靈芝孢子油在制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用制造技術

本發明專利技術提供一種制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用。體內實驗結果表明：靈芝孢子油可以有效緩解化療藥物阿霉素對心臟的毒性作用，通過改善左心室舒張能力、心臟射血分數、緩解心肌組織的細胞凋亡和心肌腫大現象，從而降低化療藥物阿霉素的毒副作用，可聯合阿霉素用于制備復合抗腫瘤藥物。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥保健領域，具體涉及到靈芝孢子油在制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用。
技術介紹
阿霉素是上世紀60年代初由米蘭Farmitalia研究室首次從松鏈絲菌淺灰色變株提取的蒽環類抗生素，1974年在美國獲準臨床使用，是對血液系統腫瘤和實體腫瘤具有高效作用的化療藥物，具有抗腫瘤譜廣、療效高的特點，但因其對正常細胞(心臟、肝臟、腎臟等細胞)具有毒性作用，嚴重制約阿霉素的臨床應用，阿霉素對正常細胞的毒性主要來自于線粒體功能破化及產生有損傷作用的氧自由基，阿霉菌進入心肌后，被線粒體NADHPP450還原酶和線粒體NADH氧化還原酶催化為半鯤代謝物，直接損傷細胞核和細胞成分，引起細胞損傷，此外，半鯤代謝物可將電子傳遞給氧分子和水，使其變成超氧陰離子和超氧化自由基，引起細胞膜脂質和蛋白的氧化。同時抗氧化酶可以將過氧化氫轉變成對細胞無害的水和氧氣，而心肌細胞內抗氧化酶的含量相對降低，更容易受到自由基的損害。目前，尋找可有效緩解其心臟毒性的物質成為臨床上亟待解決的問題。靈芝Ganodermalucidum(Leyss.ex.Fr.)Karst是我國著名的高等藥用真菌，作為藥物已有2000多年的歷史了，靈芝的整個生活史包括：靈芝菌絲體、靈芝孢子和靈芝子實體，但三者在化學成分上有顯著性差異，于華崢等(2016)研究報道顯示：靈芝子實體、菌絲體和孢子粉不僅多糖含量差異較大，靈芝菌絲體多糖含量達3.81％，孢子粉多糖含量為1.8％，靈芝子實體中多糖含量僅為0.59％，且在多糖的組成也有很大差異，通過HPLC分析發現這3種材料所含多糖的種類也不一致，酶解其鏈接方式也不一致；陳軍輝等研究報道：靈芝子實體中含有豐富的靈芝酸、靈赤酸、赤芝酸甲酯、靈芝孢子內酯等三萜類成分，保留時間50min之前的峰多數為靈芝酸類化合物，與靈芝孢子粉相對，靈芝子實體中含有三萜酸類化合物的含量明顯比孢子粉中的高。靈芝孢子是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細小的孢子，為靈芝的生殖細胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質，經萃取后獲得靈芝孢子油是靈芝孢子的脂質活性成分，陳體強等研究定量分析結果表明：靈芝孢子油中檢出9種已知脂肪酸，不飽和脂肪酸總量為73.6％，其中油酸、亞油酸等含量分別為57.5％、13.4％，還有少量十六碳烯酸、亞麻酸及19.6％飽和脂肪酸棕櫚酸。綜上所述，靈芝孢子和子實體雖是靈芝生活史重要生長階段，但靈芝子實體和靈芝孢子在化學成分種類和含量上有顯著性差異，靈芝子實體的脂溶性活性成分集中在總三萜上，其多糖含量低，單糖主要為葡萄糖和半乳糖；而靈芝孢子的脂溶性活性成分集中在不飽和脂肪酸上，其多糖含量高，單糖主要為葡萄糖。截止目前，關于靈芝改善心血管疾病的報道均集中在靈芝子實體提取的三萜類物質和多糖類物質上，而關于靈芝孢子及靈芝孢子油在改善心血管功能的研究尚未見報道。
技術實現思路
針對上述情況，本專利技術的目的是提供一種靈芝孢子油在制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用。本專利技術以收縮期和舒張期左室收縮期內徑、舒張期內徑、心肌組織病理切片、心肌組織TUNEL凋亡檢測等作為觀測指標，對其心功能進行分析，結果顯示，從靈芝孢子中提取分離的活性成分靈芝孢子油與阿霉素聯合給藥可改善阿霉素對心臟的不良影響，尤其是左心室的舒張能力有明顯改變。說明靈芝孢子油可明顯緩解阿霉素對心臟的毒性作用，可用于制備消除化療物質阿霉素對心臟毒副作用的藥物或具有與阿霉素協同抗腫瘤作用的藥物。上述應用中，所述的靈芝孢子油可通過索氏萃取法、超臨界CO2萃取法、微波提取法和超聲提取法中的一種獲得。所述索氏提取法的萃取條件：以石油醚為溶劑，60-80℃回流提取6-8h，靈芝孢子粉的質量與石油醚的體積比為30-40g/L。