一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物及其制備方法技術

本發明專利技術提供了一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物及其制備方法，該抗原抗體復合物包括抗原和抗體，所述抗原為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒混合得到的三聯病毒液，所述抗體是由所述抗原制備的三聯卵黃抗體。本發明專利技術旨在提供一種使用方便快捷，能安全有效的防治豬病毒性腹瀉的抗原抗體復合物及其制備方法。這種抗原抗體復合物能有效降低機體的免疫應激反應，加快保護產生速度，迅速提高機體抗體滴度，在生產和使用過程中會不存在散毒風險。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于生物
，尤其是涉及一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物及其制備方法。
技術介紹
目前，豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉和豬輪狀病毒腹瀉是我國豬群中危害最嚴重的三種病毒性腹瀉病，嚴重影響了養豬業的發展。豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒引起的，是以豬嘔吐、腹瀉、脫水為特征的傳染病，對新生豬仔具有高度致死率；豬流行性腹瀉是豬流行性腹瀉病毒引起的一種豬腸道傳染病，以水瀉、嘔吐和脫水為特征，各年齡的豬均易感，尤其哺乳仔豬受害最為嚴重，主要發生在冬季和早春天氣較為寒冷的季節；流行病學調查顯示，豬群中輪狀病毒的帶毒率非常高，中豬和大豬多為亞臨床感染和隱性感染，即只攜帶病毒不發病，發病的只是仔豬。這三種病常常混合感染，在流行病學、臨床癥狀、病理解剖學變化上都非常的相似，很難區分到底是哪一種病毒感染，而且發病迅速，因此，治療豬的病毒性腹瀉疾病已刻不容緩。現在用于治療豬病毒性腹瀉的主要產品包括疫苗、抗生素、中藥及其制劑。疫苗需要一定時間產生免疫應答，緊急發病無法馬上產生保護；抗生素對病毒性疾病效果不佳；中藥及其制劑藥效慢、作用弱、用量大、質量難以穩定以致使用不方便等。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種使用方便快捷，能安全有效的防治豬病毒性腹瀉的抗原抗體復合物及其制備方法。這種抗原抗體復合物，既可以快速地使機體產生被動免疫，也可持續的使機體產生自主免疫有效保護機體。它與母源抗體共同作用，通過改變抗原的提呈路徑，在短時間內刺激機體產生長期有效的保護力，同時與病毒抗原制成的復合物疫苗相比，能有效降低機體的免疫應激反應，加快保護產生速度，迅速提高機體抗體滴度，在生產和使用過程中會不存在散毒風險。為達到上述目的，本專利技術的技術方案是這樣實現的：一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，該抗原抗體復合物包括抗原和抗體，所述抗原為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒混合得到的三聯病毒液，所述抗體是由所述抗原制備的三聯卵黃抗體。進一步的，所述豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物中抗原和抗體的體積比為1:1。進一步的，在所述抗原抗體復合物中，每種病毒的毒價均為1×106.0TCID50以上，每種卵黃抗體的中和效價均達到1:7TCID50以上。進一步的，所述三聯病毒液中豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒的體積比為1:1:1。進一步的，所述豬傳染性胃腸炎病毒為豬傳染性胃腸炎病毒華毒株，所述豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉病毒CV777株，所述豬輪狀病毒為豬輪狀病毒NX株。進一步的，所述抗原抗體復合物按照常規方法制成抗原抗體復合物制劑，所述抗原抗體復合物制劑為普通液體制劑、油乳劑或固體制劑。普通液體制劑的制備方法：取處方量的三聯病毒液及三聯卵黃抗體加入PBS液中，經除菌處理制備而成。油乳劑的制備方法：取處方量的三聯病毒液及三聯卵黃抗體加入油佐劑混合乳化，按常規油乳劑疫苗的制備方法制成。固體制劑的制備方法：取處方量的三聯病毒液及三聯卵黃抗體加入凍干保護劑中，凍干制成。進一步的，所述豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物還包括角鯊烯，所述角鯊烯與抗原以及抗體的體積比為1:2:2。本專利技術還提供了上述豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物的制備方法，該方法包括如下步驟：a、抗原的制備將豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒分別利用細胞擴增培養，然后將培養得到的3種病毒分別進行濃縮，濃縮后混合，其中每種病毒的毒價均為1×107.0TCID50以上，甲醛滅活，最終得到含有3種滅活病毒的三聯病毒液，即為所需抗原；b、抗體的制備用步驟a中制得的三聯病毒液免疫產蛋雞，將獲得的高免雞蛋經過酸化、辛酸萃取、超濾濃縮經過濾除菌后得到三聯卵黃抗體，即為所需抗體；c、抗原抗體復合物的制備將步驟a所制得的三聯病毒液和步驟b所制得的三聯卵黃抗體混合，然后濃縮，得到抗原抗體復合物。進一步的，在所述步驟a中，豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒分別利用PK-15細胞、Vero細胞和MA104細胞擴增培養。進一步的，在所述步驟b中，產蛋雞每隔14天加強免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取樣檢測，每種卵黃抗體中和效價均達到1：10TCID50以上。