雜交瘤細胞株SCCA1及其分泌的單克隆抗體和應用制造技術

本發(fā)明專利技術公開了一種雜交瘤細胞株SCCA1及其分泌的單克隆抗體和應用，所述雜交瘤細胞株SCCA1的保藏編號為CCTCC?No：C2016131，所述單克隆抗體是由雜交瘤細胞株SCCA1分泌產(chǎn)生，所述單克隆抗體可以用于制備檢測宮頸癌的試劑中。本發(fā)明專利技術的單克隆抗體具有良好的特異性，以此為基礎建立的檢測宮頸癌的體外診斷試劑盒，檢測速度快，血液標本用量少，檢測結(jié)果的靈敏度高，為臨床與實踐的不同需要提供了建立快速，特異，敏感的檢測方法，極大改善宮頸癌的監(jiān)測與管理。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術屬于臨床診斷
，具體地說，本專利技術涉及一種雜交瘤細胞株SCCA1及其制備方法，雜交瘤細胞株SCCA1分泌的單克隆抗體、和單克隆抗體在檢測宮頸癌的試劑盒中的應用。
技術介紹
宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌和結(jié)直腸癌的第3個常見的惡性腫瘤，在發(fā)展中國家是僅次于乳腺癌居第2位的常見惡性腫瘤，是最常見的女性生殖道惡性腫瘤。宮頸癌是指發(fā)生在宮頸陰道部或者移行帶的鱗狀上皮細胞及宮頸管內(nèi)膜的柱狀上皮細胞交界處的惡性腫瘤。經(jīng)過幾十年廣泛開展婦科普查，宮頸癌的患病率及病死率降低了近68％，但宮頸癌的發(fā)病正呈現(xiàn)一種年輕化的趨勢。宮頸癌發(fā)病率高，預后較差。宮頸癌中最為常見的病理類型是鱗狀上皮細胞癌，約占宮頸癌總數(shù)的75％；其次為腺癌，約占宮頸癌患者的25％。鱗狀細胞癌抗原(SCC)是一種特異性很好而且是最早用于診斷鱗癌的腫瘤標志物。SCCA是一組屬于絲氨酸/半胱氨酸抑制物家族的糖蛋白，最初由Kato等人于鱗狀細胞癌組織中分離出來，作為鱗狀細胞癌的腫瘤標志物，對于宮頸癌，治療前血清中SCCA水平可以作為早期預后指標。SCCA在正常的鱗狀上皮細胞中抑制細胞調(diào)亡和參與鱗狀上皮層的分化，在腫瘤細胞中參與腫瘤的生長，它有助于所有鱗狀上皮細胞起源癌的診斷和監(jiān)測，例如：子宮頸癌、肺癌(非小細胞肺癌)、頭頸部癌、食管癌、鼻咽癌以及外陰部鱗狀細胞癌等，這些腫瘤患者血清中SCC升高，其濃度隨病期的加重而增加，臨床上用于監(jiān)測這些腫瘤的療效、復發(fā)、和轉(zhuǎn)移以及評價預后。SCCA對宮頸癌有較高的診斷價值：對原發(fā)性宮頸鱗癌敏感性為44％-69％；復發(fā)癌敏感性為67％-100％，特異性90％-96％；其血清學水平與腫瘤發(fā)展、侵犯程度及有否轉(zhuǎn)移相關，在宮頸癌根治術后SCCA濃度顯著下降；可及早提示復發(fā)，50％患者的SCCA濃度升高先于臨床診斷復發(fā)2-5個月，它可以作為獨立風險因子加以應用。此外，對宮頸癌患者進行SCCA定量檢測，還可幫助監(jiān)測疾病狀態(tài)、反映治療療效并早期發(fā)現(xiàn)癌癥復發(fā)，有重要的參考價值。多數(shù)宮頸癌SCCA和CA125會同時升高，但有些宮頸癌只出現(xiàn)單一腫瘤標志物的升高。因此，兩者聯(lián)合使用，可避免單一應用的陰性結(jié)果造成疾病復發(fā)監(jiān)測的漏診。SCCA輔助診斷肺鱗癌：肺鱗癌陽性率為46.5％，其水平與腫瘤的進展程度相關，它配合CA125、CYFRA21-1和CEA聯(lián)合檢測可提高肺癌患者診斷的靈敏性。SCCA對于食管鱗癌、鼻咽癌的預測：陽性率隨病情發(fā)展而上升，對于晚期患者,其靈敏性可達73％，聯(lián)合檢測CYFRA21-1和SCCA可以提高檢測的靈敏性，III期頭頸部癌陽性率為40％，IV期時陽性率增至60％，研究表明腺癌患者血清SCCA陽性檢出率顯著低于鱗癌患者。目前，宮頸癌的診斷主要依據(jù)兩種檢測手段。一種是經(jīng)陰道取組織檢查。包括：1、宮頸刮片細胞學檢查，是宮頸癌篩查的主要方法，應在宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)取材；2、宮頸碘試驗，正常宮頸陰道部鱗狀上皮含豐富糖原，碘溶液涂染后呈棕色或深褐色，不染色區(qū)說明該處上皮缺乏糖原，可能有病變。在碘不染色區(qū)取材活檢可提高診斷率；3、陰道鏡檢查，宮頸刮片細胞學檢查巴氏Ⅲ級及Ⅲ級以上、TBS分類為鱗狀上皮內(nèi)瘤變，均應在陰道鏡觀察下選擇可疑癌變區(qū)行宮頸活組織檢查；4、宮頸和宮頸管活組織檢查，為確診宮頸癌及宮頸癌前病變的可靠依據(jù)，所取組織應包括間質(zhì)及鄰近正常組織，宮頸刮片陽性，但宮頸光滑或?qū)m頸活檢陰性，應用小刮匙搔刮宮頸管，刮出物送病理檢查；5、宮頸錐切術，適用于宮頸刮片檢查多次陽性而宮頸活檢陰性者；或?qū)m頸活檢為宮頸上皮內(nèi)瘤變需排除浸潤癌者，可采用冷刀切除、環(huán)形電切除或冷凝電刀切除，此類方法還需要經(jīng)驗豐富的臨床技師對檢測結(jié)果進行解讀，且患者抗拒此類侵入性的檢查。另一種常規(guī)檢測方法是檢測生物標志物SCCA。但是，SCCA具有特異性低和靈敏度低的特點，而且全身鱗狀上皮細胞若有病變均可使血清SCCA檢測為陽性。因此，亟需一種特異性高和靈敏度高的標志物，來輔助增加檢測宮頸癌的準確性。
