一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法技術

本發明專利技術公開了一種通過在現有技術上改進的制備血小板環境掃描電鏡觀察樣本的方法，涉及生物醫學技術領域，具體地說是一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法。其特征是：該方法的制作步驟，離心、分離富含血小板的血漿0.5ml，預固定；再離心15min后棄上清液，再固定2h～4h；鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水；對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理，真空鍍膜。環境掃描電子顯微鏡在真空條件下，掃描觀察切留錐形管底部的血小板，拍攝照片。本發明專利技術提供一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法，環境掃描電子顯微鏡下觀察血小板的完整性好，防止標本因素而損傷電子顯微鏡，提高了觀察質量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種生物醫學
，具體地說是一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法。
技術介紹
血小板(bloodplatelet)是人血液中三種有形成分(紅細胞、白細胞、血小板)之一，血小板是骨髓中巨核細胞質脫落下來的小塊，表面有完整的細胞膜，無細胞核，血小板體積小，直經為2微米～4微米。血小板在止血、傷口愈合、炎癥反應、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理過程中有重要作用。環境掃描電子顯微鏡，是一種掃描式電子光學儀器，可以對微小樣品進行形態觀察。普通掃描電鏡的樣品室和鏡筒內均為高真空(約為10-6個大氣壓)，只能檢驗導電導熱或經導電處理的干燥固體樣品。現有技術的血小板環境掃描電鏡觀察樣本的制備方法，硅化處理試管、吸管，采靜脈血2ml注入抗凝試管，在4℃低溫下，標本經1000r/min離心10min，分離富含血小板的血漿0.5ml，移至錐形離心管中，0.2％戊二醛0.5ml預固定；預固定后血漿在低溫下，標本經4000r/min離心15min，棄去上清液，加3％戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2h～4h。1.5％戊二醛緩沖液吹散血小板，鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水，醋酸戊酯5min，將細胞充分散開，細胞懸浮液制片，二氧化碳置換，干燥，真空鍍膜；用環境掃描電鏡真空下，對血小板進行掃描觀察，拍攝照片；環境掃描電鏡觀察，發現血小板易于破損，難以完成觀察超微結構，而且該種樣本在環境掃描電鏡真空條件下觀察時，常常因為血小板的細胞碎粒飛起，損傷電子顯微鏡。血小板可能參與多種疾病的發病機制，由于血小板的分離和制作工藝上存在困難，現有制備技術未能很好解決環境掃描電子顯微鏡觀察血小板未活化與活化時的表面超微結構的變化，本專利技術解決了上述血小板破損與易于損傷電鏡這兩個難題。本專利技術所要解決的技術問題是克服現有血小板環境掃描電鏡觀察樣本制備工藝上的缺點，提供一種從血液樣本中有效分離血小板，制作血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良技術方法，電子顯微鏡下觀察血小板的細胞完整性好，不會因為標本的因素而損傷電子顯微鏡，保證血小板超微結構環境掃描電鏡觀察方法的有效性。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種從血液樣本中有效分離血小板，制作血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良方法，保證血小板超微結構環境掃描電鏡觀察方法的有效性。本專利技術采用的技術方案是，一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法，其特征在于，所述制作步驟：硅化處理試管、吸管；采靜脈血2ml注入抗凝試管；在4℃低溫下，標本經1000r/min離心10min，分離富含血小板的血漿0.5ml，移至錐形離心管中，0.2％戊二醛0.5ml預固定；預固定后的血漿在低溫下，標本經4000r/min離心15min，棄去上清液，加3％戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2h～4h；棄去3％戊二醛固定液，鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水；對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本，切留錐形管底部置鏡物臺固定，真空鍍膜；用環境掃描電子顯微鏡在真空條件下，對切留錐形管底部的血小板進行掃描觀察，拍攝照片。進一步地說，所述制作步驟：(1)硅化處理試管、吸管，采靜脈血2ml注入抗凝試管；(2)在4℃低溫下，標本經1000r/min離心10min，分離富含血小板的血漿0.5ml，移至錐形離心管中，0.2％戊二醛0.5ml預固定；(3)預固定后的血漿在低溫下，標本經4000r/min離心15min，棄去上清液，加3％戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2h～4h；(4)棄去3％戊二醛固定液，鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水；(5)對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本；(6)切留錐形管底部置鏡物臺固定，真空鍍膜；(7)用環境掃描電子顯微鏡在真空條件下，對切留錐形管底部的血小板進行掃描觀察，拍攝照片。附圖說明圖1為本實施例未活化的血小板放大20000倍的環境掃描電鏡照片，可見血小板表面正常超微結構，血小板表面圓滑。圖2為本實施例活化的血小板放大20000倍的環境掃描電鏡照片，可見血小板表面超微結構變化，血小板體積增大、表面突起和皺折增多，多個偽足突出。附圖標記說明：1-未活化血小板的胞體，2-放大倍數比例尺(1μm)，3-活化血小板的胞體，4-活化的血小板表面突起的多個偽足。具體實施方式本專利技術結合以下實施例作進一步描述：實施例1，一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法，其特征在于，所述制作步驟：硅化處理試管、吸管；采靜脈血2ml注入抗凝試管；在4℃低溫下，標本經1000r/min離心10min，分離富含血小板的血漿0.5ml，移至錐形離心管中，0.2％戊二醛0.5ml預固定；預固定后的血漿在低溫下，標本經4000r/min離心15min，棄去上清液，加3％戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2h～4h；棄去3％戊二醛固定液，鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水；對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本，切留錐形管底部置鏡物臺固定，真空鍍膜；用環境掃描電子顯微鏡在真空條件下，對切留錐形管底部的血小板進行掃描觀察，拍攝照片。進一步地說，所述制作步驟：(1)硅化處理試管、吸管，采靜脈血2ml注入抗凝試管；(2)在4℃低溫下，標本經1000r/min離心10min，分離富含血小板的血漿0.5ml，移至錐形離心管中，0.2％戊二醛0.5ml預固定；(3)血漿在低溫下，標本經4000r/min離心15min，棄去上清液，加3％戊二醛固定液1ml，使沉淀的血小板固定2h～4h；(4)棄去3％戊二醛固定液，鋨酸緩沖液固定，乙醇系列脫水；(5)對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本；(6)切留錐形管的底部置鏡物臺固定，真空鍍膜；(7)用環境掃描電子顯微鏡在真空條件下，對切留錐形管底部的血小板進行掃描觀察，拍攝照片。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法，其特征在于，所述制作步驟，經過預固定、緩沖液固定、脫水的血小板樣本，對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本，鏡物臺固定，真空鍍膜。

【技術特征摘要】
1.一種血小板環境掃描電鏡觀察樣本的改良制備方法，其特征在于，所述制作步驟，經過預固定、緩沖液固定、脫水的血小板樣本，對半切開錐形離心管，再橫切，留錐形管底部，二氧化碳置換，干燥處理錐形管底部的血小板樣本...

【專利技術屬性】
技術研發人員：諸葛毅，俎德玲，
申請(專利權)人：衢州職業技術學院，
類型：發明
國別省市：浙江;33