一種黃芪組培苗的培養(yǎng)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，包括1)種子消毒，2)無菌苗的培養(yǎng)，3)叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)，4)叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)，5)誘導(dǎo)生根，6)試管苗的移栽。本發(fā)明專利技術(shù)中種子消毒后其萌發(fā)率可達(dá)99％，且不發(fā)生任何污染現(xiàn)象；叢生芽誘導(dǎo)率達(dá)50％～75％，成苗達(dá)90％以上，可以滿足人工大量栽培的需要，而且培育出的黃芪苗能保持母體優(yōu)良性狀，移栽后生長快，產(chǎn)量高，移栽后2～3年可收獲，比傳統(tǒng)栽培時(shí)間縮短1年左右，在同等管理?xiàng)l件下比傳統(tǒng)栽培產(chǎn)量提高30％。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于中藥材繁殖栽培
，具體涉及一種黃芪組培苗的培養(yǎng)方法。
技術(shù)介紹
植物組織培養(yǎng)是從20世紀(jì)30年代初期發(fā)展起來的一項(xiàng)生物技術(shù)，是指在無菌條件下，將離體的植物器官(如根尖、莖尖、葉、花、未成熟的果實(shí)、種子等)、組織(如形成層、花藥組織、胚乳、皮層等)、細(xì)胞(如體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)或原生質(zhì)體等在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織或潛伏芽等，或長成完整的植株的技術(shù)，由于是在試管內(nèi)培養(yǎng)，而且培養(yǎng)的是脫離植株母體的培養(yǎng)物，因此也稱之為離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng)。黃芪是豆科蝶形花亞科多年生草本植物，具有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但由于近年來的過度采挖，致使野生黃芪資源幾近枯竭，不能滿足市場的需要，所以離體培養(yǎng)已成為增加黃芪產(chǎn)量的主要手段之一，黃芪快速繁殖體系的建立，主要是針對種子的消毒和萌發(fā)、外植體的篩選、愈傷組織初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的選擇，以及褐化現(xiàn)象的抑制進(jìn)行的。近年來，黃芪通過多代的種植與繁殖，出現(xiàn)生長緩慢，易染病，產(chǎn)量不高的問題，期刊《甘肅農(nóng)業(yè)科技》，2010年第6期，30-32頁，媽偉明等人提供了黃芪愈傷組織的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)的方法，采用了葉片作為外植體，但不利于誘導(dǎo)出完整的植株，黃芪苗的生活力弱。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中黃芪栽培出現(xiàn)生長緩慢，易染病，產(chǎn)量不高的問題，提供一種組織培養(yǎng)育苗方法，提高黃芪育苗成苗率，而且能保持母體優(yōu)良性狀，移栽后生長快，產(chǎn)量高，可大面積進(jìn)行黃芪人工栽培。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)所述的一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，具體包括以下步驟：1)種子消毒：將黃芪種子浸泡在適量洗潔精10-15min中后，再依次進(jìn)行45s中75％的酒精浸泡和10-15min，0.1％的升汞消毒；2)無菌苗的培養(yǎng)：將步驟1)消毒后的種子在超凈工作臺上用無菌水浸洗3～5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在人工氣候箱放置培養(yǎng)，人工氣候箱環(huán)境控制如下：濕度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上；3)叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟2)培養(yǎng)的無菌苗長至5～6厘米后，切取下胚軸為外植體，2.6～2.9厘米，接入?yún)采砍醮T導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)前3天進(jìn)行暗培養(yǎng)，其余7天進(jìn)行光培養(yǎng)(10h/d)后即有叢生芽形成；4)叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟3)中的叢生芽轉(zhuǎn)移到繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，誘導(dǎo)50-60天；5)誘導(dǎo)生根：當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70％長至3～4厘米時(shí)，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；6)試管苗的移栽：將發(fā)育良好，具有2～3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75％～80％遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。所述步驟2)中光照，單位面積的光通量為1050lx。所述步驟3)中叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培養(yǎng)基溫度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。所述步驟4)中叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)為MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培養(yǎng)基溫度保持24℃～26℃，PH值5.9～6.2。本專利技術(shù)的有益效果之處：本專利技術(shù)中種子消毒后其萌發(fā)率可達(dá)99％，且不發(fā)生任何污染現(xiàn)象；本專利技術(shù)的黃芪育苗方法，取材方便，叢生芽誘導(dǎo)率達(dá)60％～85％，成苗達(dá)90％以上，可以滿足人工大量栽培的需要，而且培育出的黃芪苗能保持母體優(yōu)良性狀，移栽后生長快，產(chǎn)量高，移栽后2～3年可收獲，比傳統(tǒng)栽培時(shí)間縮短1年左右，每畝產(chǎn)黃芪干品650千克，在同等管理?xiàng)l件下比傳統(tǒng)栽培產(chǎn)量提高30％。