芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法技術

本發(fā)明專利技術公開了一種芐氧羰基?L?丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，其色譜條件為：色譜柱：氨基鍵合硅膠柱；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液與乙腈體積比為35:65?75；其中，0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液pH值為4.0；流動相流速：0.7?1ml/min；檢測波長：215nm；色譜柱柱溫：30℃；進行高效液相色譜分析，測定芐氧羰基?L?丙氨酸的含量。本發(fā)明專利技術方法可快速，準確測定出芐氧羰基?L?丙氨酸的含量，確保其質量可控，減小誤差，節(jié)約成本，操作簡單，檢測時間短，提高了生產效率。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及柱色譜法測定化合物含量

技術介紹
丙谷二肽（丙氨酰谷氨酰胺）是腸外營養(yǎng)，可經由腸外營養(yǎng)輸液補充谷氨酰胺，分解釋放出的氨基酸作為營養(yǎng)物質各自儲存在身體的相應部位并隨機體的需要進行代謝。適用于需要補充谷氨酰胺患者的腸外營養(yǎng)，包括處于分解代謝和高代謝狀況的患者。芐氧羰基-L-丙氨酸（CBZ-L-丙氨酸）是制備丙氨酰谷氨酰胺的起始原料，由于生產前需對原料藥進行質量檢測。現有技術中公開了采用C18色譜柱，0.01%磷酸：乙腈的流動相，但該方法檢測時間長，一個樣品需65min，且需梯度洗脫，對高效液相色譜儀、配制流動相的試劑要求較高。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是提供一種芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，本方法可快速，準確測定出芐氧羰基-L-丙氨酸的含量，確保其質量可控，減小誤差，節(jié)約成本，操作簡單，檢測時間短，提高了生產效率。為解決上述技術問題，本專利技術所采取的技術方案是：一種芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，其色譜條件為：色譜柱：氨基鍵合硅膠柱；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液與乙腈體積比為35:65-75；其中，0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液pH值為4.0；流動相流速：0.7-1ml/min；檢測波長：215nm；色譜柱柱溫：30℃；進行高效液相色譜分析，測定芐氧羰基-L-丙氨酸的含量。優(yōu)選的，芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，包括以下步驟：（1）配制流動相，調節(jié)pH值，過濾、脫氣；（2）調節(jié)高效液相色譜儀條件，開機平衡色譜柱；（3）對照品溶液和待測樣品溶液的配制：精密稱取芐氧羰基-L-丙氨酸對照品及待測樣品，分別用流動相溶解定容，即得；（4）將對照品溶液、待測樣品溶液過濾后注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，采用外標法計算待測樣品中芐氧羰基-L-丙氨酸的含量。優(yōu)選的，流動相為：0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液與乙腈體積比為35:75。優(yōu)選的，流動相流速為：0.7ml/min。優(yōu)選的，色譜柱長度為250mm，內徑為4.6mm，其填料粒徑為5μm。優(yōu)選的，步驟（3）中，對照品溶液和待測樣品溶液的濃度為0.20-0.21mg/ml。進一步優(yōu)選的，步驟（4）中，對照品溶液和待測樣品溶液的進樣體積為20μl。采用上述技術方案所產生的有益效果在于：本專利技術采用氨基鍵合硅膠柱，進行高效液相色譜分析，可以通過該方法準確測定出芐氧羰基-L-丙氨酸的含量，為制備丙氨酸谷氨酰胺提供原始數據，確保其質量可控，減小誤差，節(jié)約成本，操作簡單，且其出峰時間4-8min，檢測時間短，提高了工作效率。既適用于規(guī)模化生產中芐氧羰基-L-丙氨酸含量的檢測，也適用于實驗室的檢測分析。附圖說明下面結合附圖和具體實施方式對本專利技術作進一步詳細的說明；圖1是本專利技術實施例1中對照品溶液的高效液相色譜圖；圖2是本專利技術實施例1中待測樣品溶液的高效液相色譜圖。具體實施方式本專利技術的實施例僅用來說明實現本專利技術的技術方案，這些實施方式并不對本專利技術構成進一步限定，以下實施例中，采用高效液相色譜儀為日本島津LC-15C，SPD-15C，色譜柱為氨基鍵合硅膠柱，GRACE，250mm*4.6mm，5μm，進樣體積為20μl（定量環(huán)），也可采用其他廠家和型號的高效液相色譜儀，氨基鍵合硅膠柱以及其他進樣體積，都能達到本專利技術的目的。