一種靖西細筒苣苔組培葉片兩步成苗方法技術(shù)

一種靖西細筒苣苔葉片組培兩步成苗方法：取靖西細筒苣苔幼嫩葉片作為外植體進行滅菌處理，然后將其切分成含主脈0.5?cm×1?cm大小后接種到誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，1?~1.5個月后選擇幼嫩葉片上分化出的具有2片以上葉子、高1~2.5cm的無菌芽苗轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基上；當(dāng)無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5~4cm時，煉苗3~4天，將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。采用本發(fā)明專利技術(shù)方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量靖西細筒苣苔的優(yōu)質(zhì)種苗，并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟，節(jié)約了大量人力物力，因此簡單易行、生產(chǎn)成本降低，有效解決了靖西細筒苣苔規(guī)模化育苗及種質(zhì)資源保存問題。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及生物
，具體地，涉及靖西細筒苣苔組培葉片兩步成苗方法。
技術(shù)介紹
靖西細筒苣苔為苦苣苔科細筒苣苔屬植物，是2011年發(fā)現(xiàn)的新種，靖西細筒苣苔為多年生草本，根狀莖圓柱形，葉片腎形或圓形，花序梗、花序和花期外被線狀短柔毛和紫色腺體，花期5-6月，果期6月。中國特有珍稀植物，特產(chǎn)廣西靖西，生于石灰?guī)r山地巖石上，海拔約為200-250m。靖西細筒苣苔分布區(qū)域極其狹窄，目前僅在廣西靖西地區(qū)石灰?guī)r山陡崖上發(fā)現(xiàn)少量植株，由于生長環(huán)境惡劣缺少水肥，加之其種子細小，萌發(fā)需要的溫度范圍、濕度范圍和土壤酸堿度范圍比較小，自然界難以進行有性繁殖，急需建立有效的繁育和保護體系，本專利技術(shù)旨在通過組織培養(yǎng)技術(shù)葉片兩步成苗方法對靖西細筒苣苔種質(zhì)資源進行有效的繁育和保護，是目前對靖西細筒苣苔育苗最便捷、穩(wěn)定的手段，可以節(jié)約大量的人力、物力和場地，便于種質(zhì)交換和轉(zhuǎn)移，避免有害病蟲的人為傳播。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的在于提供一種靖西細筒苣苔組培葉片兩步成苗方法，能夠短時間內(nèi)提供大量優(yōu)質(zhì)適合栽培的靖西細筒苣苔種苗。為了實現(xiàn)本專利技術(shù)的上述目的，本專利技術(shù)提供了如下技術(shù)方案：靖西細筒苣苔組培葉片兩步成苗方法，其特征在于：（1）葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng)：取靖西細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45s，無菌水2~3次，投入0.1%Hcl25min,無菌水2~3次，0.1%Hcl23min，無菌水2~3次沖洗干后切分為0.5cm×1cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強度1800~2600lux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽；（2）不定芽壯苗生根培養(yǎng)：選擇靖西細筒苣苔葉片分化1~1.5個月高2~3cm不定芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26°C，光照強度2000~2800lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養(yǎng)，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。當(dāng)無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5~4cm時，打開瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3~4天后，將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去培養(yǎng)基，將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。采用本專利技術(shù)所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量靖西細筒苣苔的優(yōu)質(zhì)種苗，并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟，節(jié)約了大量人力物力，因此簡單易行、生產(chǎn)成本降低，有效解決了靖西細筒苣苔規(guī)模化育苗及種質(zhì)資源保存問題。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本專利技術(shù)的技術(shù)方案進一步說明。靖西細筒苣苔組培葉片兩步成苗方法法，包括以下步驟：（1）葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng)：取靖西細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45s，無菌水2~3次，投入0.1%Hcl25min,無菌水2~3次，0.1%Hcl23min，無菌水2~3次沖洗干后切分為0.5cm×1cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強度1800~2600lux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽，觀察發(fā)現(xiàn)，6-BA和NAA濃度對不定芽數(shù)誘導(dǎo)有顯著影響，在6-BA濃度為1.5mg/L,NAA濃度為1.0mg/L,KT濃度為0.2mg/L時不定芽數(shù)最高，達到11.6個。上述誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加6-芐氨基嘌呤1~2.0mg、α-萘乙酸0.3~１mg、激動素0.2~0.5mg、瓊脂3.8~4.5g和蔗糖20~25g，ｐＨ值5.8~6.0，培養(yǎng)溫度為24±2°C，光照強度1800~2600lux，光照時間為8~10小時/天。（2）不定芽壯苗生根培養(yǎng)：選擇靖西細筒苣苔葉片分化1~1.5個月高2~3cm不定芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26°C，光照強度2000~2800lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養(yǎng)，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。觀察發(fā)現(xiàn)，在添加0.5g/L活性炭的MS培養(yǎng)基中6-BA和IAA協(xié)同作用對靖西細筒苣苔生根效果好，當(dāng)6-BA濃度升高為0.6mg/L，NAA濃度為1.0mg/L時靖西細筒苣苔組培苗生根效果最好，植株粗壯，植株高度5.3cm，生根率達到100%，平均根數(shù)達到6根。當(dāng)無菌苗每株生根4條以上、根長達2.5~4cm時，打開瓶蓋，在室內(nèi)煉苗3~4天后，將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去培養(yǎng)基，將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。備注：6-BA（6-芐氨基嘌呤）,NAA（萘乙酸）,KT（激動素）,IAA(吲哚乙酸),AC(活性炭)。本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種靖西細筒苣苔葉片組培兩步成苗方法，其特征在于：（1）葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng)：取靖西細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45s，無菌水2~3次，投入0.1%?Hcl2?5min,?無菌水2~3次，0.1%?Hcl2?3min，無菌水2~3次沖洗干后切分為0.5?cm×1cm大小接種在MS+?1.0~1.5mg/L6?BA+0.5~1.0mg/LNAA+0.1~0.2mg/L?KT誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強度1800~2600lux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽；（2）不定芽壯苗生根培養(yǎng)：選擇靖西細筒苣苔葉片分化1~1.5個月高2~3cm不定芽接種到MS+0.2~0.4mg/L6?BA+1.0~1.5mg/LNAA+0.5mg/L?AC壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26°C，光照強度2000~2800lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養(yǎng)，1?~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種靖西細筒苣苔葉片組培兩步成苗方法，其特征在于：
（1）葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng)：取靖西細筒苣苔幼嫩葉片，在75%乙醇中表面消毒30~45s，無菌水2~3次，投入0.1%Hcl25min,無菌水2~3次，0.1%Hcl23min，無菌水2~3次沖洗干后切分為0.5cm×1cm大小接種在MS+1.0~1.5mg/L6-BA+0.5~1.0mg/LNAA+0.1~0.2mg/LKT誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上，在溫度為22~26°C，光照強度1800~2600lux，光照時間為8~10小時/天的條件下，10~15天葉片分化出不定芽；
（2）不定芽壯苗生根培養(yǎng)：選擇靖西細筒苣苔葉片分化1~1.5個月高2~3cm不定芽接種到MS+0.2~0.4mg/L6-BA+1.0~1.5mg/LNAA+0.5mg/LAC壯苗生根培養(yǎng)基，在溫度為22~26°C，光照強度2000~2800lux，光照時間為8~10小時/天的條件下進行培養(yǎng)，1~2個月不定芽長至高4~6cm的無菌苗。

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李翠，張占江，繆劍華，韋坤華，韋瑩，李林軒，王一諾，肖冬，王曉峰，
申請(專利權(quán))人：廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，
類型：發(fā)明
國別省市：廣西;45