降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片制造技術

本實用新型專利技術公開了一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，包括微流控盤片，所述的微流控盤片上安裝有微流檢測單元，所述的微流檢測單元包括全血注入槽、全血分離信道、血球儲存槽、血漿傳送流道、混合/偵測槽、降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽、清洗液注入槽、內含磁鐵的外部磁鐵區域、廢液槽、堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體溶液注入槽、發光底物液注入槽。本實用新型專利技術能實現全血分離、血漿定量、培育混合、清洗的功能，能快速實現樣品中PCT濃度的定量檢測，具有檢測靈敏度高，結果準確可靠，重復性好的特點。

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，屬于醫學免疫體外診斷領域，能夠在很短時間內實現對生物樣品中降鈣素原的定量檢測，具有操作簡單，靈敏度高，低成本的特點。
技術介紹
降鈣素原(PCT)是一種含116個氨基酸的無激素活性糖蛋白，分子量約為13kDa，在生理情況下由甲狀腺-C細胞產生，在健康人群的血清中幾乎不能被檢出。在細菌、真菌、寄生蟲等感染性疾病并有全身或/和中樞神經系統性炎癥反應時，病菌的內毒素可促使甲狀腺-C細胞、肝臟巨噬細胞和單核細胞、肺和腸道組織的淋巴細胞以及神經內分泌細胞等甲狀腺以外的組織大量產生PCT，而導致其血清中的含量升高或持續性升高。新生兒的PCT水平于出生后1~2天內和少數大型外科手術患者術后1～4天內的PCT可有輕度短暫升高，但均呈逐日下降趨勢且于三天后即可達到成人正常值。為此PCT檢查可為上述病情提供確切的鑒別診斷。PCT水平反映了全身細菌性炎癥反應的活躍程度，并提示與被感染器官的大小和類型、細菌的種類、以及炎癥程度和免疫反應狀況相關。PCT水平的升高雖可出現在嚴重休克、全身性炎癥反應綜合征和多器官功能紊亂綜合征患者，如無細菌感染或細菌感染性病灶存在，其水平通常低于那些有細菌感染性病灶的患者。PCT檢測的臨床價值是多方面的。對細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒血癥性感染的病因診斷、抗生素的臨床應用、病情和預后的評估均具有明顯的應用價值，對自身免疫、過敏、病毒感染和無菌性炎癥等具有明確的鑒別診斷價值。目前，檢測降鈣素原的方法主要有放射免疫分析法、化學發光免疫分析法、膠體金比色法。放射免疫分析法檢測耗時長，而且有放射性元素的污染使用受到限制；膠體金比色法具有快速簡便、容易觀察等特點，是一種快速的半定量使用方法；化學發光免疫分析法操作簡便，特異性強，靈敏度高，檢測時間短，目前得到廣泛的應用。磁微粒免疫檢測技術是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學偶聯等方法包被上具有特異性親和力的的抗體或抗原等各種免疫活性物質，具有分離速度快、效率高、可重復性好、操作簡單、不影響被分離細胞或其他生物材料的生物學性狀和功能等特點，在外加磁場作用下可定向運動，使某些特殊成分得以分離、濃集或純化。微流控芯片作為一種新型的分析檢測平臺，具有高通量、集成化、便攜式、易操作、低成本等優點，已經在眾多領域中得到了廣泛的應用，尤其是在免疫分析領域已嶄露頭角。免疫磁珠的生物微流控芯片是將磁顆粒技術，免疫分析集成到微流控芯片上的一種分析使用方法，目前這種綜合性的使用方法的主要難點表現為：1)液體在芯片內部微流動的智能控制，目前常采用的方法是在芯片內部設置多個微泵和微閥，使得微流控體系變得更加復雜化；2)反應體系的混合不充分，導致反應不充分；3)集成化程度不高，導致非特異性背景高。
技術實現思路
本技術目的在于提供了一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片；本技術能實現全血分離(樣本前處理)、血漿定量、培育混合、清洗的功能，能快速實現樣品中PCT濃度的定量檢測，具有檢測靈敏度高，結果準確可靠，重復性好的特點。為了達到上述目的，本技術的技術方案是：一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，包括微流控盤片，所述的微流控盤片上安裝有微流檢測單元，所述的微流檢測單元包括全血注入槽，所述的全血注入槽通過全血分離信道與血球儲存槽相連，所述血球儲存槽與血漿傳送流道連通；所述的血漿傳送流道與混合/偵測槽頂部相連；所述的混合/偵測槽頂部通過管路與降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽連通；所述的混合/偵測槽頂部還通過管路與清洗液注入槽連通；所述的混合/偵測槽一側安裝有內含磁鐵的外部磁鐵區域；所述的混合/偵測槽底部通過管路與廢液槽連通，且所述的混合/偵測槽底部與廢液槽之間的管路上安裝有閥門；所述的降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽頂部通過管路與堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體溶液注入槽的底部連通；所述的清洗液注入槽頂部通過管路與發光底物液注入槽的底部連通。所述的微流控盤片上安裝6個以上且為6的倍數的微流檢測單元。所述的微流控盤片上優選安裝12個微流檢測單元。本技術的有益效果是：本技術能實現全血分離(樣本前處理)、血漿定量、培育混合、清洗的功能，能快速實現樣品中PCT濃度的定量檢測，具有檢測靈敏度高，結果準確可靠，重復性好的特點。