治療及檢測癌癥的組合物及方法技術

本發明專利技術涉及治療及檢測癌癥的組合物及方法。本文揭示包含結合至SSEA?4之抗體或其抗原結合片段的醫藥組合物，以及其使用方法。使用方法包括(但不限于)癌癥療法及診斷。本發明專利技術之抗體可結合至某些癌細胞表面。本文所揭示之抗體之例示性標靶可包括癌瘤，諸如腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎癌、子宮頸癌、卵巢癌及/或前列腺癌中之彼等癌瘤。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及治療及檢測癌癥的組合物及方法。本文揭示結合至GloboH、SSEA-3及/或SSEA-4的抗體，以及相關組合物及使用方法。使用方法包括(但不限于)癌癥療法及診斷。
技術介紹
在惡性神經膠質瘤中占60％至70％的多形性膠質母細胞瘤(GBM)為最具侵襲性形式的神經膠質瘤且為成人中最常見的原發性腦腫瘤(1)。盡管許多療法(包括手術及化學療法或放射療法)可用于GBM，但GBM患者的預后及存活率仍不良，其中值存活率為14至15個月(2)。已知GBM對大部分抗癌藥物具有抗藥性且極具浸潤性，從而限制了完全手術切除，且因此大部分患者即使在多種療法之后仍出現腫瘤復發或進展。由于死亡率高，因此已提出新穎的治療方法(諸如免疫療法及基因療法)用于治療GBM(3)。糖基化改變為癌細胞的特征，且若干種聚糖結構為熟知的腫瘤標記(4,5)。此等異常變化包括以下方面的總體增強：N連接型聚糖的分支化(6)及唾液酸含量(7)，及某些聚糖抗原決定基(諸如唾液酸基劉易斯x(sialylLewisx，sLex)、唾液酸基Tn(sTn)、劉易斯y(Ley)、GloboH及聚唾液酸)的過度表達(8-10)。許多腫瘤亦展現某些醣脂(特定而言，神經節苷脂、唾液酸連接至聚糖鏈的鞘醣脂(GSL))的表達增強。神經節苷脂通常在神經系統中觀測到，且發現在腫瘤中提高，尤其與惡性疾病有關的復雜神經節苷脂(11)。已報導人類神經膠質瘤顯示神經節苷脂的表達(12-18)。由于一些神經膠質瘤相關性神經節苷脂在正常組織中極少表達或甚至不存在(19)，因此其適于靶向療法(20)。因此，發現新的神經膠質瘤相關性GSL將為開發針對神經膠質瘤的新療法提供新標靶。紅血球系列中的GSL的特征為Galα1-4Gal鍵聯至乳糖苷基神經酰胺，且此鍵聯由乳糖苷基神經酰胺4-α-半乳糖苷基轉移酶(A4GALT)催化。雖然脂酰鞘胺醇三已糖苷(Gb3Cer)及紅血球糖苷脂(Gb4Cer)構成P血型系統的基礎(21)，但半乳糖苷基紅血球糖苷脂(Gb5Cer)及唾液酸基半乳糖苷基紅血球糖苷脂(唾液酸基Gb5Cer、SGG、MSGG)(分別亦稱為階段特異性胚胎抗原-3(SSEA-3)及SSEA-4)(22)廣泛用作定義人類胚胎干細胞的細胞表面標記。紅血球系列GSL亦已在腫瘤中觀測到，GloboH(海藻糖基Gb5Cer)在許多上皮細胞癌癥中過度表達，諸如卵巢癌、胃癌、前列腺癌、肺癌、乳癌及胰臟癌(23)；SSEA-3、SSEA-4及GloboH不僅表達于乳癌細胞上，而且表達于乳癌干細胞上(24,25)。此外，觀測到SSEA-4及二唾液酸苷基半乳糖苷基紅血球糖苷脂(二唾液酸苷基Gb5Cer，DSGG)在腎細胞癌中的大量表達(26)，但紅血球系列GSL是否表達于GBM上仍未知。極感興趣的是鑒別與癌癥有關及/或預測癌癥的聚糖標記，及開發針對此等標記的用于診斷及治療廣泛范圍的癌癥的抗體。
技術實現思路
本專利技術是基于如下發現：多形性膠質母細胞瘤(GBM)及其干細胞上存在多種聚糖標記。其中，GD2、GM2、GM1、GD1a、GT1b、A2B5、Tf、Tn、GloboH、SSEA3、SSEA4、CD24、CD44及CD90受到高度表達。一個驚人的發現為，表達于GBM及許多其他類型的癌癥上、但不表達于正常細胞上的SSEA-4可充當開發治療性抗體及疫苗的標靶。本文所揭示的方法包括利用電池表面標記GD2、SSEA4及CD133及可使干細胞與其他細胞分離的流式細胞術使干細胞自GBM腫瘤細胞分離、富集及自行再生的方法。本文揭示包含分離的GD2+SSEA4+CD133+GBM干細胞群的組合物。本專利技術亦基于如下發現：GloboH、SSEA-3及SSEA-4異常表達于廣泛范圍的癌癥中，但不表達于正常細胞上。表達GloboH、SSEA-3及SSEA-4的癌癥細胞包括(但不限于)腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎癌、子宮頸癌、卵巢癌及前列腺癌。三重靶向GloboH、SSEA-3及SSEA-4的抗體、雙重靶向GloboH及SSEA-3的抗體，及抗SSEA-4抗體已開發且揭示于本文中。本專利技術的抗體可用于治療、診斷或用作研究工具。抗體可靶向的細胞包括癌瘤，諸如腦癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、膽管癌、胰臟癌、結腸癌、腎癌、子宮頸癌、卵巢癌、前列腺癌中的那些細胞。