一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑及其制備方法。所述用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的特征在于，按重量百分比，其組分主要為：牛初乳IgG5％?30％，緩沖劑1.0％?8％，保護(hù)劑65％?90％；其中，所述牛初乳IgG的純度為90％或以上。所述用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的制備方法為：1)提純得到高純度IgG溶液后，加入緩沖劑，用堿液調(diào)節(jié)溶液pH值至中性后，在40℃下真空濃縮至溶液原體積的30％?50％，得到濃縮液；2)向濃縮液中添加保護(hù)劑，干燥噴霧得到微膠囊粉末。本發(fā)明專利技術(shù)提供的上述制劑不受胃酸和消化酶分解，尤其適用于治療輪狀病毒引起的腹瀉，制備方法工藝簡單，成本低，適于大規(guī)模生產(chǎn)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑及其制備方法，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
腸道疾病大多由多種細(xì)菌和病毒感染引起，我國腸道疾病每年的發(fā)病率僅次于感冒，超過10億人次，有5000余萬人長期忍受著慢性、頑固性腸道疾病的折磨。腹瀉，特別是秋季腹瀉，大多是由輪狀病毒感染引起,我國小兒腹瀉病原構(gòu)成比中,輪狀病毒感染約占40％(歐美國家50％左右)。多發(fā)于秋冬季節(jié),嚴(yán)重者可抽搐,并發(fā)脫水、水電解質(zhì)紊亂,甚至危及生命。據(jù)研究，牛初乳的抗病能力主要來源于免疫球蛋白，牛初乳免疫球蛋白有5種，分別是IgG、IgE、IgD、IgM以及IgA，其中免疫球蛋白G(IgG)含量最高，也是牛初乳中最引人注目的活性功能因子和人體所需的生理活性物質(zhì)。IgG通過與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合而發(fā)揮免疫效應(yīng),是構(gòu)成機(jī)體體液免疫的主要物質(zhì)。近年來，人們研究發(fā)現(xiàn)牛初乳IgG可以有效地預(yù)防、治療嬰幼兒腹瀉，特別是輪狀病毒腹瀉。但是現(xiàn)在市面上用于治療腹瀉的牛初乳制品均為牛初乳簡單脫脂濃縮而成的牛初乳粉末(或顆粒)，或者是經(jīng)過特殊免疫(如輪狀病毒免疫)后具有比較強(qiáng)的抗(輪狀)病毒效果的制品，沒有文獻(xiàn)提到可以將IgG作為單一活性組分直接制備用于治療腹瀉的制劑。此外，牛初乳免疫球蛋白G存在下述缺陷，使得將其用于工業(yè)生產(chǎn)制備治療腹瀉的制劑，也存在一定的困難：1、牛初乳IgG的穩(wěn)定性不好。如牛初乳IgG僅在60℃及以下的范圍內(nèi)能保持較好的穩(wěn)定性，而在80℃及以上的溫度條件下，短時間內(nèi)便可完全失活；又如在pH5.0～10.0范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，但是在胃酸和消化酶的作用下很容易被降解。2、工業(yè)上難以獲得高純度的牛初乳IgG。目前采用直接凍干生產(chǎn)技術(shù)得到的牛初乳IgG的純度一般在20％左右；采用多步鹽析法提純得到的純度一般也不超過40％。盡管實(shí)驗(yàn)室中可以采取親和層析方法提取高純度的牛初乳IgG，但是因?yàn)樘崛r間長、能耗高，使得提純成本很高，因而不適用于工業(yè)大規(guī)模提純生產(chǎn)。目前市面上牛初乳IgG制品中，IgG的純度較低，通常應(yīng)用于食品和保健品行業(yè)，無法用于生產(chǎn)藥物制劑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本專利技術(shù)的目的是提供一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑及其制備方法，該制劑不受胃酸和消化酶分解，尤其適用于治療輪狀病毒引起的腹瀉。