復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立及其活性成分定量分析方法技術

本發明專利技術公開了復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：對照品溶液的制備、供試品溶液的制備、色譜條件檢測、建立指紋圖譜。本發明專利技術還公開了復方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法，其特征在于包括如下步驟：步驟一、選取多組處方量復方血脂寧，分別制備血脂寧水提取物以及血脂寧β?環糊精提取物；步驟二、分別建立所述血脂寧水提取物以及所述血脂寧β?環糊精提取物的指紋圖譜，確定34個共有指紋峰；步驟三、對所述共有指紋峰進行藥材歸屬以及對所述共有峰進行成分確定，在確定的成分中選取多個活性指標成分，建立復方血脂寧多指標成分定量分析方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及中藥制劑質量控制領域，具體涉及基于復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立及其活性成分定量分析方法。
技術介紹
中藥復方血脂寧收載于2010年版《中華人民共和國藥典》一部中，由決明子、制首烏、荷葉、山楂四味中藥組成，具有活血行氣，化瘀降脂之功效，適用于血脈瘀滯所致高脂血癥。環糊精(Cyclodextrin，簡稱CD)及其衍生物是近年來發展較快的新型藥用材料，具有生物毒性低、水溶性好的特點。β-環糊精(β-CD)是淀粉經葡萄糖糖基轉移酶發酵后得到的α-1,4-葡萄糖苷鍵連接的環狀低聚物，其包含7個吡喃葡萄糖單元。具有內疏水、外親水的特殊分子結構，能與多種“客體”藥物形成包含物，從而可以增加藥物的溶解度、穩定性并提高生物利用度。國內學者利用環糊精水溶液對金銀花、銀杏、廣棗、虎杖等藥材進行提取，發現環糊精對黃酮類，蒽醌類等成分具有增加提取率、改善溶出速率的作用，提示環糊精對藥物分子具有選擇包合作用，可提高中藥活性成分的提取率。中藥指紋圖譜技術譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，通過現代信息技術和質量分析手段能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數量，進而對藥品質量進行整體描述和評價，基于中藥指紋圖譜并結合多指標成分定量分析的中藥質量控制模式是以傳統中醫藥理論為基礎，體現了中醫藥整體治療的特色，突出了指標性成分的作用，同時兼顧了微量成分和多成分融合調節作用的傳統中醫藥理論，其在指紋圖譜的基礎上賦予指紋圖譜定性、定量信息，對指紋圖譜中多個目標成分尤其是有效成分進行準確定量分析，使得中藥質量控制更加準確、真實反映中藥的質量狀況，使產品的組成更加清晰、產品的質量和穩定性更加可靠[。復方血脂寧中存在大量的其他有效成分，而這些有效成分對于血脂寧的質量控制也是有重要意義的，因此，需要構建復方血脂寧指紋圖譜，以全面地反映中藥復方血脂寧所含有的化學有效成分，更好的控制復方血脂寧的藥品品質，并且通過復方血脂寧的指紋圖譜去進行多指標活性成分定量分析對于復方血脂寧提取物的質量控制也具有重要意義。
技術實現思路
本專利技術設計開發了復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立，本專利技術的專利技術目的是通過建立復方血脂寧高效液相指紋圖譜，能夠為中藥復方血脂寧的鑒別和質量控制提供可靠依據。本專利技術還設計開發了復方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法，本專利技術的專利技術目的在于基于指紋圖譜選取活性成分作為定量指標，建立復方血脂寧提取物活性成分定量分析方法。本專利技術提供的技術方案為：復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜法，包括如下步驟：取二苯乙烯苷對照品，加甲醇溶解，定容，作為供試品溶液；按照復方血脂寧處方量稱取藥材，用水或者β-環糊精水溶液提取，定容，作為供試品溶液；采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以體積分數100％甲醇為A相，體積分數0.1％甲酸為B相，組成流動相，采用梯度洗脫，柱溫為45℃，檢測波長為280nm，流速為0.2mL/min，分析時間為40min；采用進樣量為3μL注入高效液相色譜儀，得到所述指紋圖譜。