本發明專利技術公開了一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備方法，通過對來源于人類的胎盤組織進行剪斷破碎、降解、過篩、分離得到胎盤亞全能干細胞；然后將胎盤亞全能干細胞置于含有氨基酸、非必需氨基酸、細胞成長因子的干細胞培養液中進行培養；最后將收集到的上清液進行過濾處理并添加小分子膠原蛋白肽，就可得到胎盤亞全能干細胞培養液。本發明專利技術制備的胎盤亞全能干細胞培養液活性物質含量豐富、生物活性高，不僅可以護理和保養皮膚，而且可以促進皮膚的修復再生，加強皮膚的新陳代謝。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物化妝品
，更具體的說是涉及一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備。
技術介紹
干細胞是一類具有自我復制和多向分化特征的始祖細胞。干細胞是人體基本的結構單位和功能單位，由此可知干細胞是人體各種組織器官的起源細胞。人體從受精卵發育到胎兒，從胎兒發育到成年的整個過程中，干細胞逐級喪失其全能性，從全能的胚胎干細胞形成亞全能干細胞、多能干細胞以及專能干細胞；這些處于不同發育階段的干細胞在人體組織器官的發育、生長、損傷、修復過程中發揮著決定性的作用，因此可以說干細胞能夠促使機體活力旺盛，令機體保持健康狀態。胎盤亞全能干細胞屬于成體干細胞范疇，來源于新生兒胎盤組織的一族亞全能干細胞，可以用于藥物、毒物的檢測系統；藥物和基因的靶向轉運系統；整容美容領域。鑒于胎盤亞全能干細胞廣闊的應用前景，針對目前市面上的皮膚護理產品多為精細化工產品，初始原料中雜質殘留較多，功效成分本身的生物活性低且難以維持，改善皮膚生理狀態的效果不佳，并且部分產品長期使用甚至會對皮膚產生損害的情況，可以將胎盤亞全能干細胞應用于皮膚護理產品中。因此，如何提供一種不僅可以保證生物活性和安全性，而且對皮膚有很好護理和保養效果的產品是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術提供了一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備方法，本專利技術制備的胎盤亞全能干細胞培養液不僅含有豐富的活性物質，可以護理和保養皮膚，而且可以促進皮膚的修復再生，加強皮膚的新陳代謝。為了實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備，具體包括如下步驟：(1)將采集的人類胎盤組織通過無菌方式進行剪斷破碎為＜5mm3的小塊胎盤組織；(2)在37℃的條件下用5mg/mL的胰蛋白酶對小塊胎盤組織進行消化降解30min，降解期間溫和震蕩5次，降解結束后，通過細胞篩離心收集細胞懸液；(3)采用磁式細胞分選法對細胞懸液進行分離，首先使用CD184+磁珠進行陰性選擇得到CD184-細胞，然后用CD151-磁珠分離得到CD151+CD184-細胞，最后用Oct4-磁珠分離出目的細胞，即胎盤亞全能干細胞；(4)將分離出的胎盤亞全能干細胞接種于裝有干細胞培養液的無菌塑料培養瓶中進行原代培養，培養時間為3天，細胞正常長滿瓶底后，原代培養結束；(5)用0.25％W/V的胰蛋白酶對原代培養的細胞進行酶解消化1min，然后加入干細胞培養液終止酶解并吹打細胞，得到原代培養酶解液；(6)原代培養酶解液與干細胞培養液以1∶3的體積比混合后置于無菌塑料培養瓶中進行傳代培養，每代培養時間為3天，培養代次為四代；(7)將傳代培養至第四代的無菌塑料培養瓶中的細胞上清液收集到無菌瓶中，并在設置有0.22μm的無菌混合纖維濾膜的過濾裝置中進行過濾，得到過濾后的細胞上清液；(8)向過濾后的細胞上清液中添加3-5mg/L，分子量為180-3000道爾頓的小分子膠原蛋白肽，即得到胎盤亞全能干細胞培養液。優選的，在上述用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備中，所述干細胞培養液是由60-70％體積的無血清無酚紅DMEM/F12培養液和30-40％體積的MCDB-201培養液混合，再添加下列終濃度組分的10-100μg/mL的亞麻酸、10-100μg/mL的亞油酸、1-5％體積的非必需氨基酸、1-10mmol/L的谷氨酰胺、10-100ng/mL的人表皮細胞生長因子、10-100ng/mL的肝細胞生長因子、10-100ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子配制而成。優選的，在上述用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備中，所述胎盤亞全能干細胞在所述無菌塑料培養瓶中貼壁生長，表達Oct4、Sox2、Nanog、c-Myc、Nestin、CD90、CD29、CD13、CD166、CD105，不表達CD184、CD31、CD34、CD45、CD133、CD106、CD11b、CD271、HLA-II，可以向人體內、中、外胚層組織分化，包括但不限于血管、神經、肝臟、心肌、骨、軟骨和脂肪組織分化。優選的，在上述用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備中，所述無菌塑料培養瓶的體積為75cm2。經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本專利技術公開了一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備方法，首先是將來源于人類的胎盤組織進行剪斷破碎，破碎后通過胰蛋白酶對其降解、過篩，然后用常規的磁式細胞分選法分離得到原代單個核細胞，即用于細胞培養的胎盤亞全能干細胞；最后將得到的胎盤亞全能干細胞接種至干細胞培養液中進行原代培養、傳代培養，培養結束后將培養瓶中的上清液收集并過濾，過濾后在濾液中添加小分子的膠原蛋白肽，即制得胎盤亞全能干細胞培養液。