一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物，屬于基因工程及生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，所述的miRNA標(biāo)志物為miR-320，其引物為SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2。該標(biāo)志物及其引物可用于可用于制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒，用于宮頸癌的早期輔助診斷及預(yù)后評(píng)估。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于基因工程及生殖醫(yī)學(xué)
，涉及一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用，具體為一種與宮頸癌輔助早期診斷及預(yù)后評(píng)估相關(guān)的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
宮頸癌是女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重危害女性健康和生命。2011年，Lancet刊出的宮頸癌最新統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：從1980年到2010年，全球?qū)m頸癌發(fā)病率平均以每年0.6％的增幅遞增，僅2010年一年中，發(fā)展中國(guó)家因?qū)m頸癌死亡的女性總數(shù)就達(dá)到200,000之多，死亡年齡也更趨于年輕化。宮頸癌流行病學(xué)研究結(jié)果所揭示的嚴(yán)峻現(xiàn)實(shí)，使得進(jìn)一步尋找敏感特異的宮頸癌臨床診斷及預(yù)后評(píng)估的分子標(biāo)志物成為迫切需要，是實(shí)現(xiàn)宮頸癌的早期診斷、早期干預(yù)及時(shí)合理治療的關(guān)鍵，是亟待解決的重大科學(xué)問(wèn)題，對(duì)宮頸癌的早期診斷及有效防治具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。MicroRNAs(即miRNAs)是近年來(lái)分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)，它的成熟狀態(tài)是一類長(zhǎng)約19-23個(gè)核苷酸的小單鏈RNA分子，進(jìn)化上具有高度保守性。miRNA的主要功能是調(diào)節(jié)生物體內(nèi)在的與機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育、疾病發(fā)生過(guò)程有關(guān)的基因的表達(dá)。自從參與調(diào)控線蟲(chóng)時(shí)序發(fā)育的lin-4與let-7被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，miRNA分別在2002年和2003年兩度入選Science雜志年度十大科技突破。2005年預(yù)測(cè)miRNAs至少能調(diào)控5300個(gè)人類基因，即所有基因的30％。隨著研究的深入，越來(lái)越多的miRNAs不斷被發(fā)現(xiàn)。聚光燈下的miRNA已經(jīng)逐步擺脫了DNA光芒的掩蓋，從“配角”變成“主角”，并且對(duì)DNA的中心地位提出了新的挑戰(zhàn)。近年來(lái)，miRNA與疾病的關(guān)系已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miRNA通過(guò)負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)與腫瘤，糖尿病等多種人類疾病的發(fā)病高度相關(guān)。研究已經(jīng)證實(shí)血清/組織中存在幾百種的miRNAs，這些小分子RNAs性質(zhì)穩(wěn)定、含量豐富、易于定量檢測(cè)，且存在顯著的疾病特異性。現(xiàn)有的成熟的技術(shù)，包括定性和定量miRNA分子的技術(shù)，表明利用miRNAs作為分子生物標(biāo)志物的方法比傳統(tǒng)的特異蛋白分子標(biāo)記方法將更加有效，為生物標(biāo)志物開(kāi)拓了新境界。miR-320是近年發(fā)現(xiàn)的一類與腫瘤發(fā)病相關(guān)的miRNA。學(xué)者們對(duì)其功能逐漸有了深入的認(rèn)識(shí)：miR-320不但可以抑制正常細(xì)胞周期G1/S的轉(zhuǎn)變，而且可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖；在腫瘤組織如乳腺癌中可以觀察到miR-320表達(dá)明顯下調(diào)，miR-320表達(dá)下調(diào)能夠促進(jìn)腫瘤血管生成和癌細(xì)胞侵襲。這些研究結(jié)果均提示miR-320可能具有腫瘤抑制效應(yīng)。本課題組對(duì)宮頸癌組織miR-320表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織miR-320表達(dá)呈明顯下調(diào)。然而，目前miR-320作為較為穩(wěn)定的生物標(biāo)志物用于宮頸癌輔助早期診斷價(jià)值尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，若能篩選miRNAs作為生物標(biāo)志物，并研制相應(yīng)的輔助早期診斷試劑盒，對(duì)我國(guó)宮頸癌的診斷現(xiàn)狀必將是一次有力的推動(dòng)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本專利技術(shù)的目的在于提供一種與宮頸癌輔助早期診斷及預(yù)后評(píng)估相關(guān)的miRNA標(biāo)志物及其引物，該標(biāo)志物及其引物可用于制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒，為宮頸癌的篩查和早期診斷提供數(shù)據(jù)支持，為宮頸癌的干預(yù)提供數(shù)據(jù)支持。本專利技術(shù)具體通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：專利技術(shù)人通過(guò)分離和研究宮頸癌病例和健康對(duì)照組織中的miR-320，尋找與宮頸癌發(fā)生發(fā)展高度相關(guān)的高特異性和敏感性的miRNAs標(biāo)志物，并研制出可便于臨床應(yīng)用的宮頸癌輔助早期診斷試劑盒。