優選的是，所述梯度洗脫的洗脫程序如下：0分鐘時，流動相A為10％的甲醇溶液，流動相B為90％的甲酸溶液；2分鐘時，流動相A為25％的甲醇溶液，流動相B為75％的甲酸溶液；9分鐘時，流動相A為35％的甲醇溶液，流動相B為65％的甲酸溶液；12分鐘時，流動相A為40％的甲醇溶液，流動相B為60％的甲酸溶液；40分鐘時，流動相A為90％的甲醇溶液，流動相B為10％的甲酸溶液；所述柱溫為45℃；所述流速：0.2mL/min；所述進樣量：3μL。優選的是，用水提取復方血脂寧物制備工藝包括：按照處方量復方血脂寧分別稱取決明子3g，制首烏2g，荷葉1.5g，山楂1g，加入25倍量水，浸泡1小時，提取3次，每次2小時，提取液過濾后合并，得到復方血脂寧水提取供試液。優選的是，用β-環糊精提取血脂寧物制備工藝包括：按照處方量復方血脂寧分別稱取決明子3g，制首烏2g，荷葉1.5g，山楂1g，加入占藥材量5％β-環糊精，25倍量水，浸泡1小時，提取3次，每次2小時，提取液過濾后合并，得到所述復方血脂寧β-環糊精提取供試液。優選的是，所述指紋圖譜包括34個共有指紋峰，相對保留時間分別為：1號峰：0.52；2號峰：0.57；3號峰：0.61；4號峰：0.66；5號峰：0.89；6號峰：0.97；7號峰：1.00；8號峰：1.03；9號峰：1.13；10號峰：1.22；11號峰：1.26；12號峰：1.32；13號峰：1.35；14號峰：1.37；15號峰：1.46；16號峰：1.65；17號峰：1.68；18號峰：1.80；19號峰：1.83；20號峰：1.86；21號峰：1.88；22號峰：1.91；23號峰：2.06；24號峰：2.16；25號峰：2.21；26號峰：2.50；27號峰：2.67；28號峰：2.78；29號峰：2.87；30號峰：2.92；31號峰：2.96；32號峰：3.26；33號峰：3.53；34號峰：3.69。復方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法，包括：選取多組處方量復方血脂寧，分別制備血脂寧水提取物以及血脂寧β-環糊精提取物，根據得到所述血脂寧水提取物以及所述血脂寧β-環糊精提取物的指紋圖譜，確定34個共有指紋峰，對所述共有指紋峰進行藥材歸屬以及對所述共有峰進行成分確定，在確定的成分中選取多個活性指標成分，建立復方血脂寧多指標成分定量分析方法；其中，所述活性指標成分包括荷葉堿、二苯乙烯苷、紅鐮霉素-6-O-β-D-龍膽二糖苷、槲皮素、橙黃決明素、大黃素。優選的是，建立復方血脂寧多指標成分定量分析方法包括如下步驟：取荷葉堿、二苯乙烯苷、紅鐮霉素-龍膽二糖苷、槲皮素、橙黃決明素、大黃素對照品，加甲醇溶解并定容，作為對照品溶液；量取血脂寧提取物，加甲醇定容，搖勻，超聲，離心，上清液經濾膜過濾，收集續濾液，作為供試品溶液；采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以體積分數100％甲醇為A相，體積分數0.1％甲酸為B相，組成流動相，采用梯度洗脫，柱溫為40℃～50℃，檢測波長為254nm～320nm，流速為0.2mL/min，分析時間為40min。優選的是，采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以體積分數100％甲醇為A相，體積分數0.1％甲酸為B相，組成流動相，采用梯度洗脫，柱溫為45℃，檢測波長為254nm、280nm、320nm，流速為0.2mL/min，分析時間為40min，進樣量為3μL；以及所述梯度洗脫的洗脫程序如下：0分鐘時，流動相A為10％的甲醇溶液，流動相B為90％的甲酸溶液；2分鐘時，流動相A為25％的甲醇溶液，流動相B為75％的甲酸溶液；9分鐘時，流動相A為35％的甲醇溶液，流動相B為65％的甲酸溶液；12分鐘時，流動相A為40％的甲醇溶液，流動相B為60％的甲酸溶液；40分鐘時，流動相A為90％的甲醇溶液，流動相B為10％的甲酸溶液。優選的是，所述血脂寧水提取物制備工藝包括：按照處方量復方血脂寧分別稱取決明子3g，制首烏2g，荷葉1.5g，山楂1g，加入25倍量水，浸泡1小時，提取3次，每次2小時，提取液過濾后合并，得到所述血脂寧水提取物；所述血脂寧β-環糊精提取物制備工藝包括：按本文檔來自技高網...

