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    梗阻性腎病的蛋白標志物制造技術

    技術編號:14564022 閱讀:99 留言:0更新日期:2017-02-05 20:59
    本發明專利技術涉及梗阻性腎病的蛋白標志物。具體而言,本發明專利技術涉及利用大鼠單側輸尿管結扎模型和質譜分析獲得的人梗阻性腎病尿液差異蛋白作為潛在標志物的用途。可能為梗阻性腎病的早期診斷、治療過程中的檢測和預后評估提供了更簡便、快捷、無創的方法選擇。特別地,本發明專利技術涉及可選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分,在制備診斷人梗阻性腎病的試劑中的用途。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及人梗阻性腎病相關的蛋白標志物。具體而言,本專利技術涉及利用但側輸尿管結扎大鼠腎病模型和質譜分析獲得的人梗阻性腎病與疾病嚴重程度相關的蛋白標志物的用途。
    技術介紹
    尿蛋白質組學在腎臟疾病研究中的意義:尿液是生物標志物的重要來源,相對于血液尿液更容易產生變化,而這些變化能較為靈敏的反映身體機能的改變,即,參見YouheG.Canurinebethegoldmineforbiomarkerdiscovery?SciChinaLifeSci2013;43。尿液作為腎臟的主要輸出物,并且可以很容易大量地、無創性地獲得,常被稱為體外的腎活檢,在臨床上具有重要的診斷意義。泌尿系統的功能變化隱匿、不易察覺,目前診斷方法主要依賴于活組織檢查,使早期診斷、治療和治愈率的提高十分困難。尿液常可在一定程度表現泌尿系統的功能,且利用尿液變化診斷腎臟疾病也具有相對方便、簡單、無創、快速等優點。尿蛋白質組主要由腎小球濾過的血漿蛋白質以及腎小管、集合管和泌尿道分泌的蛋白質共同組成,所以腎臟和泌尿道功能的變化可能通過尿蛋白質組反映出來,其高敏感性也使之成為尋找泌尿系統損傷的生物標志物的重要方法。梗阻性腎病是慢性腎臟疾病主要原因之一,并且是導致兒童終末期腎損害最重要的原因Trnka,P.,etal.,Urinarybiomarkersinobstructivenephropathy.ClinJAmSocNephrol,2012.7(10):p.1567-75。在腎臟成熟過程中,輸尿管梗阻可以導致腎臟發育不良,而在成熟腎臟輸尿管梗阻可能導致一系列腎組織損傷,主要的病理表現為腎小管萎縮、腎間質纖維化和間質炎細胞浸潤Bascands,J.L.andJ.P.Schanstra,Obstructivenephropathy:insightsfromgeneticallyengineeredanimals.KidneyInt,2005.68(3):p.925-37。該疾病后期會導致程度嚴重的腎間質纖維化嚴重影響腎功能,甚至導致終末期腎病威脅人的健康和生命。單側輸尿管結扎(UUO)大鼠模型可以模擬梗阻性腎病疾病發生的過程,并可以很好的控制實驗時間以及腎損傷發展嚴重程度。該模型主要通過結扎單側輸尿管引起腎小管上皮細胞損傷,誘導上皮間質變,進而導致腎間質炎細胞浸潤、腎小管擴張和凋亡、成纖維細胞和肌成纖維細胞的增多、細胞外基質沉積,最終引起腎小管萎縮Klahr,S.andJ.Morrissey,Obstructivenephropathyandrenalfibrosis.AmJPhysiolRenalPhysiol,2002.283(5):p.F861-75。該模型可快速引起這些不同的病理損害,并且具有很好的重復性。利用該動物模型模擬梗阻性腎病的過程,觀察腎臟從正常、輕微病變到出現嚴重病理損傷的整體變化,對臨床上梗阻性腎病早期診斷、治療和預后有重要的指導意義。
