本發明專利技術提供了一種以葛根素為對照，定性和定量檢測葛根、葛根提取物以及含葛根制劑中3’-羥基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6種成分含量的UPLC方法，包括制備對照品和供試品溶液，以0.1％醋酸為流動相A，以乙腈為流動相B進行梯度洗脫，檢測波長為250nm；色譜柱為SB-C18，RRHD,1.8um，2.1*100mm；柱溫為31℃；流速為0.4mL/min；進樣量為1uL；將所得色譜圖與葛根藥材指紋圖譜比較，主峰即為葛根素，其余成分一一對應，可對藥材進行鑒別。同時結合相對校正因子(3’-羥基葛根素為1.253、葛根素為1.000、葛根素-6”-O-木糖苷為1.422、3’-甲氧基葛根素為1.297、芹糖基葛根素苷為1.332和大豆苷為1.030)和對照溶液中葛根素的峰面積即可計算葛根中6種成分的含量。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫藥領域，涉及中藥材提取物及提取技術，以及制劑的UPLC快速分析方法。
技術介紹
葛根是豆科植物野葛的干燥根，在全國多數省份都有分布，湖北是一個重要產區。將葛根深加工成提取物，可以產生較好的社會效應和經濟效益。同時，葛根提取物中的主要成分是異黃酮類，藥理作用比較廣泛，對心腦血管疾病方面的作用比較突出，國內國外市場前景廣闊。多種中成藥處方中都將葛根作為主藥，而且選擇其中的葛根素作為質量控制指標。中藥成分復雜，在治療疾病的過程中這些成分多數時候產生協同作用。因此，決定中藥材及其相應產品質量的應該是其中各種成分的一個組合。但是，過去由于條件的限制，控制中藥材的質量往往選取其中一種易于檢測的成分(指標性成分)，這樣就會導致一些問題，一方面，藥材的作用不一定由這一種成分產生，因此不能充分地反映藥材的質量；另一方面，不法生產者為了牟取暴利，采用偽品或劣品中添加檢驗標準需要檢測的成分，因此，選擇藥材材中的多種成分(指標性成分或活性成分)來建立相應的質量控制標準，這樣就可以很好的預防人為的摻雜和摻假，也能指導工業生產，保證產品的質量。UPLC具有靈敏度高，分離效能高和速度快，溶劑消耗少的優勢，可以在較短時間內同時完成分析，不僅能用于單一藥材中多種成分的測定，還可以實現復方中多種組分的測定。
技術實現思路
本專利技術的任務是提供一種檢測葛根或葛根提取物或含葛根制劑成分的UPLC方法。本專利技術提供檢測葛根或葛根提取物或含葛根制劑中成分的UPLC方法是：以葛根素為對照，定性和定量檢測葛根、葛根提取物以及含葛根制劑中3’-羥基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6種成分含量的UPLC方法，包括制備對照品和供試品溶液，以0.1％醋酸為流動相A，以乙腈為流動相B進行梯度洗脫，檢測波長為250nm；色譜柱為SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱溫為31oC；流速為0.4mL/min；進樣量為1uL；將所得色譜圖與葛根藥材指紋圖譜比較，主峰即為葛根素，其余成分一一對應，可對藥材進行鑒別，同時結合相對校正因子(3’-羥基葛根素為1.253、葛根素為1.000、葛根素-6”-O-木糖苷為1.422、3’-甲氧基葛根素為1.297、芹糖基葛根素苷為1.332和大豆苷為1.030)和對照溶液中葛根素的峰面積即可計算葛根中6種成分的含量。本專利技術提供的檢測葛根或葛根提取物或含葛根制劑成分的UPLC方法，包括以下步驟：步驟一、制備對照品溶液：稱取葛根素對照品適量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至約125ug/mL；步驟二、制備供試品溶液：稱取葛根粉末(過三號篩)0.15g，加入40％乙醇50ml，稱重，超聲提取30min，放冷至室溫，用40％乙醇補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾即得；步驟三、按以下方法進樣檢測：色譜儀：UPLC(Agilent1290，DAD檢測器)；色譜條件：梯度洗脫，流動相A：0.1％醋酸流動相B：乙腈時間(min)流動相A(％)流動相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090檢測波長：250nm；色譜柱：SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱溫：31℃；流速：0.4mL/min；進樣量：1uL；步驟四、將所得色譜圖與葛根藥材指紋圖譜比較，主峰即為葛根素，其余成分一一對應，可對藥材進行鑒別。在上述步驟四所述的將所得色譜圖與葛根藥材指紋圖譜比較中，結合相對校正因子和對照溶液中葛根素的峰面積即可計算葛根中6種成分的含量；葛根中6種成分的相對校正因子為：3’-羥基葛根素為1.253；葛根素為1.000；葛根素-6”-O-木糖苷為1.422；3’-甲氧基葛根素為1.297；芹糖基葛根素苷為1.332；大豆苷為1.030。本專利技術提供的方法可以準確快速的對葛根藥材、提取物以及含有葛根的中成藥制劑中的葛根來源成分進行質量控制，所需時間較短，14min以內即可完成分析。方法的靈敏度較高，具有較高的實際應用價值。實驗資料1.分析方法的建立色譜儀：UPLC(Agilent1290，DAD檢測器)色譜條件：梯度洗脫，流動相A：0.1％醋酸流動相B：乙腈時間(min)流動相A(％)流動相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090檢測波長：250nm；色譜柱：SB-C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱溫：31oC；流速：0.4mL/min；進樣量：1uL選取3’-羥基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷等幾種葛根中所含有的異黃酮作為標準品。