本發明專利技術涉及T細胞治療腫瘤的技術領域，具體涉及一種含抗PD?1基因和聚亞精胺的復合物及其在治療腫瘤中的應用；所示復合物包括質量比為1～100：1的聚亞精胺聚合物和抗PD?1基因。所述復合物通過體外轉染到T細胞，制備出自帶分泌抗PD?1抗體?T細胞，能產生PD?1抗體，從而幫助阻斷PD?1信號可有效幫助衰竭T細胞，促進抗腫瘤免疫應答的T細胞治療腫瘤。與現有技術相比，本發明專利技術的分泌抗PD?1抗體?T細胞可有效治療腫瘤，可實現腫瘤的免疫治療，并且，不存在體內毒性的問題。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及腫瘤治療的
，特別涉及一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物及其在治療腫瘤中的應用，具體涉及一種將抗PD-1(programmeddeath-1)基因與聚亞精胺形成的納米復合物通過體外轉染到T細胞，制備自帶分泌抗PD-1抗體-T細胞，能產生PD-1抗體，從而幫助阻斷PD-1信號，可有效幫助衰竭T細胞，促進抗腫瘤免疫應答的T細胞治療腫瘤的方法。
技術介紹
T淋巴細胞靶向殺傷表達這一特異抗原的腫瘤細胞。因其具有靶向殺傷腫瘤細胞的特點，CTL療法已成為腫瘤個體化治療的理想方案,在國際上越來越受到免疫學家們的重視。但是由于PD-1的產生導致T細胞失去活性。為了解決這一難題我們提出了在體外直接將抗PD-1的基因導入體細胞，從而T細胞自身產生抗PD-1的抗體，來提高T細胞的活性，起到治療腫瘤的作用。基因因其獨特的靶點特異性、結構可設計性和代謝安全性，成為科研界普遍看好的新的治療藥物。然而，在過去的20年里，研究人員設計了一系列的載體用于基因的體內輸送，但僅有極少數進入臨床階段，迄今，仍未有一個載體得到FDA認證，一個有效載體的缺位，導致核酸物質體內輸送仍然處于臨床瓶頸期。將核酸物質輸送到靶細胞的胞漿或細胞核內，需要克服一系列的體內輸送屏障，因此，核酸載體是否高效，是其能否用于臨床治療的關鍵所在。核酸物質輸送的載體一般為以下兩類：(1)病毒載體：病毒載體(如慢病毒載體、腺病毒載體)作為基因的輸送載體，雖然有較高的體外轉染活性，然而，其免疫原性與易導致突變的缺點為臨床試驗帶來了巨大的安全問題，使得其應用受限。(2)非病毒載體：非病毒載體的優勢主要在于，在保證預期的轉染活性的條件下，可以大大降低病毒載體所帶來的免疫原性與諸多炎癥反應，其一般為以下兩種載體設計：(a)陽離子脂質體；(b)聚陽離子基因載體。而目前研究更多的主要集中于聚陽離子基因載體與陽離子脂質體的修飾，使之適用于基因物質的靶向輸送。陽離子脂質體具有較高的體內外轉染活性，然而，由于表面的正電荷影響其體內的正常分布，同時，由于選用陽離子脂質，免疫原性與炎癥反應在動物試驗中也成為不可避免的缺點之一(Gao,K.&Huang,L.NonviralmethodsforsiRNAdelivery.Molecularpharmaceutics6,651-658(2008).)。
技術實現思路
針對現有技術中的缺陷，本專利技術的目的在于提供一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物及其在治療腫瘤中的用途。本專利技術的目的是通過以下技術方案實現的：第一方面，本專利技術提供了一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物，所述復合物包括質量比為1～100：1的聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因。優選地，所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為5～50：1。優選地，所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為10～30：1。優選地，所述聚亞精胺聚合物為亞精胺與連接劑形成的聚陽離子聚合物。優選地，所述連接劑為戊二醛、對苯二甲醛、間苯二甲醛、鄰苯二甲醛、2,5-咪唑二甲醛、2,4-吡啶二甲醛、2,5-吡啶二甲醛、2,6-吡啶二甲醛、2,5-噠嗪二甲醛或2,6-噠嗪二甲醛中的一種。第二方面，本專利技術提供了一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物的制備方法，包括以下步驟：所述聚亞精胺聚合物的水溶液和抗PD-1基因的水溶液混合，在室溫靜置20-60分鐘即可制得所述復合物。第三方面，本專利技術提供了一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物的在治療腫瘤中的應用。第四方面，本專利技術提供了一種利用含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物治療腫瘤的方法，包括以下步驟：將所述含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物與T細胞共培養，制備自帶分泌抗PD-1抗體-T細胞，再將自帶分泌抗PD-1抗體-T細胞注射到腫瘤病人體內即可。與現有技術相比，本專利技術具有如下的有益效果：1、本專利技術的分泌抗PD-1抗體-T細胞可有效治療腫瘤，可實現腫瘤的免疫治療，并且，不存在體內毒性的問題。2、本專利技術制備的含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物轉染T細胞治療腫瘤的方法，可實現抗PD-1基因高效低毒的輸送，由于亞精胺是體內專職凝聚基因的功能，從而有效提高轉染效果。