具體為：一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物，所述的miRNA標(biāo)志物為miR-320。所述的miRNA標(biāo)志物miR-320的引物為SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。本專利技術(shù)提供了所述miRNA標(biāo)志物miR-320在制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。所述miRNA標(biāo)志物miR-320的引物在制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。本專利技術(shù)還提供了一種宮頸癌輔助早期診斷試劑盒，該試劑盒用于檢測(cè)宮頸組織中的miR-320。所述的診斷試劑盒含有標(biāo)志物miR-320的引物：SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。所述診斷試劑盒還可以包括PCR反應(yīng)常用的酶和試劑，如逆轉(zhuǎn)錄酶，緩沖液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；還可以含有標(biāo)準(zhǔn)品和/或?qū)φ掌贰１緦＠夹g(shù)的有益效果為：本專利技術(shù)提供的微小核糖核酸(microRNAs/miRNAs)標(biāo)志物作為宮頸癌早期診斷的標(biāo)志物的優(yōu)越性在于：1)miRNAs是一種新型生物標(biāo)志物，區(qū)別于傳統(tǒng)生物標(biāo)志物，不僅穩(wěn)定、微創(chuàng)、易于檢測(cè)，且定量精確，將大大提高疾病診斷的敏感性和特異性，該類小分子RNA生物標(biāo)志物的成功開(kāi)發(fā)將為宮頸癌的早期診斷開(kāi)創(chuàng)全新局面，為其他疾病生物標(biāo)志物的研制提供借鑒。2)miRNAs試劑盒是一種系統(tǒng)、全面的診斷和監(jiān)測(cè)試劑盒，可用于宮頸癌的早期診斷，為臨床醫(yī)生快速準(zhǔn)確預(yù)測(cè)宮頸癌結(jié)局、及時(shí)采取更具個(gè)性化的防治方案提供支持。本專利技術(shù)通過(guò)控制年齡等對(duì)疾病發(fā)展的影響因素，研究miRNA在宮頸癌早期診斷的應(yīng)用前景，闡述異常表達(dá)的miR-320對(duì)于宮頸癌進(jìn)展的影響，揭示其篩查和早期診斷價(jià)值。因此，本專利技術(shù)獲得了宮頸癌發(fā)病特異性miR-320標(biāo)志物；通過(guò)miRNAs生物標(biāo)志物和診斷試劑盒的研制和應(yīng)用，可使得宮頸癌的早期診斷更加方便易行，為臨床醫(yī)生快速準(zhǔn)確掌握患者病情，為臨床治療效果評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)，并為發(fā)現(xiàn)具有潛在治療價(jià)值的新型小分子藥物靶標(biāo)提供幫助。附圖說(shuō)明圖1是本專利技術(shù)實(shí)施例2宮頸癌病例組和對(duì)照組的miR-320表達(dá)的柱形圖；Normal：正常對(duì)照組；Tumor：宮頸癌組。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本專利技術(shù)的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本專利技術(shù)做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本專利技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本專利技術(shù)的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以下實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍內(nèi)。本專利技術(shù)解決問(wèn)題的技術(shù)方案包括：(1)建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本庫(kù)和數(shù)據(jù)庫(kù)：以標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)采集符合標(biāo)準(zhǔn)的組織樣本，系統(tǒng)收集完整的人口學(xué)資料和臨床資料。(2)宮頸組織miR-320差異表達(dá)分析：選擇宮頸癌病例、與宮頸癌病例年齡匹配的子宮肌瘤女性為對(duì)照，檢測(cè)病例及對(duì)照宮頸組織中miR-320表達(dá)量，分析宮頸癌病例和對(duì)照間宮頸組織miR-320的表達(dá)差異，進(jìn)一步分析miR-320在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。(3)miR-320篩查和輔助早期診斷試劑盒的研制：根據(jù)宮頸癌病例和對(duì)照的組織m本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物，其特征在于：所述的miRNA標(biāo)志物為miR?320。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物，其特征在于：所述的miRNA標(biāo)志物為miR-320。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種診斷宮頸癌的miRNA標(biāo)志物，其特征在于：所述的miRNA標(biāo)
志物miR-320的引物為SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。
3.權(quán)利要求1所述miRNA標(biāo)志物miR-320在制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求2所述miRNA標(biāo)志物miR-320的引物在制備宮頸癌輔助早期診斷試劑盒中的
應(yīng)用。
5.一種宮頸癌輔助早期診斷...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張婷，陳道楨，鄒萍，陳鈺，蔣潔，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：無(wú)錫市婦幼保健院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：江蘇;32