本發明專利技術公開了一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑，所述化學發光板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光板，各孔包被有抗NGAL抗體，抗體包被濃度為?5.0?μg/mL，所述試劑包括：NGAL系列標準品溶液，NGAL系列質控品溶液，樣本稀釋液，酶標NGAL抗體，鏈酶親和素?HRP，化學發光底物A液，化學發光底物B液，濃縮洗滌液。本發明專利技術的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有高靈敏度、簡便快速、準確度高的特點，與傳統的ELISA法比較，操作時間大幅度減少。可用作檢測腎損傷的輔助診斷。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)的化學發光盒，用于檢測腎損傷病人血清中的NGAL蛋白的濃度。可用作檢測腦梗死等腦損傷疾的輔助診斷。屬于免疫學檢測領域。
技術介紹
中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin，NGAL)，是人脂質運載蛋白家族中的一個新成員。近年來，NGAL作為一種新的腎損傷標志物倍受關注。人類NGAL基因定位于第9號染色體長臂(9q34)，全長5869bp，包括1695bp的5'端非轉錄區、178bp的3'端非轉錄區及由7個外顯子和6個內含子構成的3696bp的原初轉錄區；其相對分子質量為25000bp。NGAL在腎臟病領域最早被作為急性腎損傷(AKI)新的早期診斷標志物提出。正常情況下NGAL在腎組織少量表達，缺血-再灌注腎損傷動物模型中血、尿NGAL分別上升300倍和1000倍。針對兒童心臟手術的研究顯示并發AKI者術后2h尿NGAL濃度明顯升高，遠早于1～3d后才出現改變的血清肌酐，而術后12h尿NGAL水平則與AKI的病死率明顯相關，成年患者心臟手術后2h尿NGAL同樣可作為AKI的早期診斷指標，并與其發病率及體外循環持續時間明顯相關，但該相關性較兒童低，考慮可能與受試人群基礎疾病狀態等因素相關。在腎移植手術中，尿及腎組織中的NGAL高表達均與術后腎功能延遲恢復(DGF)相關。
技術實現思路
為了解決現有技術中的問題，本專利技術提供了一種具有高靈敏度、簡便快速、準確度高的中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)的化學發光盒。為了解決上述問題，本專利技術所采取的技術方案是：一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑，所述化學發光板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光板，各孔包被有抗NGAL抗體，抗體包被濃度為5.0μg/mL，所述試劑包括：NGAL系列標準品溶液，NGAL系列質控品溶液，樣本稀釋液，酶標NGAL抗體，鏈酶親和素-HRP，化學發光底物A液，化學發光底物B液，濃縮洗滌液。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述盒體檢測樣本為人血清樣本。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述NGAL系列標準品溶液濃度分別為：0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述NGAL系列質控品溶液濃度分別為：400-600ng/mL、160-240ng/mL。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述樣本稀釋液為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4，磷酸鹽緩沖液是每升含有16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述酶標NGAL抗體是由NGAL抗體與生物素偶合制成的偶聯物作為檢測抗體前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述濃縮洗滌溶液是含有體積分數0.05％吐溫-20的pH＝7.4，0.1mol/L磷酸鹽緩沖液。前述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述化學發光液A液為魯米諾含量為0.01M、對甲苯酚含量為0.001MpH＝8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；所述化學發光液B液為每100mL溶液含檸檬酸2.1g，無水Na2HPO42.82g，0.75％的過氧化氫脲0.64mL的水溶液，所述百分比為質量百分比。本專利技術所達到的有益效果：本專利技術主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析法是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏性和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中NGAL含量越高，反應體系中發光強度越強；反之，樣品中NGAL含量越少，發光強度越弱。本專利技術的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有高靈敏度、簡便快速、準確度高的特點，與傳統的ELISA法比較，操作時間大幅度減少。可用作檢測腎損傷的輔助診斷。附圖說明圖1是本專利技術化學發光試劑盒標準曲線。具體實施方式下面結合附圖對本專利技術作進一步描述。以下實施例僅用于更加清楚地說明本專利技術的技術方案，而不能以此來限制本專利技術的保護范圍。本專利技術中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，第一方面提供了一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)的化學發光酶聯免疫(CLEIA)檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑：1.包被有抗NGAL抗體的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化學發光板，抗體包被濃度為5.0μg/mL。2.NGAL系列標準品溶液。濃度分別為：0、50、100、250、500、1000ng/mL。3.NGAL系列質控品溶液濃度分別為：500±100、200±40ng/mL。4.樣本稀釋液。為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4。5.酶標NGAL抗體。由NGAL抗體與生物素偶聯制備得到。6.鏈親和素-HRP。7.發光底物液。化學發光液分為A、B液。化學發光液A液為化學發光底物-魯米諾和發光增強劑-對甲苯酚溶液，化學發光液B液為過氧化氫脲溶液。8.濃縮洗滌液。濃縮洗滌溶液具體為含有吐溫-20(Tween-20)緩沖液的20倍濃縮磷酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于實驗過程中洗滌化學發光板本專利技術第二方面該試劑盒適用于腎損傷的輔助診斷。本專利技術第三方面該試劑盒檢測樣本為人血清樣本。本專利技術第四方面相關溶液的配制：本專利技術試劑盒中涉及的NGAL標準品溶液、樣本稀釋液、化學發光液及濃縮洗滌液及其配方對本專利技術試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：1.NGAL系列標準品溶液：以常規方法將NGAL純品用標準品稀釋液配制成濃度分別為0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL的NGAL標準溶液。2.NGAL系列質控品溶液：以常規方法將NGAL純品用標準品稀釋液配制成濃度分別為：500±100ng/mL、200±40ng/mL。3.酶標NGAL抗體溶液：用NGAL抗體與生物素偶聯制備，將所得NGAL抗原用酶標NGAL稀釋液稀釋成1:4000的工作濃度。4.標準品稀釋液：為含有BSA，蔗糖的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，50g蔗糖，16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。5.酶標抗原稀釋液：為含有BSA的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。6.樣本稀釋液：為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液，pH＝7.4，磷酸鹽緩沖液是每升含有16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑，所述化學發光板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光板，各孔包被有抗NGAL抗體，抗體包被濃度為5.0μg/mL，所述試劑包括：NGAL系列標準品溶液，NGAL系列質控品溶液，樣本稀釋液，酶標NGAL抗體，鏈酶親和素?HRP，化學發光底物A液，化學發光底物B液，濃縮洗滌液。
【技術特征摘要】
1.一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：包括盒體，設在盒體內的化學發光板和設在盒體內的試劑，所述化學發光板為乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學發光板，各孔包被有抗NGAL抗體，抗體包被濃度為5.0μg/mL，所述試劑包括：NGAL系列標準品溶液，NGAL系列質控品溶液，樣本稀釋液，酶標NGAL抗體，鏈酶親和素-HRP，化學發光底物A液，化學發光底物B液，濃縮洗滌液。2.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述盒體檢測樣本為人血清樣本。3.根據權利要求2所述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述NGAL系列標準品溶液濃度分別為：0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL。4.根據權利要求3所述的一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的化學發光盒，其特征在于：所述NGAL系列質控品溶液濃度分別為：400-600ng/mL、160-240ng/mL。5.根據權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陸上蘇，吳偉，徐恒，
申請(專利權)人：鎮江華測金太醫學檢驗所有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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