PRSS8檢測試劑在制備食管炎和胃炎診斷試劑盒中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供了檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑在制備食管炎和胃炎診斷試劑盒中的應(yīng)用。還提供了一種食管炎和胃炎診斷試劑盒，本發(fā)明專利技術(shù)所提供的試劑盒能夠?qū)κ彻苎缀臀秆走M(jìn)行早期篩查具有操作簡單、高特異性、高靈敏性的優(yōu)點(diǎn)。

Application of PRSS8 detection reagent in preparation of diagnostic kit for esophagitis and gastritis

The invention belongs to the technical field of biology and medicine, and provides the application of the reagent for detecting the serine protease PRSS8 in the preparation of the diagnostic kit for esophagitis and gastritis. The invention provides a diagnostic kit for esophagitis and gastritis. The kit provided by the invention has the advantages of simple operation, high specificity and high sensitivity.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)
，具體涉及檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑在制備食管炎和胃炎診斷試劑盒中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
PRSS8是絲氨酸蛋白酶家族的一個成員，最初于1994年在精液中發(fā)現(xiàn)，被證實(shí)由前列腺分泌，所以又被稱為prostasin。PRSS8在人體內(nèi)有兩種存在形式，一種是通過其羧基末端的磷脂酰肌醇(GPI)結(jié)構(gòu)錨定于細(xì)胞膜，另一種是以分泌蛋白的形式存在于細(xì)胞外。現(xiàn)有的研究大多數(shù)以前者為主，而分泌性PRSS8的功能則鮮有研究。食管炎和胃炎作為常見病，危害著人類的健康，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，如果不能及時治療，則病情可遷延惡化，進(jìn)而影響病人的生存質(zhì)量和存活期，因此通過檢查對食管炎和胃炎進(jìn)行早期診斷有助于盡早的治療疾病，控制病情的發(fā)展，避免進(jìn)一步惡化。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有食管炎和胃炎診斷技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的是是開發(fā)PRSS8在食管炎和胃炎診斷中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了一種檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑在制備食管炎和胃炎診斷試劑盒中的應(yīng)用。其中，所述檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑包括實(shí)時熒光定量PCR引物對，在所述PCR引物對中。上游引物序列為：5′-AGAGGACATGGTGTGTGCTG-3′；下游引物序列為：5′-GAGGCTGGAGTTCTGTCACC-3′。其中，所述檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑還包括本領(lǐng)域用于PRSS8檢測的已知和未知的其他生物化學(xué)試劑，例如，為ELISA、PCR檢測試劑、抗體等。一種食管炎和胃炎診斷試劑盒，所述試劑盒含有絲氨酸蛋白酶PRSS8編碼基因的實(shí)時熒光定量PCR引物對，在所述PCR引物對中，上游引物序列為：5′-AGAGGACATGGTGTGTGCTG-3′；下游引物序列為：5′-GAGGCTGGAGTTCTGTCACC-3′。該試劑盒還包括PCR反應(yīng)常用的試劑和PCR反應(yīng)常用的酶。作為優(yōu)選，試劑盒包括：組織總RNA提取試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑以及定量PCR試劑。其中定量PCR試劑中還包括內(nèi)參GAPDH的特異引物：內(nèi)參GAPDH的特異引物包括：上游引物：5′-GTCAAGGCTGAGAACGGGAA-3′，如SEQIDNO：3所示；下游引物:5′-AAATGAGCCCCAGCCTTCTC-3′，如SEQIDNO：4所示。本專利技術(shù)的有益效果：本專利技術(shù)提供的應(yīng)用通過利用檢測試劑檢測患者血清中PRSS8的水平，可以對胃炎、食管炎患者進(jìn)行早期診斷。本專利技術(shù)在醫(yī)學(xué)和分子診斷領(lǐng)域有實(shí)際意義和廣闊的應(yīng)用前景。附圖說明圖1為PRSS8在食管炎病人和正常人的血清ELISA檢測情況；圖2為PRSS8在胃炎病人和正常人的血清ELISA檢測情況；圖3為PRSSE在食管炎病人、胃炎病人和正常人中mRNA表達(dá)水平。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本專利技術(shù)。