拮抗肽[1-3]。2011年3月美國FDA批準由人類基因科學公司(Human Genome Sciences)和葛蘭士-史克(GlaxoSmithKline)公司聯合研發的抗BLyS抗體BENLYSTA(Belimumab)治療系統性紅斑狼瘡。這是50年來，FDA首次批準治療該類疾病的藥物。但是蛋白抑制劑作為治療藥物具有一定的局限性，例如來源較少和分離純化難度大以及藥物穩定性較差，另外還存在口服的生物利用度較低，主要是因為體內各種酶對多肽類藥物的降解性高，從而會導致這一類藥物的作用半衰期大大縮短。因此，開發小分子化合物作為BLyS抑制劑的研究具有重要的現實意義。目前，尚未有苯甲氧羰基-L-谷氨酸在制備BLyS拮抗劑的用途的報道。1.Jian Sun*(孫劍),Zhou Lin,Jiannan Feng,Yan Li,Beifen Shen.(2008)BAFF-targeting therapy,a promising strategy for treating autoimmune diseases.Eur J Pharmacol 597:1–5.2.Yacong Zhao,Xiafei Hao,Jiannan Feng,Beifen Shen,Jing Wei*(魏靜),Jian Sun*(孫劍)(2015),The comparison of BLyS-binding peptides from phage display library and computer-aided design on BLyS–TACI interaction.Int Immunopharmacol,24:219–223.3.Xiafei Hao,Yanfeng Zhu,Chang Zheng,Xuegang Fu,Jiannan Feng,Beifen Shen,Jing Wei*(魏靜),Jian Sun*(孫劍).A comparison of biological activity of B lymphocyte stimulator(BLyS)antagonist peptibodies and the elucidation of possible BLyS binding sites.Protein&Peptide Letters,2016,23,17-234.Xuegang Fu,Liyan Xuan,Yuzhe Wang,Jing Wei*(魏靜),Jian Sun*(孫劍).Molecular mechanism of the affinity interactions between BAFF and its peptides by molecular simulations.Protein&Peptide Letters,2015,22,992-999.
技術實現思路
本專利技術的目的是克服現有技術的不足，提供苯甲氧羰基-L-谷氨酸在制備BLyS拮抗劑的用途。本專利技術的技術方案概述如下：苯甲氧羰基-L-谷氨酸在制備BLyS拮抗劑的用途苯甲氧羰基-L-谷氨酸下面簡稱為CBz-L-谷氨酸。本專利技術的優點：1.對于BLyS結合TACI具有顯著抑制作用競爭ELISA實驗結果表明：CBz-L-谷氨酸濃度在1mg/mL時能夠抑制1.26±3.79％BLyS與TACI-Fc的結合；在3mg/mL時能夠抑制59.35±11.87％BLyS與TACI-Fc的結合；在5mg/mL時能夠抑制74.13±6.78％BLyS與TACI-Fc的結合。抑制作用與CBz-L-谷氨酸的濃度呈正相關。非結合BAFF的小分子化合物(苯甲酸)，即陰性對照，對BLyS與TACI的相互作用沒有明顯抑制作用、且沒有劑量依賴關系。證明CBz-L-谷氨酸的抑制作用是特異和有效的。2.對于BLyS結合BCMA具有顯著抑制作用競爭ELISA實驗結果表明：CBz-L-谷氨酸濃度在1mg/mL時能夠抑制5.63±0.88％BLyS與BCMA-Fc的結合；在3mg/mL時能夠抑制56.70±7.90％BLyS與BCMA-Fc的結合；在5mg/mL時能夠抑制82.80±3.98％BLyS與BCMA-Fc的結合。抑制作用與CBz-L-谷氨酸的濃度呈正相關。陰性對照化合物(苯甲酸)對BLyS與BCMA的相互作用沒有明顯抑制作用、且沒有劑量依賴關系。證明CBz-L-谷氨酸的抑制作用是特異和有效的。附圖說明圖1為BLyS結合受體的關鍵殘基，+表示關鍵殘基。圖2為BLyS結合口袋的分子表面和關鍵殘基，D1表示保守性結合區域，D2表示特異性結合區域。圖3為虛擬篩選流程圖。圖4為CBz-L-谷氨酸(苯甲氧羰基-L-谷氨酸)結構式。圖5為CBz-L-谷氨酸與BLyS的相互作用的模式。圖6為CBz-L-谷氨酸抑制TACI對BLyS的結合作用。**代表p<0.01；*代表0.01<p<0.05。圖7為CBz-L-谷氨酸抑制BCMA對BLyS的結合作用。**代表p<0.01。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術作進一步的說明。眾多研究已經詳細闡述BLyS與受體相互作用的可能模式及關鍵氨基酸。我們在前期工作中通過分子動力學模擬，基于BLyS和其受體BCMA的晶體結構，通過計算機模擬BLyS與其三個天然受體的相互作用模式，探究其參與保守性結合作用和親和力選擇性的關鍵殘基。在此基礎上，利用“鎖鑰原理”，針對關鍵結合區域進行商業化化學小分子數據庫進行分子虛擬篩選，預測得到一系列具有潛在抑制作用的小分子化合物，獲得其實體并進行體外活性測定發現，二元酸類化合物二苯甲酰酒石酸具有本文檔來自技高網...
【技術保護點】
苯甲氧羰基?L?谷氨酸在制備BLyS拮抗劑的用途。
【技術特征摘要】
1.苯甲氧羰基-L-谷氨酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：魏靜，孫劍，傅學鋼，郝霞飛，
申請(專利權)人：天津大學，
類型：發明
國別省市：天津;12
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