進一步的，在所述步驟c中，所述抗原抗體復合物中還包括角鯊烯，所述角鯊烯與抗原以及抗體的體積比為1:2:2。本專利技術的有益效果：相對于現有技術，本專利技術所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物及其制備方法具有以下優勢：(1)本專利技術所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物及其制備方法，所獲得的抗原抗體復合物具有性能穩定、安全性好、動物免疫后產生免疫作用快、免疫力強、保護率高的特點，制備的復合物制劑具有制備簡單快捷、使用安全方便的特點。用禽蛋黃抗體防治豬的疫病可避免同源或近源帶毒和傳播疫病的潛在危險，避免了動物高免血清在治療過程中引起的副作用。(2)本專利技術所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物中添加角鯊烯，角鯊烯是一種脂質不皂化物，最初是從鯊魚的肝油中發現的，1914年被命名為Squalene,其化學名為(6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-廿四碳六烯，屬開鏈三萜，又稱魚肝油萜，具有提高體內超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強機體免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物質角鯊烯具有：a、保肝作用，促進肝細胞再生并保護肝細胞，從而改善肝臟功能；b、抗疲勞和增強機體的抗病能力，提高人體免疫功能；c、保護腎上腺皮質功能，提高機體的應激能力；d、抗腫瘤，尤其在癌切除外科手術后或采用放化療時使用，效果顯著，其最大的特點是防止癌癥向肺部轉移；e、升高白細胞的作用，在抗原抗體復合物中加入角鯊烯可以使其效果明顯增加，對免疫效果有明顯的改善作用。附圖說明構成本專利技術的一部分的附圖用來提供對本專利技術的進一步理解，本專利技術的示意性實施例及其說明用于解釋本專利技術，并不構成對本專利技術的不當限定。在附圖中：圖1為試驗1免疫試驗的血清抗體平均效價繪制圖，其中空白組為每頭仔豬注射2ml生理鹽水，疫苗組為每頭仔豬注射2ml常規三聯疫苗，抗原抗體復合物I組為每頭仔豬注射2ml實施例1制備的抗原抗體復合物I，抗原抗體復合物II組為每頭仔豬注射2ml實施例2制備的抗原抗體復合物II；圖2為試驗2豬流行性腹瀉病毒攻毒保護試驗的仔豬發病率、死亡率和保護率的對比圖，其中空白組為每頭仔豬注射2ml生理鹽水，疫苗組為每頭仔豬注射2ml常規三聯疫苗，抗原抗體復合物I組為每頭仔豬注射2ml實施例1制備的抗原抗體復合物I，抗原抗體復合物II組為每頭仔豬注射2ml實施例2制備的抗原抗體復合物II；圖3為試驗3豬傳染性胃腸炎攻毒保護試驗數的仔豬發病率、死亡率和保護率的對比圖，其中空白組為每頭仔豬注射2ml生理鹽水，疫苗組為每頭仔豬注射2ml常規三聯疫苗，抗原抗體復合物I組為每頭仔豬注射2ml實施例1制備的抗原抗體復合物I，抗原抗體復合物II組為每頭仔豬注射2ml實施例2制備的抗原抗體復合物II；圖4為試驗4豬輪狀病毒攻毒保護試驗的仔豬發病率、死亡率和保護率的對比圖，其中空白組為每頭仔豬注射2ml生理鹽水，疫苗組為每頭仔豬注射2本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：該抗原抗體復合物包括抗原和抗體，所述抗原為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒混合得到的三聯病毒液，所述抗體是由所述抗原制備的三聯卵黃抗體。

【技術特征摘要】
1.一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：該抗原抗體復合物包括抗原和抗體，所述抗原為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒混合得到的三聯病毒液，所述抗體是由所述抗原制備的三聯卵黃抗體。2.根據權利要求1所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：所述豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物中抗原和抗體的體積比為1:1。3.根據權利要求1所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：在所述抗原抗體復合物中，每種病毒的毒價均為1×106.0TCID50以上，每種卵黃抗體的中和效價均達到1:7TCID50以上。4.根據權利要求1所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：所述三聯病毒液中豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒的體積比為1:1:1。5.根據權利要求1所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：所述豬傳染性胃腸炎病毒為豬傳染性胃腸炎病毒華毒株，所述豬流行性腹瀉病毒為豬流行性腹瀉病毒CV777株，所述豬輪狀病毒為豬輪狀病毒NX株。6.根據權利要求1至5中任一項所述的一種豬病毒性腹瀉三聯抗原抗體復合物，其特征在于：所述抗原抗體復合物按照常規方法制成抗原抗體復合物制劑，所述抗原抗體復合物制劑為普通液體制劑、油乳劑或固體制劑。7.根據權利要求1所述的一種豬病毒性腹瀉...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王宇鵬，楊雪，王建，程雪嬌，李麗琴，王勇，朱士江，姜淋潔，崔志剛，王猛，焦曉軍，季昆，張立會，余貴菊，于小婷，甄盼盼，杜寧寧，范慶增，李玲，
申請(專利權)人：天津市中升挑戰生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：天津;12