【技術保護點】
復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，包括如下步驟：取二苯乙烯苷對照品，加甲醇溶解，定容，作為供試品溶液；按照復方血脂寧處方量稱取藥材，用水或者β?環糊精水溶液提取，定容，作為供試品溶液；采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以體積分數100％甲醇為A相，體積分數0.1％甲酸為B相，組成流動相，采用梯度洗脫，柱溫為45℃，檢測波長為280nm，流速為0.2mL/min，分析時間為40min；采用進樣量為3μL注入高效液相色譜儀，得到所述指紋圖譜。

【技術特征摘要】
1.復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，包括如下步驟：取二苯乙烯苷對照品，加甲醇溶解，定容，作為供試品溶液；按照復方血脂寧處方量稱取藥材，用水或者β-環糊精水溶液提取，定容，作為供試品溶液；采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以體積分數100％甲醇為A相，體積分數0.1％甲酸為B相，組成流動相，采用梯度洗脫，柱溫為45℃，檢測波長為280nm，流速為0.2mL/min，分析時間為40min；采用進樣量為3μL注入高效液相色譜儀，得到所述指紋圖譜。2.如權利要求1所述的復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脫的洗脫程序如下：0分鐘時，流動相A為10％的甲醇溶液，流動相B為90％的甲酸溶液；2分鐘時，流動相A為25％的甲醇溶液，流動相B為75％的甲酸溶液；9分鐘時，流動相A為35％的甲醇溶液，流動相B為65％的甲酸溶液；12分鐘時，流動相A為40％的甲醇溶液，流動相B為60％的甲酸溶液；40分鐘時，流動相A為90％的甲醇溶液，流動相B為10％的甲酸溶液；所述柱溫為45℃；所述流速：0.2mL/min；所述進樣量：3μL。3.如權利要求1或2所述的復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于，用水提取復方血脂寧物制備工藝包括：按照處方量復方血脂寧分別稱取決明子3g，制首烏2g，荷葉1.5g，山楂1g，加入25倍量水，浸泡1小時，提取3次，每次2小時，提取液過濾后合并，得到復方血脂寧水提取供試液。4.如權利要求3所述的復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于，用β-環糊精提取血脂寧物制備工藝包括：按照處方量復方血脂寧分別稱取決明子3g，制首烏2g，荷葉1.5g，山楂1g，加入占藥材量5％β-環糊精，25倍量水，浸泡1小時，提取3次，每次2小時，提取液過濾后合并，得到所述復方血脂寧β-環糊精提取供試液。5.如權利要求1、2或4所述的復方血脂寧提取物指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述指紋圖譜包括34個共有指紋峰，相對保留時間分別為：1號峰：0.52；2號峰：0.57；3號峰：0.61；4號峰：0.66；5號峰：0.89；6號峰：0.97；7號峰：1.00；8號峰：1.03；9號峰：1.13；10號峰：1.22；11號峰：1.26；12號峰：1.32；13號峰：1.35；14號峰：1.37；15號峰：1.46；16號峰：1.65；17號峰：1.68；18號峰：1.80；19號峰：1.83；20號峰：1.86；21號峰：1.88；22號峰：1.91；23號峰：2.06；24號峰：2.16；25號峰：2.21；26號峰：2.50；27號峰：2.67；28號峰：2.78；29號峰：2.87；30號峰：2.92；31號峰：2.96；32號峰：3.26；33號峰：3.53；34號峰：3.69。6.復方血脂寧提取物的活性成分定量分析方法，其特征在于，包括：選取多組處方量復方血脂寧，分別制備血脂寧水提取物以及血脂寧β-環糊精提取物，根據得到所述血脂...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張慧杰，任曉亮，王萌，孫立麗，劉亞男，邱喜龍，戚愛棣，
申請(專利權)人：天津中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：天津;12