Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法技術

本發明專利技術公開了一種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法，Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒包括：Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學發光免疫分析儀為檢測工具，完成Q熱立克次體的檢測這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，經過實驗，其檢測靈敏度達到1U/L，相對于傳統的Q熱立克次體的檢測方法靈敏度至少提高了10倍，這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒的檢測精度較高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及體外檢測領域，尤其涉及一種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
立克次體，是一種原核微生物，細胞多為球桿形，大小介于細菌和病毒之間，在真核細胞內營專性寄生（除個別外）。在自然界中主要在嚙齒類動物（鼠類）和家畜（牛、羊、犬）等貯存宿主內繁殖。虱、蚤、蜱、螨等吸血節肢動物為主要傳播媒介。Q熱立克次體為一專性細胞內寄生菌，引起人類急、慢性Q熱感染。目前Q熱立克次體的檢測主要有以下幾種方法：一、酶聯免疫吸附法酶聯免疫吸附法(ELISA)被廣泛應用，但該方法也存在著下述的不足之處：(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；(2)定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；(3)缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；(4)檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；(5)檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；(6)在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數×48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。二、常規實驗室檢測—病毒分離法實驗室診斷Q熱立克次體的金標準是病毒分離的方法。采用標本的時間以發病前5天為宜，取病人鼻咽棉拭子或咯痰進行病毒分離培養。該病毒不能在雞胚內增殖，只能在人和猴細胞如Hep-2，Hela等細胞株中培養增殖，約培養2—3周才出現細胞界線不清、融合成多核巨細胞等的細胞病變，病毒通過出芽釋放。但是病毒分離的方法具有嚴重的缺陷。因為它們既費時又費力，通常需要較長時間才能得到最終結果，這樣在臨床方面對病人的有效治療有一定的局限性。三、基因診斷對許多RNA病毒來說RT-PCR診斷方法比傳統的病毒分離和抗原診斷方法既快又靈敏。而且RT-PCR可以很容易的同時診斷多種病毒，另一些診斷方法如病毒分離和免疫熒光分析卻不能。但該方法也有不足之處，如PCR技術，DNA擴增的高校性導致了極微量的污染既可出現假陽性，因而使結果失真。此外病毒作為外原基因的入侵者，必須在闡明其全部或部分核苷酸序列時，才可以設計引物或探針，進行核酸分子雜交和PCR檢測。從現有的Q熱立克次體的檢測方法可見，EIA、病毒分離、RT-PCR診斷方法盡管都有一定的特異性和敏感性的優點，但在操作上需要專業技術人員、專門的儀器設備和特定的條件及費時等缺點。吖啶酯作為標記物的直接化學發光相比以上方法具有明細優勢，主要表現在：反應不需要催化劑，只要堿性環境即可進行，反應迅速，背景發光低，信噪比高，干擾因素少，試劑穩定性好，可以兩點定標，體系簡單，激發液成本低，吖啶酯易與蛋白質聯結，且聯結后光子產率不減少，已經成為Q熱立克次體診斷新的發展方向。
技術實現思路
基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法。一種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，包括：Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。在一個實施例中，所述Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述Q熱立克次體重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25~35。在一個實施例中，所述抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物中，所述抗人免疫球蛋白與所述化學發光標記物的比例為50：1~10。在一個實施例中，所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm~1μm。在一個實施例中，所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。在一個實施例中，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。在一個實施例中，所述A液為H2O2溶液，所述B液為NaOH溶液。在一個實施例中，還包括Q熱立克次體定標品。在一個實施例中，所述Q熱立克次體定標品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的Q熱立克次體的溶液。一種上述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液，活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入Q熱立克次體重組蛋白，室溫下混懸2h~10h，磁分離去除上清后用Tris緩沖液重懸，得到Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒；以及取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學發光標記物后混勻，室溫下避光反應1h~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學發光免疫分析儀為檢測工具，完成Q熱立克次體的檢測這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，經過實驗，其檢測靈敏度達到1U/L，相對于傳統的Q熱立克次體的檢測方法靈敏度至少提高了10倍，這種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒的檢測精度較高。附圖說明圖1為一實施方式的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒的制備方法的流程圖；圖2為實施例3得到的Q熱立克次體標準曲線圖。具體實施方式為使本專利技術的上述目的、特征和優點能夠更加明顯易懂，下面結合附圖和具體實施例對本專利技術的具體實施方式做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節以便于充分理解本專利技術。但是本專利技術能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本專利技術內涵的情況下做類似改進，因此本專利技術不受下面公開的具體實施的限制。一實施方式的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，包括：Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。優選的，Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，Q熱立克次體重組蛋白與羧基化的磁微粒的比例為1：25~35。優選的，抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物中，抗人免疫球蛋白與化學發光標記物的比例為50：1~10。優選的，羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm~1μm。化學發光標記物可以為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。其中，化學發光標記物優選為吖啶酯。在其他的實施例中，上述Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒還包括化學發光底物液。化學發光底物液包括A液和B液。A液可以為H2O2溶液，B液可以為NaOH溶液。本實施例中，A液為濃度為0.1mol/L的H2O2溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶液。在其他的實施例中，上述Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒還包括Q熱立克次體定標品。Q熱立克次體定標品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的Q熱立克次體的溶液。具體的，Q熱立克次體定標品可以采本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。

【技術特征摘要】
1.一種Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物。2.根據權利要求1所述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述Q熱立克次體重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述Q熱立克次體重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1：25~35。3.根據權利要求1所述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述抗人免疫球蛋白標記的化學發光標記物中，所述Q熱立克次體重組蛋白與所述化學發光標記物的比例為50：1~10。4.根據權利要求1所述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述羧基化的磁微粒的粒徑為0.05μm~1μm。5.根據權利要求1所述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物為魯米諾、異魯米諾、三聯吡啶釕或吖啶酯。6.根據權利要求1所述的Q熱立克次體化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于，還包括化學發光底物液，所述化學發光底物液包括A液和B液。7.根據權利要求6所述的Q熱立...

【專利技術屬性】
技術研發人員：錢純亙，田永帥，夏福臻，王剛，祝亮，
申請(專利權)人：深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44