抗?EGFRVIII抗體及其用途制造技術(shù)

本申請(qǐng)?zhí)峁┝伺cEGFR的III類(lèi)變體(EGFRvIII)結(jié)合的抗體及其使用方法。根據(jù)某些實(shí)施方式，本申請(qǐng)的抗體以較高的親和性與人EGFRvIII結(jié)合。本申請(qǐng)的抗體可以是全人源抗體。本申請(qǐng)包括與細(xì)胞毒劑、放射性核素或其他不利于細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖的部分綴合的抗?EGFRvIII抗體。本申請(qǐng)的抗體用于治療各種癌癥。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】專(zhuān)利
本專(zhuān)利技術(shù)涉及與人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的缺失突變體(具體地為III型缺失突變體EGFRvIII)特異性結(jié)合的人源抗體和人源抗體的抗原結(jié)合片段，以及使用這些抗體的治療和診斷方法。
技術(shù)介紹
已報(bào)道在多種人類(lèi)腫瘤中存在表皮生長(zhǎng)因子(EGF)受體或EGFR的過(guò)表達(dá)和/或基因擴(kuò)增，包括在乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腦癌和各種鱗癌中的那些(Wong,A.J.等，1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:6899-6903；Harris等，1992,Natl.CancerInst.Monogr.11:181-187)。然而，因?yàn)槎喾N正常組織也表達(dá)這種受體其可能與腫瘤靶點(diǎn)一起被靶向，靶向EGFR的抗腫瘤療法一直存在問(wèn)題。同時(shí)，已經(jīng)報(bào)道了多種具有EGFR基因擴(kuò)增的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤通常含有基因重排(Ekstrand,A.J.等，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4309-4313；WongA.J.等，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:2965-2969)。在一項(xiàng)研究中，發(fā)現(xiàn)在44例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中有17例在EGFR編碼序列中具有一個(gè)或多個(gè)改變并且所有這些病例均含有擴(kuò)增的EGFR，而無(wú)基因擴(kuò)增的22個(gè)病例均未顯示出任何腫瘤特異性序列的異常(Frederick,L.等，2000,CancerRes60:1383-1387)。同一項(xiàng)研究還顯示在個(gè)別腫瘤中能夠檢測(cè)到多種類(lèi)型EGFR的突變。EGFR的III型變體(EGFRvIII)是在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中最常見(jiàn)的EGFR變體(Bigner等，1990,CancerRes50:8017-8022；Humphrey等，1990,ProcNatlAcadSciUSA87:4207-4211；Yamazaki等，1990,JapJCancerRes81:773-779；Ekstrand等，1992,ProcNatlAcadSciUSA89:4309-4313；Wikstrand等，1995,CancerRes55:3140-3148；和Frederick等，2000,CancerRes60:1383-1387)。EGFRvIII的特征為EGFR基因的外顯子2-7缺失，結(jié)果導(dǎo)致編碼區(qū)801個(gè)堿基對(duì)的框架內(nèi)缺失，即缺失6-273個(gè)氨基酸殘基(根據(jù)成熟EGFR的殘基數(shù))，以及在融合連接處產(chǎn)生新的甘氨酸(Humphrey等，1988,CancerRes48:2231-2238；Yamazaki等，1990，如上所述)。已證實(shí)EGFRvIII具有不依賴(lài)于配體、較弱但組成型地活化激酶的活性以及具有增強(qiáng)的致瘤性(Nishikawa等，1994,ProcNatlAcadSciUSA91:7727-7731；和Batra等，1995,CellGrowthandDifferentiation6:1251-1259)。除了膠質(zhì)瘤以外，已在導(dǎo)管和導(dǎo)管內(nèi)乳腺癌(Wikstrand等，1995,CancerRes55:3140-3148)、非小細(xì)胞肺癌(GarciadePalazzo等，1993,CancerRes53:3217-3220)、卵巢癌(Moscatello等，1995,CancerRes55:5536-5539)、前列腺癌(Olapade-Olaopa等，2000,BritishJCancer82:186-194)以及頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(Tinhofer等，2011,ClinCancerRes17(15):5197–5204)中檢測(cè)到了EGFRvIII。而相反的是，這些和其他研究中報(bào)道正常組織不表達(dá)EGFRvIII(GarciadePalazzo等，1993，如上所述；Wikstrand等，1995，如上所述；和Wikstrand等，1998,JNeuroVirol4:148-158)。EGFRvIII高度腫瘤特異性的性質(zhì)使其成為用于治療表達(dá)這種分子的癌癥和腫瘤的特別有用的靶點(diǎn)。人EGFR的核酸和氨基酸序列分別如SEQIDNO：145和146所示，EGFRvIII的氨基酸序列如SEQIDNO：147所示。在例如US5,212,290、US7,736,644、US7,589,180和US7,767,792中對(duì)EGFRvIII的抗體進(jìn)行了描述。專(zhuān)利技術(shù)簡(jiǎn)述本專(zhuān)利技術(shù)提供了與EGFRvIII結(jié)合的抗體及其抗原結(jié)合片段。本專(zhuān)利技術(shù)的抗體是有用的，特別是用于靶向表達(dá)EGFRvIII的腫瘤細(xì)胞。本專(zhuān)利技術(shù)的抗EGFRvIII抗體及其抗原結(jié)合部分可以以未經(jīng)修飾的形式單獨(dú)使用，或者可以作為抗體-藥物綴合物或雙特異性抗體的一部分。本專(zhuān)利技術(shù)的抗體可以是全長(zhǎng)的(例如，IgG1或IgG4抗體)或者可以?xún)H包括抗原結(jié)合部分(例如，F(xiàn)ab、F(ab’)2或scFv片段)，以及可以對(duì)其進(jìn)行修飾以影響其功能，例如以消除殘留的效應(yīng)器功能(Reddy等，2000,J.Immunol.164:1925-1933)。本專(zhuān)利技術(shù)抗EGFRvIII抗體的示例列于本申請(qǐng)中的表1和表2中。