各成分紫外吸收圖譜(DAD掃描)見圖1，混合對照品和樣品圖譜見圖2，2.分析方法驗證2.1樣品的前處理2.1.1提取溶劑的選擇：精密稱取0.15g葛根藥材粉末(過三號篩)，分別加入不同濃度乙醇溶液(30％，40％，50％，60％和70％)50ml，稱重，超聲提取30min，取出放冷至室溫，用對應濃度乙醇溶液補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾，取1ul進樣，以峰面積/稱樣量進行比較。表1溶劑濃度的選擇其中40％乙醇提取的比值均較大，故選擇40％乙醇作為提取溶劑。2.1.2超聲時間的確定：精密稱取0.15g葛根藥材粉末(過三號篩)，分別加入40％乙醇50ml，稱重，考察超聲不同時間(20min，30min，40min和50min)對提取的影響。見表2。表2超聲時間的確定超聲30min時，比值最大，確定超聲時間為30min。2.2溶液的制備：供試品溶液制備：稱取葛根粉末0.15g，加入40％乙醇50ml，稱重，超聲提取30min，放冷至室溫，用40％乙醇補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾即得。(葛根提取物和中成藥制劑的制備過程見后續實例)。對照品儲備溶液制備：分別稱取3′-羥基葛根素4.13mg，葛根素6.54mg，葛根素-6”-O-木糖苷4.78mg，3′-甲氧基葛根素4.34mg，芹糖基葛根素苷4.79mg，大豆苷6.10mg于25ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，即得對照品儲備溶液(各對照品含量分別為3′-羥基葛根素98.5％，葛根素95.5％，葛根素-6”-O-木糖苷98.0％，3′-甲氧基葛根素98.5％，芹糖基葛根素苷98.5％，大豆苷91.3％)。2.3溶液穩定性：取葛根粉末(批號：A40805)0.15g，加40％乙醇50ml，稱重，超聲提取30min，放冷至室溫，用40％乙醇補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾即得。取1ul進樣，即得0h峰面積，室溫放置，在2h，4h，8h，12h和24h分別取1uL進樣，結果見表3，分別比較了各時間點各成分相對于0h的變化率。表3溶液室溫穩定性考察有上表可知：3′-羥基葛根素不穩定，室溫(25oC)放置容易降解，應在12h內進樣，如需長時間保存，應保存在冰箱中(實驗證實，樣品保存于冰箱穩定性良好)。2.4專屬性試驗：取空白溶劑(40％乙醇溶液)，對照溶液和供試品溶液各1uL分別進樣，按前述分析方法進樣，記錄色譜圖。結果表明，樣品溶劑對測定成分未造成干本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種以葛根素為對照檢測葛根、葛根提取物或含葛根制劑中3’?羥基葛根素、葛根素、葛根素?6”?O?木糖苷、3’?甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6種成分的UPLC方法，包括以下步驟：步驟一、對照品溶液制備：稱取葛根素對照品適量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至約125ug/mL；步驟二、供試品溶液制備：稱取葛根粉末(過三號篩)0.15g，加入40％乙醇50ml，稱重，超聲提取30min，放冷至室溫，用40％乙醇補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾即得；步驟三、按以下方法進樣檢測：色譜儀：UPLC(Agilent?1290，DAD檢測器)；色譜條件：梯度洗脫，流動相A：0.1％醋酸??流動相B：乙腈時間(min)流動相A(％)流動相B(％)09280.588.511.53.588.511.577723105050121090141090檢測波長：250nm；色譜柱：SB?C18，RRHD，1.8um，2.1＊100mm；柱溫：31℃；流速：0.4mL/min；進樣量：1uL；步驟四、將所得色譜圖與葛根藥材指紋圖譜比較，主峰即為葛根素，其余成分一一對應，可對藥材進行鑒別。
【技術特征摘要】
1.一種以葛根素為對照檢測葛根、葛根提取物或含葛根制劑中3’-羥基葛根素、葛根素、葛根素-6”-O-木糖苷、3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素苷和大豆苷6種成分的UPLC方法，包括以下步驟：步驟一、對照品溶液制備：稱取葛根素對照品適量于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至約125ug/mL；步驟二、供試品溶液制備：稱取葛根粉末(過三號篩)0.15g，加入40％乙醇50ml，稱重，超聲提取30min，放冷至室溫，用40％乙醇補足至原重，搖勻，0.22um濾膜過濾即得；步驟三、按以下方法進樣檢測：色譜儀：UPLC(Agilent1290，DAD檢測器)；色譜條件：梯度洗脫，流動相A：0.1％醋酸流動相B：乙腈時間(min)流動相A(％)流動相B(％)09280.588.511.53....
【專利技術屬性】
技術研發人員：尹春萍，馬元春，嚴書超，
申請(專利權)人：華中科技大學，
類型：發明
國別省市：湖北;42
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