實施例1-3色譜條件：色譜柱：氨基鍵合硅膠柱，GRACE，250mm*4.6mm，5μm；流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀水溶液（磷酸調pH至4.0）與乙腈體積比為35:75；流動相流速：0.7ml/min；檢測波長：215nm；色譜柱溫：30℃；實驗步驟：（1）配制流動相，調節(jié)pH值，過濾、脫氣；（2）調節(jié)高效液相色譜儀條件，開機平衡色譜柱；（3）對照品溶液和待測樣品溶液的配制：對照品溶液：稱取芐氧羰基-L-丙氨酸對照品10.0mg于50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；待測樣品溶液：稱取芐氧羰基-L-丙氨酸待測樣品10.0mg于50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；（4）將對照品溶液、待測樣品溶液過濾后注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，采用外標法計算待測樣品中芐氧羰基-L-丙氨酸的含量；外標法計算待測樣品中芐氧羰基-L-丙氨酸的含量公式為：X（%）=C對×A樣/A對/C樣*100C對為對照品溶液中芐氧羰基-L-丙氨酸的濃度，單位為mg/ml；A對為對照品溶液色譜圖的峰面積或峰高；A樣為待測樣品溶液色譜圖的峰面積或峰高；C樣為待測樣品溶液中待測溶液的濃度，單位為mg/ml；（5）實施例1待測樣品溶液色譜圖，見圖2所示，5.218min為芐氧羰基-L-丙氨酸的峰，其余為雜峰，主峰出峰時間適宜，理論塔板數大于5000且與雜質峰分離度良好。實施例4與實施例1的區(qū)別在于，色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀水溶液（磷酸調pH至4.0）與乙腈體積比為35:65；流動相流速：1ml/min。實施例5與實施例1的區(qū)別在于，色譜條件：流動相：0.05mol/l磷酸二氫鉀水溶液（磷酸調pH至4.0）與乙腈體積比為35:70；流動相流速：0.8ml/min。具體數值見下表所示：本專利技術采用氨基鍵合硅膠柱，進行高效液相色譜分析，可以通過該方法準確測定出芐氧羰基-L-丙氨酸的含量，為制備丙氨酸谷氨酰胺提供原始數據，確保其質量可控，減小誤差，節(jié)約成本，操作簡單，且其出峰時間4-8min，檢測時間短，提高了工作效率。既適用于規(guī)模化生產中芐氧羰基-L-丙氨酸含量的檢測，也適用于實驗室的檢測分析。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種芐氧羰基?L?丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，其色譜條件為：色譜柱：氨基鍵合硅膠柱；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液與乙腈體積比為35:65?75；其中，0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液pH值為4.0；流動相流速：0.7?1ml/min；檢測波長：215nm；色譜柱柱溫：30℃；進行高效液相色譜分析，測定芐氧羰基?L?丙氨酸的含量。

【技術特征摘要】
1.一種芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，其色譜條件為：色譜柱：氨基鍵合硅膠柱；流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液與乙腈體積比為35:65-75；其中，0.05mol/L磷酸二氫鉀水溶液pH值為4.0；流動相流速：0.7-1ml/min；檢測波長：215nm；色譜柱柱溫：30℃；進行高效液相色譜分析，測定芐氧羰基-L-丙氨酸的含量。2.根據權利要求１所述的芐氧羰基-L-丙氨酸的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）配制流動相，調節(jié)pH值，過濾、脫氣；（2）調節(jié)高效液相色譜儀條件，開機平衡色譜柱；（3）對照品溶液和待測樣品溶液的配制：精密稱取芐氧羰基-L-丙氨酸對照品及待測樣品，分別用流動相溶解定容，即得；（4）將對照品溶液、待測樣品溶液過濾后注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積，采用外標法...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：李斌水，米造吉，劉利聰，張思雨，何連順，
申請(專利權)人：精晶藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：河北;13