附圖說明通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本專利技術的其它特征、目的和優點將會變得更明顯：圖1為本專利技術的復合物的粒徑示意圖；圖2為本專利技術的復合物的zeta電位示意圖；圖3為本專利技術的復合物的透射電鏡示意圖；圖4為本專利技術的復合物的凝膠電泳示意圖；圖5為本專利技術的聚亞精胺聚合物的細胞毒性示意圖；圖6為小鼠腫瘤模型及腫瘤組織切片的示意圖；其中，圖A-D為取下的腫瘤組織，A為生理鹽水組的腫瘤；B為裸DNA組的腫瘤；C為聚亞精胺聚合物(PSAi)組的腫瘤；D為本專利技術的納米復合物組的腫瘤。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本專利技術，但不以任何形式限制本專利技術。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本專利技術構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本專利技術的保護范圍。以下實施例提供了一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物，所述復合物包括質量比為1～100：1的聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因。所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為5～50：1。所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為10～30：1。所述聚亞精胺聚合物為亞精胺與連接劑形成的聚陽離子聚合物。所述連接劑為戊二醛、對苯二甲醛、間苯二甲醛、鄰苯二甲醛、2,5-咪唑二甲醛、2,4-吡啶二甲醛、2,5-吡啶二甲醛、2,6-吡啶二甲醛、2,5-噠嗪二甲醛或2,6-噠嗪二甲醛中的一種。所述含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物的制備方法，包括以下步驟：所述聚亞精胺聚合物的水溶液和抗PD-1基因的水溶液混合，在室溫靜置20-60分鐘即可制得所述復合物。所述含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物的在治療腫瘤中的應用。所述利用含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物治療腫瘤的方法，包括以下步驟：將所述含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物與T細胞共培養，制備自帶分泌抗PD-1抗體-T細胞，再將自帶分泌抗PD-1抗體-T細胞注射到腫瘤病人體內即可。實施例1聚亞精胺聚合物(PSAi)和抗PD-1質粒DNA的形成復合物的制備將聚亞精胺與連接劑2,6-吡啶二甲醛制備的聚亞精胺聚合物配成水溶液，濃度為2μg/μl，用滅菌水稀釋成20ng/μl、40ng/μl、100ng/μl、200ng/μl、1000ng/μl和2000ng/μl溶液。另外將抗PD-1基因質粒DNA配成水溶液，濃度為20ng/μl。將聚亞精胺聚合物水溶液等體積加入至質粒DNA水溶液，渦旋5min，并靜置20min，即得一系列納米復合物的溶液。實施例2聚亞精胺聚合物(PSAi)和抗PD-1質粒DNA的形成復合物的粒徑與電位的表征將實施例1制備的一系列復合物溶液放入BIC90plus粒度電位分析儀的測試槽中，該一系列復合物溶液的復合物中PSAi與質粒DNA的質量比0.25、0.5、2、5、10、50，設置測試溫度為25℃，介質為水，粘度為0.89cp，折射率為1.330，光散射角度為90。，檢測波長為659nm本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種含抗PD?1基因和聚亞精胺的復合物，其特征在于，所述復合物包括質量比為1～100：1的聚亞精胺聚合物和抗PD?1基因。
【技術特征摘要】
1.一種含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物，其特征在于，所述復合物包括質量比為1～100：1的聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因。2.如權利要求1所述的含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物，其特征在于，所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為5～50：1。3.如權利要求2所述的含抗PD-1基因和聚亞精胺的復合物，其特征在于，所述聚亞精胺聚合物和抗PD-1基因的質量比為10～30：1。4.如權利要求1-3任一項所述的含抗PD-1基因和聚陽離子的復合物，其特征在于，所述聚亞精胺聚合物為亞精胺與連接劑形成的聚陽離子聚合物。5.如權利要求4所述的含抗PD-1基因和聚陽離子的復合物，其特征在于，所述連接劑為戊二醛、對苯二甲醛、間苯二甲醛、鄰苯二甲醛、2,5-咪唑二甲醛、2,...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馬孟，
申請(專利權)人：上海云舜生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31
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