該制備方法工藝簡單，成本低，適于大規(guī)模生產(chǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)所采用的解決方案是：一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，按重量百分比，其組分主要為：牛初乳IgG5％-30％，緩沖劑1.0％-8％，保護(hù)劑65％-90％；其中，所述牛初乳IgG的純度為90％或以上。按上述方案，優(yōu)選地，所述組分中，牛初乳IgG的含量為20％。按上述方案，優(yōu)選地，所述緩沖劑為檸檬酸鈉。按上述方案，優(yōu)選地，所述保護(hù)劑是由蔗糖、麥芽糖、甘氨酸、半乳糖、麥芽糊精和阿拉伯膠配制而成的組合物。按上述方案，優(yōu)選地，所述蔗糖、麥芽糖、甘氨酸、半乳糖、麥芽糊精和阿拉伯膠的重量比為2：1：1：0.5：0.5：0.6。按上述方案，優(yōu)選地，所述用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的劑型為微膠囊粉末。本專利技術(shù)還提供了上述用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：1、提純得到高純度(90％或以上)IgG溶液后，加入緩沖劑，用堿液調(diào)節(jié)溶液pH值至中性后，在40℃下真空濃縮至溶液原體積的30％-50％，得到濃縮液；2、向濃縮液中添加保護(hù)劑，干燥噴霧得到微膠囊粉末。按上述方案，優(yōu)選地，所述高純度IgG溶液的制備方法如下：1)將含有IgG的牛初乳粉末溶解于鹽酸胍溶液中，水浴，離心，取中間液體調(diào)節(jié)ph到4.6，水浴，靜置，離心，收集乳濁液中間的澄清液并調(diào)節(jié)ph至7.4，在冰上放置，用等體積的pbs稀釋后，過濾，得到IgG溶液的粗提純混合物；或者，將含有IgG的牛初乳液體離心，取中間的液體部分水浴，再加入等體積的ph4.6的醋酸溶液，繼續(xù)水浴；過濾，取過濾液離心，再收集中間的澄清液，調(diào)節(jié)ph至7.4，在冰上放置，用等體積的pbs稀釋后，過濾，得到IgG溶液的粗提純混合物；2)采用親和層析法對上述IgG溶液的粗提純混合物提純：分別用純水、氫氧化鈉和蒸餾水清洗預(yù)裝柱，再用ph7.4的pbs溶液充分平衡柱子；以1ml/min的上樣速度加入IgG溶液的粗提純混合物，收集所有流穿；再用平衡液沖洗柱子，打開akta層析系統(tǒng)，前處理系統(tǒng)，保持整個流量是pbs溶液后，再用檸檬酸洗脫，收集洗脫峰，得高純度IgG溶液。相比于現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)的有益效果在于：1、本案申請人在研究牛初乳的抗病毒作用機(jī)理時，驗(yàn)證了抗病毒(尤其是輪狀病毒)的主要活性成分在于牛初乳IgG，因而首次提出將純度高達(dá)90％以上的牛初乳IgG作為單一活性成分配制用于治療腹瀉的制劑。2、本專利技術(shù)提供的制劑配方中，選擇的是低含量高純度的IgG，大大降低了產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。根據(jù)藥效篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)所述配方中高純度IgG的含量在20％(重量百分比)時，抗病毒效果以及成本情況最好。3、本專利技術(shù)中高純度的IgG采用親和層析精提純的方法獲得，洗脫液收集后馬上添加一定緩沖劑進(jìn)行保護(hù)，并將上述緩沖劑保護(hù)的高純度IgG洗脫液進(jìn)行真空濃縮至原體積的40％-50％、經(jīng)過保護(hù)劑的調(diào)配后，簡單噴霧干燥后即可制成微膠囊粉末(即成品的牛初乳免疫球蛋白G制劑)，克服了現(xiàn)有技術(shù)中，需對IgG溶液進(jìn)行徹底濃縮和干燥、制得粉末的程序，節(jié)省了濃縮的能耗和時間，大大節(jié)省了生產(chǎn)成本，并解決了高純度IgG粉末不易制備的問題。4、本專利技術(shù)輔料同時選用緩沖劑和保護(hù)劑(其中保護(hù)劑將牛初乳IgG包裹)，并將該牛初乳免疫球蛋白G制劑制備成微膠囊粉末狀，既能最大化保證制得的牛初乳IgG制劑在運(yùn)輸和儲藏中的穩(wěn)定性，還能在口服給藥后避免受到胃酸和消化酶分解的，克服了現(xiàn)有技術(shù)中高純度IgG溶液不穩(wěn)定的缺陷，可用于治療腹瀉。