因此，本專利技術的一態樣提供三重靶向GloboH、SSEA3及SSEA-4的分離抗體。三重靶向抗體特異性結合至Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(GloboH六醣)及Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-3五醣)及Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-4六醣)。在一個實例中，三重靶向抗體為mAb651。本專利技術的另一態樣提供雙重靶向GloboH及SSEA3的分離抗體。雙重靶向抗體特異性結合至Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(GloboH六醣)及Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-3五醣)。在一個實例中，雙重靶向抗體為mAb273。在又一態樣中，本專利技術提供對SSEA-4具有特異性的分離抗體。抗SSEA-4抗體結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-4六醣)。在一些實例中，抗體能夠結合Neu5Gcα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-4六醣的類似物)。優選地，抗體不為小鼠IgG3(例如mAbMC-831-70)，且抗體不為小鼠IgM(例如抗RM1)。抗體的實例包括(但不限于)mAb45及48。本專利技術的另一態樣提供對SSEA-4具有特異性的分離抗體及其片段。抗SSEA-4抗體結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-4六醣)及Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1(SSEA-4六醣的片段)。在一些實例中，抗體能夠結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galβ1。在一些實例中，抗體能夠結合至Neu5Gcα2→3Galβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA-4六醣的類似物)。在一個實例中，抗體為mAb46。在一個態樣中，本專利技術提供分離抗體或其抗原結合片段，包含如表I(圖16)中所列、分別選自(i)至(iii)的H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3：(i)選自SEQIDNO:52或SEQIDNO:56的H-CDR1；(ii)選自SEQIDNO:54或SEQIDNO:58的H-CDR2；(iii)選自SEQIDNO:60或SEQIDNO:63的H-CDR3；且包含分別選自(iv)至(vi)的L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3：(iv)選自SEQIDNO:66或SEQIDNO:70的L-CDR1；(v)選自SE本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種經分離的單株抗體，其特異性結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.01.16 US 61/928,1321.一種經分離的單株抗體，其特異性結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1。2.如權利要求1的分離抗體，其進一步結合至Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1及Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1。3.如權利要求1或2的分離抗體，其中所述抗體為IgG或IgM。4.一種經分離的單株抗體，其特異性結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1，其中所述抗體不為小鼠IgG3，且其中所述抗體不為小鼠IgM。5.如權利要求4的分離抗體，其進一步結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1。6.如權利要求4的分離抗體，其進一步結合至Neu5Acα2-8→Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1。7.如權利要求4或5的分離抗體，其中所述抗體為IgG1。8.