附圖說明圖1是本技術一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片的結構示意圖；圖2是圖1中微流控盤片上單個微流檢測單元的放大示意圖。具體實施方式實施例1：降鈣素原的定量檢測本實施例的一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，如圖1、2所示，包括微流控盤片13，所述的微流控盤片13上安裝有12個微流檢測單元，所述的每個微流檢測單元包括全血注入槽1，所述的全血注入槽1通過全血分離信道2與血球儲存槽3相連，所述血球儲存槽3與血漿傳送流道4連通；所述的血漿傳送流道4與混合/偵測槽7頂部相連；所述的混合/偵測槽7頂部通過管路與降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽9連通；所述的混合/偵測槽7頂部還通過管路與清洗液注入槽10連通；所述的混合/偵測槽7一側安裝有內含磁鐵的外部磁鐵區域8；所述的混合/偵測槽7底部通過管路與廢液槽6連通，且所述的混合/偵測槽7底部與廢液槽6之間的管路上安裝有閥門5；所述的降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽9頂部通過管路與堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體溶液注入槽11的底部連通；所述的清洗液注入槽10頂部通過管路與發光底物液注入槽12的底部連通。1.降鈣素原溶液配制1）降鈣素原系列校準品的制備：用胎牛血清將降鈣素原純品（海肽生物科技（上海）有限公司）稀釋為系列校準品，其校準品濃度范圍為0～50ng/mL。2）降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液的制備：將降鈣素原單克隆抗體（海肽生物科技（上海）有限公司）置于透析袋中，在PBS緩沖液中過夜透析；用PBS緩沖液配制BNHS溶液，每mg抗體中加入15μLBNHS（生物素-N-羥基琥珀亞胺酯（上海勵瑞生物科技有限公司）溶液，混合均勻，室溫反應30min；將標記好的抗體置于透析袋中，在PBS緩沖液中過夜透析。將2.0μm的鏈霉親和素磁微粒（廣州達于成貿易有限公司）加磁場，靜置5min，倒出上清液，用PBS緩沖液清洗3次，并用該緩沖液進行懸浮；倒出上清液；每mL磁微粒懸浮液中加入1mg標記好的抗體，混合均勻，室溫反應20min；用含有5%的牛血清白蛋白的Tris-HCl緩沖液清洗3次；用含有0.5%牛血清白蛋白和0.02%Proclin300（防腐劑，上海勵瑞生物科技有限公司）的PBS緩沖液重懸，得到降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液。3）堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體溶液的制備：用PB緩沖液配制Sulfo-SMCC溶液，每mg堿性磷酸酶中加入0.1mLSulfo-SMCC（4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽，上海勵瑞生物科技有限公司）溶液，混合均勻，室溫反應30min，在PB緩沖液中透析；用PB緩沖液配制2-亞氨基硫羥烷鹽酸鹽溶液，每mg抗體中加入0.1mL2-亞氨基硫羥烷鹽酸鹽溶液，混合均勻，室溫反應30本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，其特征在于：包括微流控盤片（13），所述的微流控盤片（13）上安裝有微流檢測單元，所述的微流檢測單元包括全血注入槽(1)，所述的全血注入槽(1)通過全血分離信道(2)與血球儲存槽(3)相連，所述血球儲存槽(3)與血漿傳送流道(4)連通；所述的血漿傳送流道(4)與混合/偵測槽(7)頂部相連；所述的混合/偵測槽(7)頂部通過管路與降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽(9)連通；所述的混合/偵測槽(7)頂部還通過管路與清洗液注入槽(10)連通；所述的混合/偵測槽?(7)一側安裝有內含磁鐵的外部磁鐵區域(8)；所述的混合/偵測槽(7)底部通過管路與廢液槽(6)連通，且所述的混合/偵測槽(7)底部與廢液槽(6)之間的管路上安裝有閥門（5）；所述的降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽(9)頂部通過管路與堿性磷酸酶標記的降鈣素原單克隆抗體溶液注入槽(11)的底部連通；所述的清洗液注入槽?(10)頂部通過管路與發光底物液注入槽(12)的底部連通。

【技術特征摘要】
1.一種降鈣素原定量檢測的化學發光微流控盤片，其特征在于：包括微流控盤片（13），所述的微流控盤片（13）上安裝有微流檢測單元，所述的微流檢測單元包括全血注入槽(1)，所述的全血注入槽(1)通過全血分離信道(2)與血球儲存槽(3)相連，所述血球儲存槽(3)與血漿傳送流道(4)連通；所述的血漿傳送流道(4)與混合/偵測槽(7)頂部相連；所述的混合/偵測槽(7)頂部通過管路與降鈣素原單克隆抗體包被的磁微粒溶液注入槽(9)連通；所述的混合/偵測槽(7)頂部還通過管路與清洗液注入槽(10)連通；所述的混合/偵測槽(7)一側安裝有內含磁鐵的外部磁鐵區域(8)；所述的混合/偵測槽(...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林佳慧，左陽，楊意楓，倪燕婕，連海燕，余波，
申請(專利權)人：紹興普施康生物科技有限公司，
類型：新型
國別省市：浙江;33