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)具體的方案進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1本專利技術(shù)所述的一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，具體包括以下步驟：1)種子消毒：將黃芪種子浸泡在適量洗潔精10min中后，再依次進(jìn)行45s中75％的酒精浸泡和15min，0.1％的升汞消毒；2)無菌苗的培養(yǎng)：將步驟1)消毒后的種子在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在人工氣候箱放置培養(yǎng)，人工氣候箱環(huán)境控制如下：濕度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上，單位面積的光通量為1050lx；3)叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟2)培養(yǎng)的無菌苗長至6厘米后，切取下胚軸為外植體，2.9厘米，接入?yún)采砍醮T導(dǎo)培養(yǎng)基，叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc，培養(yǎng)基溫度保持24℃，PH值6.0，培養(yǎng)前3天進(jìn)行暗培養(yǎng)，其余7天進(jìn)行光培養(yǎng)(10h/d)后即有叢生芽形成；4)叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟3)中的叢生芽轉(zhuǎn)移到繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)為MS+0.5或1.0mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.1mg/LVc+2.5％的蔗糖，培養(yǎng)基溫度保持24℃，PH值6.2，誘導(dǎo)50天；5)誘導(dǎo)生根：當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70％長至4厘米時(shí)，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；6)試管苗的移栽：將發(fā)育良好，具有3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有80％遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。實(shí)施例2本專利技術(shù)所述的一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，具體包括以下步驟：1)種子消毒：將黃芪種子浸泡在適量洗潔精15min中后，再依次進(jìn)行45s中75％的酒精浸泡和15min，0.1％的升汞消毒；2)無菌苗的培養(yǎng)：將步驟1)消毒后的種子在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在人工氣候箱放置培養(yǎng)，人工氣候箱環(huán)境控制如下：濕度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上，單位面積的光通量為1050lx；<本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于，具體包括以下步驟：1)種子消毒：將黃芪種子浸泡在適量洗潔精10?15min中后，再依次進(jìn)行45s中75％的酒精浸泡和10?15min，0.1％的升汞消毒；2)無菌苗的培養(yǎng)：將步驟1)消毒后的種子在超凈工作臺上用無菌水浸洗3～5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在人工氣候箱放置培養(yǎng)，人工氣候箱環(huán)境控制如下：濕度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚上；3)叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟2)培養(yǎng)的無菌苗長至5～6厘米后，切取下胚軸為外植體，2.6～2.9厘米，接入?yún)采砍醮T導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)前3天進(jìn)行暗培養(yǎng)，其余7天進(jìn)行光培養(yǎng)(10h/d)后即有叢生芽形成；4)叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟3)中的叢生芽轉(zhuǎn)移到繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，誘導(dǎo)50?60天；5)誘導(dǎo)生根：當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70％長至3～4厘米時(shí)，將健壯的芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/LNAA+0.3％的活性炭(AC)；6)試管苗的移栽：將發(fā)育良好，具有2～3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3～4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養(yǎng)基，在有75％～80％遮蔭度的大棚內(nèi)，移栽到苗床或營養(yǎng)杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85％以上，8天后，可揭去薄膜，按常規(guī)管理。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種黃芪組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
1)種子消毒：將黃芪種子浸泡在適量洗潔精10-15min中后，再依次進(jìn)行45s
中75％的酒精浸泡和10-15min，0.1％的升汞消毒；
2)無菌苗的培養(yǎng)：將步驟1)消毒后的種子在超凈工作臺上用無菌水浸洗
3～5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養(yǎng)基，在人工氣候箱放置培養(yǎng)，
人工氣候箱環(huán)境控制如下：濕度50％左右，18h光照/6h黑暗，25℃白天/18℃晚
上；
3)叢生芽初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：當(dāng)步驟2)培養(yǎng)的無菌苗長至5～6厘米后，切
取下胚軸為外植體，2.6～2.9厘米，接入?yún)采砍醮T導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)前3天
進(jìn)行暗培養(yǎng)，其余7天進(jìn)行光培養(yǎng)(10h/d)后即有叢生芽形成；
4)叢生牙繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)，將步驟3)中的叢生芽轉(zhuǎn)移到繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，
誘導(dǎo)50-60天；
5)誘導(dǎo)生根：當(dāng)繼代增殖的叢生芽有70％長至3～4厘米時(shí)，將健壯的
芽單切，并轉(zhuǎn)到新的誘導(dǎo)過的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/L
NAA+0.3％的活性炭(AC)；

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋維成，
申請(專利權(quán))人：宋維成，
類型：發(fā)明
國別省市：甘肅;62