一種提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量的復(fù)合菌劑及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種提高胡蘿卜中β?胡蘿卜素含量的復(fù)合菌劑及其應(yīng)用，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)P?8和干酪乳桿菌(Lactobacillus?casei)Zhang組成。這兩種菌對胡蘿卜的生長代謝有明顯的影響，尤其可以協(xié)同提高胡蘿卜中β?胡蘿卜素的含量，從而為天然胡蘿卜素的制備提供了較為理想的原料，最終降低了β?胡蘿卜素的生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)量和效益。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種微生物菌劑，尤其涉及一種能顯著提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量的菌劑，屬于微生物

技術(shù)介紹
隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步以及生活節(jié)奏的不斷加快，現(xiàn)在人們在工作、生活各方面的壓力都比較大，在正常鍛煉和保健的同時(shí)，越來越多的消費(fèi)者也在日常的生活中適當(dāng)補(bǔ)充營養(yǎng)。β-胡蘿卜素是類胡蘿卜素(carotenoids)之一，也是橘黃色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最穩(wěn)定的天然色素。許多天然食物中例如：綠色蔬菜、甘薯、胡蘿卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有豐富的β-胡蘿卜素，但是存在最多的還是胡蘿卜中。β-胡蘿卜素是一種抗氧化劑，具有非常強(qiáng)的抗氧化性，可以預(yù)防、延緩和治療某些疾病，尤其是癌癥，同時(shí)也能提高機(jī)體的免疫功能。同時(shí)，β-胡蘿卜素具有解毒作用，是維護(hù)人體健康不可缺少的營養(yǎng)素，在預(yù)防心血管疾病、白內(nèi)障及抗氧化上有顯著的功能，并進(jìn)而防止老化和衰老引起的多種退化性疾病，目前被廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品和保健品行業(yè)，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)認(rèn)定的A類優(yōu)秀有營養(yǎng)的食品添加劑，全世界已有52個(gè)國家、地區(qū)批準(zhǔn)使用，國際上需求量在1000噸以上，年增長率達(dá)10％～15％，具有廣闊的市場前景。目前，生產(chǎn)β-胡蘿卜素的方法主要有植物提取法，化學(xué)合成法，微生物發(fā)酵法。天然胡蘿卜素具有很好的抗染色體畸變，防癌作用以及較強(qiáng)的生理活性，而市場上的胡蘿卜素產(chǎn)品大多數(shù)為化學(xué)合成法制備的合成品，因此生理活性較低。植物提取法是指從胡蘿卜等富含β-胡蘿卜素的植物中提取β-胡蘿卜素，且胡蘿卜中提取β-胡蘿卜素已經(jīng)是主流趨勢。但受胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量的限制，當(dāng)前天然胡蘿卜素的價(jià)格是化學(xué)品的兩倍，成本相對較高。如果能夠提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素的含量，則可以降低成本，提高產(chǎn)量和效益。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
鑒于目前胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量普遍較低的問題，本專利技術(shù)的目的在于提供了一種提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量的復(fù)合菌劑及其應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的目的，專利技術(shù)人通過大量試驗(yàn)研究并不懈努力，最終獲得了如下技術(shù)方案：一種復(fù)合菌劑，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang組成。需要說明的是，本專利技術(shù)所采用的植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)P-8，分離自內(nèi)蒙古傳統(tǒng)自然發(fā)酵酸牛奶中，具有優(yōu)異的抗胃腸道消化液耐受能力，能夠存活于動(dòng)物腸道內(nèi)；該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏時(shí)間為2012年06月28日，保藏號(hào)為CGMCCNo.6312。另外，本專利技術(shù)所采用的干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang，是從酸馬奶中分離的耐酸和耐膽汁酸的益生菌菌株；該菌株于2006年4月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏號(hào)CGMCCNo.1697。優(yōu)選地，如上所述的復(fù)合菌劑，該菌劑由植物乳桿菌(LactobacillusplantarumP-8)和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang按1∶(0.5～3)的活菌數(shù)量比組成。本專利技術(shù)人在篩選抑制胡蘿卜病原菌的拮抗菌時(shí)意外發(fā)現(xiàn)，含有植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang的復(fù)合菌液對病原菌沒有明顯抑制作用，但對胡蘿卜的生長代謝有明顯的影響，尤其可以提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素的含量。基于此發(fā)現(xiàn)，本專利技術(shù)人通過接種于MRS培養(yǎng)液中培養(yǎng)發(fā)酵，將這兩種菌制備成了復(fù)合菌劑。因此，本專利技術(shù)提供了上述復(fù)合菌劑的應(yīng)用，即：上述的復(fù)合菌劑在提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量中的應(yīng)用。以及，上述的復(fù)合菌劑在制備胡蘿卜生長液中的應(yīng)用。