本專利技術提供的胎盤亞全能干細胞培養液中未添加細胞培養常用的胎牛血清，并且整個制備過程中未添加抗生素，保證了使用的安全性，防止了因異種蛋白過敏或抗生素過敏而引發的安全性問題。本專利技術在制備胎盤亞全能干細胞培養液的過程中，一方面選用的是傳代培養第四代細胞培養的上清液，保證了不僅生物活性高，而且活性物質含量豐富；并且將第四代的細胞培養上清液收集之后用0.22μm的無菌混合纖維濾膜進行過濾，清除了上清液中對皮膚有傷害的物質，如殘留微生物、干細胞或者大型碎片，保證了使用的安全性；另一方面在過濾后的上清液中添加了小分子膠原蛋白肽，分子量為180-3000道爾頓，不僅可以增強皮膚的吸收效果，更好的鎖住水分，讓皮膚時刻處于濕潤狀態，而且可以提升皮膚亮度，實現美白的效果。因此，本專利技術可以有效的對皮膚進行護理和保養，具有廣闊的應用前景。具體實施方式下面將結合本專利技術實施例，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒緦＠夹g中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。本專利技術實施例公開了一種不僅含有豐富的活性物質，可以對皮膚進行安全有效的護理和保養，而且可以促進皮膚的修復再生，加強皮膚的新陳代謝，讓皮膚時刻保持濕潤，提升皮膚亮度，實現美白效果的胎盤亞全能干細胞培養液。本專利技術提供的一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備，具體包括如下步驟：(1)將采集的人類胎盤組織通過無菌方式進行剪斷破碎為＜5mm3的小塊胎盤組織；(2)在37℃的條件下用5mg/mL的胰蛋白酶對小塊胎盤組織進行消化降解30min，降解期間溫和震蕩5次，降解結束后，通過細胞篩離心收集細胞懸液；(3)采用磁式細胞分選法對細胞懸液進行分離，首先使用CD184+磁珠進行陰性選擇得到CD184-細胞，然后用CD151-磁珠分離得到CD151+CD184-細胞，最后用Oct4-磁珠分離出目的細胞，即胎盤亞全能干細胞；(4)將分離出的胎盤亞全能干細胞接種于裝有干細胞培養液的無菌塑料培養瓶中進行原代培養，培養時間為3天，細胞正常長滿瓶底后，原代培養結束；(5)用0.25％W/V的胰蛋白酶對原代培養的細胞進行酶解消化1min，然后加入干細胞培養液終止酶解并吹打細胞，得到原代培養酶解液；(本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備，其特征在于，具體包括如下步驟：(1)將采集的人類胎盤組織通過無菌方式進行剪斷破碎為＜5mm3的小塊胎盤組織；(2)在37℃的條件下用5mg/mL的胰蛋白酶對小塊胎盤組織進行消化降解30min，降解期間溫和震蕩5次，降解結束后，通過細胞篩離心收集細胞懸液；(3)采用磁式細胞分選法對細胞懸液進行分離，首先使用CD184+磁珠進行陰性選擇得到CD184?細胞，然后用CD151?磁珠分離得到CD151+CD184?細胞，最后用Oct4?磁珠分離出目的細胞，即胎盤亞全能干細胞；(4)將分離出的胎盤亞全能干細胞接種于裝有干細胞培養液的無菌塑料培養瓶中進行原代培養，培養時間為3天，細胞正常長滿瓶底后，原代培養結束；(5)用0.25％W/V的胰蛋白酶對原代培養的細胞進行酶解消化1min，然后加入干細胞培養液終止酶解并吹打細胞，得到原代培養酶解液；(6)原代培養酶解液與干細胞培養液以1∶3的體積比混合后置于無菌塑料培養瓶中進行傳代培養，每代培養時間為3天，培養代次為四代；(7)將傳代培養至第四代的無菌塑料培養瓶中的細胞上清液收集到無菌瓶中，并在設置有0.22μm的無菌混合纖維濾膜的過濾裝置中進行過濾，得到過濾后的細胞上清液；(8)向過濾后的細胞上清液中添加3?5mg/L，分子量為180?3000道爾頓的小分子膠原蛋白肽，即得到胎盤亞全能干細胞培養液。...
【技術特征摘要】
1.一種用于皮膚護理和保養的胎盤亞全能干細胞培養液的制備，其特征在于，具體包括如下步驟：(1)將采集的人類胎盤組織通過無菌方式進行剪斷破碎為＜5mm3的小塊胎盤組織；(2)在37℃的條件下用5mg/mL的胰蛋白酶對小塊胎盤組織進行消化降解30min，降解期間溫和震蕩5次，降解結束后，通過細胞篩離心收集細胞懸液；(3)采用磁式細胞分選法對細胞懸液進行分離，首先使用CD184+磁珠進行陰性選擇得到CD184-細胞，然后用CD151-磁珠分離得到CD151+CD184-細胞，最后用Oct4-磁珠分離出目的細胞，即胎盤亞全能干細胞；(4)將分離出的胎盤亞全能干細胞接種于裝有干細胞培養液的無菌塑料培養瓶中進行原代培養，培養時間為3天，細胞正常長滿瓶底后，原代培養結束；(5)用0.25％W/V的胰蛋白酶對原代培養的細胞進行酶解消化1min，然后加入干細胞培養液終止酶解并吹打細胞，得到原代培養酶解液；(6)原代培養酶解液與干細胞培養液以1∶3的體積比混合后置于無菌塑料培養瓶中進行傳代培養，每代培養時間為3天，培養代次為四代；(7)將傳代培養至第四代的無菌塑料培養瓶中的細胞上清液收集到無菌瓶中，并在設置有0.22μm的無菌混合纖維濾膜的過濾裝置中進行過濾，得到過濾后的細胞上清液；(8)向過濾后的細胞上清液中添加3-5mg/L，分子量為180-...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊振亞，韓之波，
申請(專利權)人：北京漢氏聯合生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。