附圖說明圖1為效果實(shí)施例中正常MA104細(xì)胞(左圖A)和被輪狀病毒感染的MA104細(xì)胞(右圖B)在顯微鏡下的放大圖。圖2為效果實(shí)施例中A組乳鼠在2天后的小腸病理切片。圖3為效果實(shí)施例中B組乳鼠在2天后的小腸病理切片。圖4為效果實(shí)施例中C組乳鼠在2天后的小腸病理切片。圖5為效果實(shí)施例中E組乳鼠在2天后的小腸病理切片。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)做進(jìn)一步的說明，但是此說明不構(gòu)成對本專利技術(shù)的限制。實(shí)施例1(一)采用含有IgG的牛初乳粉末(市售獲得)提純得到高純度的IgG溶液，具體步驟如下：1、將含有IgG的20g牛初乳粉末，用濃度為2mol/L的鹽酸胍溶液溶解，40℃水浴半小時后，于4000rmp離心30min，除去上層雜質(zhì)和脂肪，取中間液體在室溫下用鹽酸調(diào)節(jié)ph到4.6，40℃水浴30min靜置15min后于4000rmp離心30min，去掉沉淀，用吸管收集乳濁液中間的澄清液約150ml；將澄清液用tris堿調(diào)節(jié)ph至7.4，在冰上放置30min。用等體積約200ml的pbs稀釋后，用0.45um過濾器過濾溶液，可得到IgG溶液的粗提純混合物。2、采用親和層析法對上述IgG溶液的粗提純混合物提純：先用純水沖洗柱子5-10個體積，再用0.1mol/L氫氧化鈉2-3個體積沖洗預(yù)裝柱，再用10倍體積的蒸餾水清洗。配制20mm本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，按重量百分比，其組分主要為：牛初乳IgG???????????????????5％?30％，緩沖劑??????????????????????1.0％?8％，保護(hù)劑??????????????????????65％?90％；其中，所述牛初乳IgG的純度為90％或以上。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，按重量百分比，其組分主要為：牛初乳IgG5％-30％，緩沖劑1.0％-8％，保護(hù)劑65％-90％；其中，所述牛初乳IgG的純度為90％或以上。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，所述牛初乳IgG的含量為20％。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，所述緩沖劑為檸檬酸鈉。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，所述保護(hù)劑是由蔗糖、麥芽糖、甘氨酸、半乳糖、麥芽糊精和阿拉伯膠配制而成的組合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，所述蔗糖、麥芽糖、甘氨酸、半乳糖、麥芽糊精和阿拉伯膠的重量比為2：1：1：0.5：0.5：0.6。6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述的用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑，其特征在于，所述用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的劑型為微膠囊粉末。7.權(quán)利要求6所述的用于治療腹瀉的牛初乳免疫球蛋白G制劑的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：1)提純得到高純度IgG溶液后，加入緩沖劑，用堿液調(diào)節(jié)溶液pH值至...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李華，梅亞紅，鄒昌勇，席甘，何衛(wèi)華，蔡勇，黃紅蘭，楊榮閣，孫賓蓮，
申請(專利權(quán))人：湖北華冠中科生物藥業(yè)有限公司，江蘇華冠生物技術(shù)股份有限公司，吉林大學(xué)，中國科學(xué)院武漢病毒研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：湖北;42