一種經分離的單株抗體，其特異性結合至Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1、Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1、Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1、Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1、GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1及Neu5Acα2-8→Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1。9.如權利要求8的分離抗體，其中所述抗體為IgG或IgM。10.如權利要求1至9中任一項的分離抗體，其中所述抗體為全長抗體或其抗原結合片段。11.如權利要求10的分離抗體，其中所述抗原結合片段為Fab片段、F(ab')2片段，或單鏈Fv片段。12.如權利要求1至9中任一項的分離抗體，其中所述抗體為人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。13.一種分離抗體或其抗原結合片段，包含分別選自(i)至(iii)、如表I(圖16)中所列的H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3：(i)選自SEQIDNO:52或SEQIDNO:56的H-CDR1；(ii)選自SEQIDNO:54或SEQIDNO:58的H-CDR2；(iii)選自SEQIDNO:60或SEQIDNO:63的H-CDR3；且包含分別選自(iv)至(vi)的L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3：(iv)選自SEQIDNO:66或SEQIDNO:70的L-CDR1；(v)選自SEQIDNO:68或SEQIDNO:72的L-CDR2；及(vi)選自SEQIDNO:74或SEQIDNO:77的L-CDR3。14.如權利要求13的分離抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或所述抗原結合片段進一步包含分別選自(i)至(iv)、如表I(圖16)中所列的H-FR1、H-FR2、H-FR3及HFR4：(i)選自SEQIDNO:51或SEQIDNO:55的H-FR1；(ii)選自SEQIDNO:53或SEQIDNO:57的H-FR2；(iii)選自SEQIDNO:59或SEQIDNO:62的H-FR3；(iv)選自SEQIDNO:61或SEQIDNO:64的H-FR4；且包含分別選自(v)至(viii)的L-FR1、L-FR2、L-FR3及L-FR4：(v)選自SEQIDNO:65或SEQIDNO:69的L-FR1；(vi)選自SEQIDNO:67或SEQIDNO:71的L-FR2；(vii)選自SEQIDNO:73或SEQIDNO:76的L-FR3；(viii)選自SEQIDNO:75或SEQIDNO:78的L-FR4。15.如權利要求13或14的分離抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或所述抗原結合片段視情況或替代地改包含與SEQIDNO:51至78中的任一者的氨基酸序列的差別少于三個保守性氨基酸取代的氨基酸序列。16.一種經分離的抗SSEA4人類化抗體或其抗原結合片段，包含分別選自(i)至(iii)、如表II(圖16)中所列的H-CDR1、HCDR2及H-CDR3：(i)具有SEQIDNO:80的序列的H-CDR1；(ii)具有SEQIDNO:82的序列的H-CDR2；(iii)具有SEQIDNO:90的序列的H-CDR3；且包含分別選自(iv)至(vi)的L-CDR1、L-CDR2及L-CDR3：(iv)具有SEQIDNO:99的序列的L-CDR1；(v)具有SEQIDNO:101的序列的L-CDR2；及(vi)具有SEQIDNO:109的序列的L-CDR3。17.如權利要求16的分離抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或所述抗原結合片段進一步包含分別選自(i)至(iv)、如表I(圖16)中所列的H-FR1、H-FR2、H-FR3及HFR4：(i)選自SEQIDNO:79、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85或SEQIDNO:87的H-FR1；(ii...

【專利技術屬性】
技術研發人員：翁啟惠，羅翊偉，林志偉，葉士齊，徐翠玲，吳宗益，吳漢忠，
申請(專利權)人：中央研究院，
類型：發明
國別省市：中國臺灣;71