    技術實現思路
    因此,本專利技術的技術目的在于利用單側輸尿管結扎大鼠腎病模型和質譜分析獲得的人梗阻性腎病病情相關的尿蛋白標志物,以利用其檢測受試者健康狀態、監測梗阻性腎病嚴重程度以及治療進程和/或評估該腎臟疾病預后。換言之,本研究結合蛋白質組學技術和動物模型,研究梗阻性腎病病情相關的生物標志物,用于梗阻性腎病的早期發現,治療過程中的監測,和預后評價。本專利技術發現了一系列用于梗阻性腎病早期診斷、治療過程中檢測和預后評估的蛋白生物標志物。本專利技術為了尋找到人梗阻性病情嚴重程度相關的蛋白標志物,利用單側輸尿管結扎動物模型,在疾病進展過程中獲得實驗動物尿液,利用質譜技術對疾病發生過程中的尿蛋白組進行鑒定,獲得與梗阻性腎病病情嚴重程度相關蛋白。對所獲得的蛋白質組數據經過嚴格的生物信息學分析,獲得能夠反映梗阻性腎病的不同病變階段、用于該疾病早期診斷、治療過程中檢測和預后評估的蛋白生物標志物。本專利技術發現與人梗阻性腎病病情嚴重程度相關的尿蛋白標志物,其中未被報道的蛋白共73個。一方面,本專利技術提供了可選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分在制備用于診斷人梗阻性腎病的試劑中的用途,其中,所述一種或多種蛋白選自單側輸尿管結扎模型大鼠與假手術組大鼠尿液蛋白質譜分析所產生的差異蛋白相對應的人源蛋白。“結合部分”意思是能夠結合至上述蛋白或編碼所述蛋白質的mRNA的分子或實體。另一方面,本專利技術提供了選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分,在制備診斷人梗阻性腎病的試劑中的用途,其中所述一種或多種蛋白選自胎球蛋白-B,抗凝血酶2,超氧化物歧化酶[Cu-Zn],泛素羧基末端水解酶同工酶,維甲酸誘導性絲氨酸羧肽酶,核苷二磷酸激酶,血清白蛋白,半乳凝素3結合蛋白,細胞外超氧化物歧化酶[Cu-Zn],I型膠原α1側鏈,α輔肌動蛋白1,基膜聚醣,胱抑素C,羧肽酶Q,類異戊二烯合成酶結構域蛋白,脫氧核糖核酸酶1,纖維蛋白原β鏈,γ谷酰基水解酶,14-3-3蛋白ζ/Δ,皮質醇結合球蛋白,α1抗糜蛋白酶,α1抗糜蛋白酶,14-3-3蛋白β/α,鈣粒蛋白B,鈣粒蛋白A,鈣周期蛋白,細胞色素P4502E1,二肽基肽酶2,L乳酸脫氫酶,組織蛋白酶H,人附睪蛋白4,凝固因子12,IST1同系物,視黃醛結合蛋白4,前列腺素H2-D異構酶,分泌型尿調素,溶質載體家族12成員7,二肽基肽酶1,白細胞彈性蛋白酶抑制劑,β2微球蛋白,血管抑素,膜聯蛋白A1,血液結合素,轉醛醇酶,表膠質蛋白,載脂蛋白E,埃茲蛋白,組織蛋白酶L2,核轉運因子2,凝膠溶素,基質重構相關蛋白8,鈣粘素1,α輔肌動蛋白4,α2巨球蛋白,激肽釋放酶1,血紅蛋白α亞型,角蛋白(I型細胞骨架10),γ-球蛋白1重鏈,γ-球蛋白2重鏈,γ-球蛋白4重鏈,血清鐵傳遞蛋白,氨基肽酶N,β己糖激酶型β亞型,G蛋白耦合受體C家族成員5C,肌型磷酸化酶,鞭毛轉運蛋白172同系物,纖溶酶原激活物抑制劑,波形蛋白,凝聚素,補體成分C9,溶菌酶C1,膜突蛋白,聚糖磷脂酰肌醇特異性磷脂酶D。進一步地,所述結合部分包含多肽或由多肽組成。進一步地,所述結合部分包含抗體或其抗原結合片段或變體,或由抗體或其抗原結合片段或變體組成。我們定義“選擇性結合”包括相對于另外的多肽更強地結合至所述蛋白的結合部分;優選所述結合為強至少10倍,優選強至少50倍和甚至更優選強至少100倍。優選結合部分只結合至所述蛋白。...