本專利技術(shù)涉及的復(fù)合菌劑可以采用如下方法制備：(1)將所述干酪乳桿菌菌株(Lactobacilluscasei)Zhang和植物乳桿菌菌株(Lactobacillusplantarum)P-8接種于MRS培養(yǎng)液，在37℃條件下培養(yǎng)12-24小時(shí)，經(jīng)離心洗滌后，在菌體沉淀上加入8％-12％滅菌脫脂牛乳液，并調(diào)整其菌數(shù)為2.0×1010cfu/mL，混勻后傾注培養(yǎng)；(2)將步驟(1)得到的菌株培養(yǎng)物接種于MRS培養(yǎng)液，在37℃條件下培養(yǎng)12-24小時(shí)，再接種8％-12％的滅菌脫脂牛乳液，在37℃條件下培養(yǎng)6-10小時(shí)，調(diào)整其菌數(shù)為3×109cfu/mL，pH值為4.4～4.6。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)涉及的復(fù)合菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang組成，這兩種菌對胡蘿卜的生長代謝有明顯的影響，尤其可以協(xié)同提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素的含量，從而為天然胡蘿卜素的制備提供了較為理想的原料，最終降低了β-胡蘿卜素的生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)量和效益。附圖說明圖1為標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為β-胡蘿卜素含量(μg/ml)，縱坐標(biāo)為吸光值。具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例形式對本專利技術(shù)的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本專利技術(shù)上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本專利技術(shù)上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本專利技術(shù)的范圍。另外，下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例1：植物乳桿菌(LactobacillusplantarumP-8)和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang在提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量的試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：萊西店埠后屯(植物乳桿菌組、干酪乳桿菌組、復(fù)合菌組和空白對照組各1.7畝)種植管理：棚規(guī)格長115m，寬10m，每棚起壟13壟，每壟上種植蘿卜2行，株距5-6cm，每棚施基肥：硫酸鉀復(fù)合肥(N∶P∶K為15∶15∶15)300斤，有機(jī)肥600-700斤，后期不追肥。實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2016.04.26-2016.6.23實(shí)驗(yàn)作物：胡蘿卜(品種為：孟德爾808)使用量及方法：胡蘿卜播種結(jié)束之后，立即隨水滴灌微生物菌劑(實(shí)驗(yàn)組采用的菌劑中活菌總數(shù)含量大于109cfu/mL，復(fù)合菌組中兩種菌的數(shù)量比為1∶1)2升/棚，后期不在滴灌含菌水，而根據(jù)作物長勢灌溉不含菌水，保證各處理灌溉量相同。β-胡蘿卜素含量測定方法(高效液相法)：樣品前處理：取不同胡蘿卜不同部位的組織4.0g研磨成漿，轉(zhuǎn)移到100ml錐形瓶中，分別加入0.5g維生素C，30ml乙醇，10ml飽和氫氧化鉀溶液，于53℃水浴中震蕩皂化30min，然后用75ml石油醚反復(fù)萃取分離，提取液醚層反復(fù)用水洗至近中性(pH6.0以上)，蒸餾濃縮并用氮?dú)獯蹈桑缓笥?0％三氯甲烷(液相專用)50％石油醚混合液定容至25ml，吸取1ml過0.45μm濾膜后進(jìn)行HPLC測定。色譜條件：C18色譜柱，流動(dòng)相甲醇-乙腈-三氯甲烷，檢測波長448nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：稱取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品10mg(測定時(shí)稱取的量為10.8mg)然后用50％三氯甲烷和50％石油醚混合液定容100ml，相當(dāng)于108μg/ml，然后稀釋到72，54，36，21.6，13.5μg/ml，吸取1ml過0.45μm濾膜后進(jìn)行HPLC測定。制作的標(biāo)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種復(fù)合菌劑，其特征在于，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)P?8和干酪乳桿菌(Lactobacillus?casei)Zhang組成。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種復(fù)合菌劑，其特征在于，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang組成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌劑，其特征在于，該菌劑由植物乳桿菌(LactobacillusplantarumP-8)和干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)Zhang按1∶(0.5～3)的活菌數(shù)量比組成。3.權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌劑在提高胡蘿卜中β-胡蘿卜素含量中的應(yīng)用。4.權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌劑在制備胡蘿卜生長液中的應(yīng)用。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌劑的制備方法，...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鄒曉霞，趙金山，李海梅，張曉軍，王維華，
申請(專利權(quán))人：青島科拓恒通乳酸菌產(chǎn)業(yè)化開發(fā)研究院有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：山東;37