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。這些實(shí)施例僅用于說明本專利技術(shù)而不用于限制本專利技術(shù)的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的試驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件。實(shí)施例1PRSS8在食管炎病人和正常人的血清中水平1、一般資料本研究中共48例血清樣本，均來自于新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院，其中食管炎血清樣本20例，正常血清樣本28例。所有食管炎患者以及正常組皆通過胃鏡檢查確診。2、標(biāo)本收集所有研究對象在抽血前均禁食8h以上，采集空腹靜脈血約5ml，室溫靜置30min后以3000r/min離心10min，收集血清，-20℃凍存用于PRSS8濃度監(jiān)測。3、試劑及主要儀器人prostasin(PRSS8)ELISA試劑盒(Lot:F10139905)購自CUSABIOBIOTECH公司。美國MD公司多功能酶標(biāo)儀。4、實(shí)驗(yàn)方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中PRSS8濃度，每組血清樣本設(shè)置3個重復(fù)，在多功能酶標(biāo)儀中檢測OD值，以3個重復(fù)的均值作為此組樣本的最終OD值。分別比較食管炎組和胃炎組與正常組的PRSS8表達(dá)水平。5、統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2組樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有顯著意義。參見圖1，食管炎組血清PRSS8表達(dá)水平為4.58±1.67ng/ml，正常組血清PRSS8表達(dá)水平為3.52±1.49ng/ml，食管炎患者組PRSS8表達(dá)水平高于正常組，P<0.05，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。實(shí)施例2PRSS8在胃炎病人和正常人血清中的水平。1、一般資料本研究中共88例血清樣本，均來自于新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院，胃炎血清樣本60例，正常血清樣本28例。所有胃炎患者以及正常組皆通過胃鏡檢查確診。標(biāo)本收集、試劑及主要儀器、ELISA、統(tǒng)計學(xué)分析等同實(shí)施例1。參見圖2，胃炎組血清PRSS8表達(dá)水平為5.39±1.04ng/mlng/ml，正常組血清PRSS8表達(dá)水平為3.52±1.49ng/ml，胃炎患者組PRSS8表達(dá)水平高于正常組，P<0.05，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。實(shí)施例3本實(shí)施例用于說明利用本專利技術(shù)所提供的試劑盒對食管炎進(jìn)行檢測。(1)標(biāo)本收集本研究中共60例血清樣本，均來自于新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院，其中食管炎血清樣本20例，胃炎血清樣本20例，正常血清樣本20例。所有食管炎患者、胃炎患者以及正常組皆通過胃鏡檢查確診。樣本收集均經(jīng)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院倫理審查委員會同意。所有研究對象在抽血前均禁食8h以上，采集空腹靜脈血，室溫靜置30min后以3000r/min離心10min，收集血清，進(jìn)行RNA提取。(2)試劑盒的組裝mRNA定量的反應(yīng)體系：上游引物(20μm)、下游引物(20μm)、cDNA、H2O、熒光染料SYBRGreen。PRSS8實(shí)時熒光定量PCR的上游引物為5′-AGAGGACATGGTGTGTGCTG-3′；下游引物為5′-GAGGCTGGAGTTCTGTCACC-3′。內(nèi)參GAPDH實(shí)時熒光定量PCR的上游引物為5′-GTCAAGGCTGAGAACGGGAA-3′；下游引物為5′-AAATGAGCCCCAGCCTTCTC-3′。3、逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時熒光定量PCR用RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit(T本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑在制備食管炎和胃炎診斷試劑盒中的應(yīng)用。

【技術(shù)特征摘要】
1.檢測絲氨酸蛋白酶PRSS8的試劑在制備食管炎和胃炎診斷試
劑盒中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測絲氨酸
蛋白酶PRSS8的試劑包括實(shí)時熒光定量PCR引物對，在所述PCR引
物對中，
上游引物序列為：5′-AGAGGACATGGTGTGTGCTG-3′；
下游引物序列為：5′-GAGGCTGGAGTTCTGTCACC-3′。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測絲氨酸
蛋白酶P...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：郭永臣，楊萬才，鮑永華，楊一瓊，
申請(專利權(quán))人：濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：山東;37