    【技術保護點】
    可選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分在制備用于診斷人梗阻性腎病的試劑中的用途,其中,所述一種或多種蛋白選自單側輸尿管結扎模型大鼠與假手術組大鼠尿液蛋白質譜分析所產生的差異蛋白相對應的人源蛋白。

    【技術特征摘要】
    1.可選擇性結合至一種或多種蛋白的結合部分在制備用于診斷人
    梗阻性腎病的試劑中的用途,其中,所述一種或多種蛋白選自單側輸
    尿管結扎模型大鼠與假手術組大鼠尿液蛋白質譜分析所產生的差異蛋
    白相對應的人源蛋白。
    2.根據權利要求1所述的用途,其中所述一種或多種蛋白選自:
    胎球蛋白-B,抗凝血酶2,超氧化物歧化酶[Cu-Zn],泛素羧基末端水
    解酶同工酶,維甲酸誘導性絲氨酸羧肽酶,核苷二磷酸激酶,血清白
    蛋白,半乳凝素3結合蛋白,細胞外超氧化物歧化酶[Cu-Zn],I型膠原
    α1側鏈,α輔肌動蛋白1,基膜聚醣,胱抑素C,羧肽酶Q,類異戊
    二烯合成酶結構域蛋白,脫氧核糖核酸酶1,纖維蛋白原β鏈,γ谷酰
    基水解酶,14-3-3蛋白ζ/Δ,皮質醇結合球蛋白,α1抗糜蛋白酶,
    α1抗糜蛋白酶,14-3-3蛋白β/α,鈣粒蛋白B,鈣粒蛋白A,鈣周期
    蛋白,細胞色素P4502E1,二肽基肽酶2,L乳酸脫氫酶,組織蛋白酶
    H,人附睪蛋白4,凝固因子12,IST1同系物,視黃醛結合蛋白4,前
    列腺素H2-D異構酶,分泌型尿調素,溶質載體家族12成員7,二肽
    基肽酶1,白細胞彈性蛋白酶抑制劑,β2微球蛋白,血管抑素,膜聯
    蛋白A1,血液結合素,轉醛醇酶,表膠質蛋白,載脂蛋白E,埃茲蛋
    白,組織蛋白酶L2,核轉運因子2,凝膠溶素,基質重構相關蛋白8,
    鈣粘素1,α輔肌動蛋白4,α2巨球蛋白,激肽釋放酶1,血紅蛋白
    α亞型,角蛋白,γ-球蛋白1重鏈,γ-球蛋白2重鏈,γ-球蛋白4
    重鏈,血清鐵傳遞蛋白,氨基肽酶N,β己糖激酶型β亞型,G蛋白耦
    合受體C家族成員5C,肌型磷酸化酶,鞭毛轉運蛋白172同系物,纖
    溶酶原激活物抑制劑,波形蛋白,凝聚素,補體成分C9,溶菌酶C1,
    膜突蛋白,聚糖磷脂酰肌醇特異性磷脂酶D。
    3.根據權利要求1或2所述的用途,其中所述結合部分包含多肽
    或由多肽組成。
    4.根據權利要求1或2所述的用途,其中所述結合部分包含抗體
    或其抗原結合片段或變體,或由抗體或其抗原結合片段或變體組成。
    5.根據權利要求1至4任一項所述的用途,其特征在于所述診斷
    試劑用于檢測受試者健康狀態、監測梗阻性腎病嚴重程度以及治療進
    程和/或評估疾病預后。
    6.根據權利要求5所述的用途,其中通過區分腎小管損傷或間質
    纖維化監測梗阻性腎病嚴重程度。
    7.根據權利要求1至6任一項所述的用途,所述用途包括
    a):獲得受試者的尿液,
    b):分離尿蛋白,
    c):確定正常人和病人尿液蛋白中的所述權利要求1至6任一項
    所述的一種或多種蛋白的水平,
    d):其中所述蛋白的表達水...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:高友鶴袁媛
    申請(專利權)人:中國醫學科學院基礎醫學研究所
    類型:發明
    國別省市:北京;11

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