所述超臨界CO2萃取法獲取靈芝孢子油的萃取條件是：萃取壓力10-40MPa；萃取溫度20-50℃；萃取時間0.5-6h；CO2流量60-150L/h；一級分離壓力為8-10MPa、分離溫度為25-45℃；二級分離壓力5-8MPa、分離溫度為30-50℃，萃取過程還可以加入夾帶劑，如無水乙醇、乙酸乙酯等，加入量為投入量的5-100％。所述微波提取法的萃取條件：按料液比4:1-15:1g/mL加入石油醚，微波功率400-1000W、提取時間2-20min、提取溫度30-60℃。所述超聲波提取法的萃取條件：按料液比4:1-15:1g/mL加入石油醚，超聲波功率400-800W、溫度30-60℃、提取時間2-30min。本專利技術的優點及應用效果：(1)本專利技術為消除化療物質對心臟的毒副作用提供了一種新的方向，且靈芝孢子油是一種純天然藥物，毒副作用小，既可以用作治療藥物，也可以用作預防藥物；(2)本專利技術首次驗證了靈芝孢子油在防治阿霉素心臟毒性中的應用效果，實現了降低阿霉素毒性的同時，還可以間接提高阿霉素抗腫瘤的療效。【附圖說明】圖1為本專利技術實施例試驗結束時各處理組中試驗小鼠的照片；圖2為本專利技術實施例試驗結束時各處理組中試驗小鼠的體重；圖3為本專利技術實施例中個處理組小鼠胸骨長軸的B-Mode圖像；圖4為本專利技術實施例中各處理組小鼠的心臟射血分數；圖5為本專利技術實施例中各處理組小鼠的左心室短軸縮短率；圖6為本專利技術實施例中各處理組小鼠的左心室收縮期內徑；圖7為本專利技術實施例中各處理組小鼠的左心室舒張期內徑；圖8為本專利技術實施例中各處理組小鼠的左心室收縮和舒張最大速率±dp/dtmat；圖9為本專利技術實施例中各處理組小鼠心肌組織病理檢測結果；圖10為本專利技術實施中各處理組小鼠心肌組織TUNEL凋亡檢測顯微鏡圖像；圖11為本專利技術實施中各處理組小鼠心肌組織TUNEL凋亡檢測結果。【具體實施方式】為了驗證本專利技術的應用效果，下面結合實施例對本專利技術作進一步詳細的描述，但本專利技術的實施方式不限于此。在未作說明的情況下，本專利技術采用的試劑、設備和方法均為本
常規市購的試劑、設備和常規使用的方法。靈芝孢子油的制備：本實施例中所用的靈芝孢子油是采用申請號為200610035574.8專利技術專利所述的方法獲得的，但是本專利技術中的靈芝孢子油并不局限于此。實驗設計與分組：所有小鼠隨機分為3組：正常對照組、阿霉素組和聯合給藥組，每組小鼠均為15只BALB/c鼠，各組小鼠的處理如下：正常對照組：小鼠心臟腹腔注射生理鹽水，每次腹腔注射25mg/kg，每隔1天注射1次，共計注射10次。阿霉素組：小鼠心臟腹腔注射阿霉素，每次腹腔注射25mg/kg，每隔1天注射1次，共計注射10次進行誘導建立DOX(阿霉素)小鼠模型；聯合給藥組：在阿霉素注射后，進行靈芝孢子油灌胃，劑量為60uL/次，每隔1天灌胃1次，共計灌胃10次。實驗周期為3周，停藥次日超聲心動檢測；計算小鼠存活率，并稱重；左心室部分多聚甲醛固定，用于HE病理檢測及TUNEL凋亡檢測。靈芝孢子油對小鼠死亡率和平均體重變化值的影響：在給藥3周后，正常組小鼠無死亡，其余組小鼠實驗期間均出現死亡。如表1所示，阿霉素組死亡率較高，為60％；聯合給藥組死亡率為26.7％。如圖2-3所示與正常對照組相比，阿霉素組小鼠體重明顯下降，而與阿霉素組相比，聯合給藥組小鼠體重明顯有提高，這說明阿霉素對小鼠體重具有較明顯的抑制作用。表1各處理組小鼠的死亡情況靈芝孢子油對小鼠血本文檔來自技高網...

【技術保護點】
靈芝孢子油在制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用。

【技術特征摘要】
1.靈芝孢子油在制備緩解阿霉素心臟毒性的藥物中的應用。2.靈芝孢子油在制備輔助抗腫瘤藥物中的應用。3.根據權利要求1-2中任一項所述的應用，其特征在于，所述靈芝孢子油通過索氏萃取法、超臨界CO2萃取法、微波提取法和超聲提取法中的一種獲得。4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述索氏提取法的萃取條件：以石油醚為溶劑，60-80℃回流提取6-8h，靈芝孢子粉的質量與石油醚的體積比為30-40g/L。所述超臨界CO2萃取法獲取靈芝孢子油的萃取條件是：萃取壓力10-40MPa；萃取溫度20-50℃；萃取時間0.5-6h；CO2流量60-150L/...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊柏華，謝意珍，焦春偉，
申請(專利權)人：廣州普立森生物科技有限公司，廣東粵微食用菌技術有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44