技術實現(xiàn)思路
基于此，為了克服上述現(xiàn)有技術的缺陷，本專利技術提供了一種雜交瘤細胞株SCCA1及其制備方法、該雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體、和檢測宮頸癌的試劑盒及其制備方法。為了實現(xiàn)以上專利技術目的，本專利技術采取了以下技術方案：一種雜交瘤細胞株SCCA1，所述細胞株的保藏編號為CCTCCNo：C2016131。本專利技術還提供了上述雜交瘤細胞株SCCA1的制備方法，其是以序列號為SEQIDNO:3所示氨基酸序列的SCCA1重組蛋白作為抗原免疫小鼠獲得的。本專利技術還提供了一種單克隆抗體，所述單克隆抗體由上述雜交瘤細胞株SCCA1分泌產(chǎn)生。本專利技術還提供了上述單克隆抗體在制備檢測宮頸癌的試劑盒中的應用。本專利技術還提供了一種檢測宮頸癌的試劑盒，所述試劑盒包括有上述單克隆抗體。本專利技術還提供了一種檢測宮頸癌的酶聯(lián)免疫試劑盒，所述試劑盒包括有包被上述單克隆抗體的微孔板。本專利技術的針對癌癥診斷的單克隆抗體，是由雜交瘤細胞株SCCA1所分泌產(chǎn)生的，該雜交瘤細胞株SCCA1已于2016年6月23日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(中國武漢大學內(nèi))，保藏號為CCTCCNo:C2016131。與現(xiàn)有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：1、本專利技術的雜交瘤細胞株SCCA1分泌的單克隆抗體具有良好的特異性，以此為基礎建立的檢測宮頸癌的體外診斷試劑盒，為臨床與實踐的不同需要提供了建立快速，特異，敏感的檢測方法；2、本專利技術所述的定量檢測宮頸癌的試劑盒不僅檢測速度快，血液標本用量少，采用蛋白芯片法檢測SCCA抗體與其他相似抗體的交叉反應，檢測結(jié)果的靈敏度高，為臨床醫(yī)師提供更準確的檢測結(jié)果，極大改善宮頸癌的監(jiān)測與管理。附圖說明圖1為本專利技術實施例1中小鼠常規(guī)免疫四次后的效價圖。具體實施方式以下通過具體的實施例進一步說明本專利技術的技術方案，具體實施例不代表對本專利技術保護范圍的限制。其他人根據(jù)本專利技術理念所做出的一些非本質(zhì)的修改和調(diào)整仍屬于本專利技術的保護范圍。實施例1雜交瘤細胞株SCCA1的制備包括以下步驟：1、抗原(SCCA1重組蛋白)的制備包括以下步驟：1)、pET28a-SCCA1重組載體的構(gòu)建根據(jù)Genbank中提供的人SCCA1(全長1173bp)的DNA序列(NC_000018.10)，人工合成該序列，去掉N末端信號肽，設計三對引物，由兩個引物的5‘端分別引入NdeI和XhoI酶切位點，用常規(guī)PCR方法(載體pET-28a為模板)擴增得到SCCA1基因的四個片段，分別表達SCCA1蛋白的四段序列：第一段：第93位到第159位氨基酸(SEQIDNo:1)；第二段：第44位到102位氨基酸(SEQIDNo:2)；第三段：第52位到112位氨基酸(SEQIDNo:3)；第四段：全長，第1位到390位氨基酸(SEQIDNo:4)。將載體pET-28a(市售)及經(jīng)過瓊脂糖凝膠純化的SCCA1基因片段，用NdeI和XhoI進行雙酶切處理，用T4DNA連接酶將純化后的酶切產(chǎn)物連接，得到重組質(zhì)粒pET-28a-SCCA1-1，pET-28a-SCCA1-2,pET-28a-SCCA1-3，pET-28a-SCCA1-4，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化進入大腸桿菌DH5α，在含有氨芐青霉素的LB平板上挑選克隆，小量制備質(zhì)粒，通過雙酶切/PCR鑒定本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種雜交瘤細胞株SCCA1，其特征在于，所述細胞株的保藏編號為CCTCC?No：C2016131。

【技術特征摘要】
1.一種雜交瘤細胞株SCCA1，其特征在于，所述細胞株的保藏編號為CCTCCNo：C2016131。2.權利要求1所述的雜交瘤細胞株SCCA1的制備方法，其特征在于，所述雜交瘤細胞株SCCA1是以SEQIDNO:3所示氨基酸序列的SCCA1重組蛋白作為抗原免疫小鼠而獲得的。3.一種單克隆抗體，其特征在于...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：黃若磐，羅樹紅，方建民，張玉明，胡洋，
申請(專利權)人：廣州瑞博奧生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44