表1列出了示例性抗EGFRvIII抗體重鏈可變區(qū)(HCVR)、輕鏈可變區(qū)(LCVR)、重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列標(biāo)識(shí)符。表2列出了示例性抗EGFRvIII抗體HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列標(biāo)識(shí)符。本專(zhuān)利技術(shù)提供了與EGFRvIII特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含HCVR，所述HCVR含有選自表1中列出的任意HCVR氨基酸序列或者與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上相似序列的氨基酸序列。本專(zhuān)利技術(shù)還提供了與EGFRvIII特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含LCVR，所述LCVR含有選自表1中列出的任意LCVR氨基酸序列或者與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上相似序列的氨基酸序列。本專(zhuān)利技術(shù)還提供了與EGFRvIII特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含HCVR和LCVR的氨基酸序列對(duì)(HCVR/LCVR)，所述HCVR和LCVR的氨基酸序列對(duì)含有與表1中列出的任意LCVR氨基酸序列配對(duì)的表1中列出的任意HCVR氨基酸序列。根據(jù)某些實(shí)施方式，本專(zhuān)利技術(shù)提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含在表1中列出的任意示例性抗EGFRvIII抗體中含有的HCVR/LCVR氨基酸序列對(duì)。在某些實(shí)施方式中，所述HCVR/LCVR氨基酸序列對(duì)選自下組：2/20、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122和130/138。本專(zhuān)利技術(shù)還提供了與EGFRvIII特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈CDR1(HCDR1)，所述重鏈CDR1含有選自表1中列出的任意HCDR1氨基酸序列或者與其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上相似序列的序列。本專(zhuān)利技術(shù)還提供了與EGFRvIII特異性結(jié)合的抗本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人EGFRvIII特異性結(jié)合，其中所述抗體或其片段不與(i)SEQ?ID?NO:148所示的連接肽；或(ii)SEQ?ID?NO:165所示的肽結(jié)合。

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專(zhuān)利技術(shù)】2014.03.11 US 61/950,9631.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人EGFRvIII特異性結(jié)合，其中所述抗體或其片段不與(i)SEQIDNO:148所示的連接肽；或(ii)SEQIDNO:165所示的肽結(jié)合。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定法的檢測(cè)所述抗體或其片段針對(duì)人EGFRvIII二聚體顯示出的平衡解離常數(shù)(KD)為約50nM或更小、約20nM或更小、約10nM或更小、約5.0nM或更小、約1.0nM或更小或者約0.5nM或更小。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定法的檢測(cè)所述抗體或其片段對(duì)人EGFR二聚體顯示出的KD是對(duì)EGFRvIII二聚體的至少約4倍、至少約10倍、至少約50倍、至少約100倍、至少約500倍、至少約1000倍、至少約2000倍或者至少約3000倍。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段在由表面等離子體共振測(cè)定法可檢測(cè)的水平上不與EGFR二聚體結(jié)合。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段包含重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，并且其中所述HCVR含有包含在SEQIDNO:34所示的氨基酸序列中的三個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)，HCDR1、HCDR2和HCDR3，和所述LCVR含有包含在SEQIDNO:42所示的氨基酸序列中的三個(gè)CDR，LCDR1、LCDR2和LCDR3。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分別包含SEQIDNO：36、38和40所示的氨基酸序列。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQIDNO：44、46和48所示的氨基酸序列。8.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或其抗原結(jié)合片段與人EGFRvIII特異性結(jié)合，其中所述抗體或其片段是選自下組的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3的組合：SEQIDNO：4/6/8/12/14/16、20/22/24/28/30/32、36/38/40/44/46/48、52/54/56/60/62/64、68/70/72/76/78/80、84/86/88/92/94/96、100/102/104/108/110/112、116/118/120/124/126/128和132/134/136/140/142/144。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述HCVR包含選自下組的氨基酸序列：SEQIDNO：2、18、34、50、66、82、98、114和130。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述LCVR包含選自下組的氨基酸序列：SEQIDNO：10、26、42、58、74、90、106、...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：杰西卡·R·科施娜，道格拉斯·邁克多納德，蓋文·瑟斯頓，喬爾·H·馬丁，法蘭克·德?tīng)柗浦Z，湯瑪士·尼托利，馬庫(kù)斯·凱利，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：瑞澤恩制藥公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：美國(guó);US