一種檢測Axenfeld-Rieger綜合征的診斷制品制造技術

本發明專利技術的目的是提供一種MMRN1基因在制備檢測Axenfeld-Rieger綜合征診斷制品中的應用，本發明專利技術提供了MMRN1基因的新的用途，從而提供了一種有效的進行先天性Axenfeld-Rieger綜合征疾病基因診斷、產前基因篩查及遺傳咨詢的途徑，應用效果表明本發明專利技術所提供的基因的SNP位點及檢測引物可以有效的用于臨床患者及胎兒絨毛或羊水進行MMRN1基因突變位點的的快速檢測。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于基因診斷制品制備
，具體涉及一種檢測Axenfeld-Rieger綜合征的診斷制品。專利技術背景Axenfeld-Rieger綜合征是指雙眼發育性缺陷，伴有或不伴有全身發育異常的一組發育性疾病，其特點是：雙眼發育缺陷；可伴有全身發育異常；繼發性青光眼；常染色體顯性遺傳，多有家族史，也有散發病例的報道；男女發病相同。目前尚無有效的治療措施，手術預后差。Axenfeld-Rieger綜合征的臨床特點為：①角膜后胚胎環的存在：是本病的典型特征，其表現為Schwalbe線的增厚突出和前移。②虹膜角膜角異常：其主要的特點是粗大的組織條帶自周邊虹膜跨越房角隱窩，與突出的Schwalbe線相連接而房角是開放的，但虹膜根部附著高位，鞏膜嵴往往被掩蓋，虹膜根部附于小梁網后面。③虹膜異常：主要表現為虹膜變薄、失去正常紋理、色素上皮層外翻、瞳孔變形多瞳孔和瞳孔膜閉等。④可伴有全身異常：主要為牙齒和面部發育缺陷；如牙齒缺損小牙、無牙；面中部扁平、上頜骨發育不全此外還可有其他全身異常。⑤繼發性青光眼：50％以上的患者有繼發性青光眼，以兒童期和青年期發病多見，但也有在嬰幼兒期或中年期發病者。⑥雙眼發病：絕大多數是雙眼發病，極個別為單眼發病。⑦無性別差異。⑧本病有家族史。Axenfeld-Rieger綜合征的病因病理尚不清楚，目前世界上研究較少。國內外的遺傳學研究結果表明該病多為常染色體顯性遺傳，也有散發病例的報道。迄今為止，科學家們已經定位了3個Axenfeld-Rieger綜合征疾病基因的位點，并克隆出了2個致病基因(詳見表1)。表1：Axenfeld-Rieger綜合征致病基因定位及克隆情況致病基因染色體定位PITX24q25FOXC16p25.3?13q14但已知基因僅能解釋一小部分的患者的發病，這已經成為Axenfeld-Rieger綜合征的發病機制的研究以及針對病因的診斷和治療研究的瓶頸。這種現狀促使進一步去發現和了解該病新的致病基因，為后續的基因診斷、產前診斷及基因治療提供基礎。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種檢測Axenfeld-Rieger綜合征的診斷制品，即從多聚蛋白1(MMRN1)上設計分子標記來檢測Axenfeld-Rieger綜合征，從而彌補現有技術的不足。申請人從一個4代呈常染色體顯性遺傳的Axenfeld-Rieger綜合征家系中，對該家系全部成員進行了全基因組連鎖分析，確定該家系的多聚蛋白1(MMRN1)存在遺傳上的致病突變，并在后續工作中驗證了MMRN1與Axenfeld-Rieger綜合征的關系，從而促成了本專利技術。本專利技術首先提供MMRN1基因新的用途，即在制備用于檢測Axenfeld-Rieger綜合征診斷制品中的應用；上述的診斷制品，作為實施例的優選，是檢測Axenfeld-Rieger綜合征的引物或探針。本專利技術還提供一種用于檢測Axenfeld-Rieger綜合征的引物對，所述的引物對的上下游引物序列為SEQ?ID?NO:1-24中，其引物信息如下：本專利技術還提供一種與Axenfeld-Rieger綜合征疾病相關的SNP位點為MMRN1基因編碼區域由起始密碼子起第1952位，其堿基為C或A；其中用于檢測上述SNP位點的引物信息如下：MMRN1-E6-2F：GCTTTTATCAACTGAACAGG?SEQ?ID?NO:13MMRN1-E6-2R：TTCCATATCGGAGGTACATT?SEQ?ID?NO:14。本專利技術還提供另外一種與Axenfeld-Rieger綜合征疾病相關的SNP位點為MMRN1基因編碼區域由起始密碼子起第1157位，其堿基為T或A；其中用于檢測上述SNP位點的引物信息如下：MMRN1-E6-1F：TGTTCTGCAAGTGATATCTC?SEQ?ID?NO:11MMRN1-E6-1R：GTACTCAGTGACATTATTGC?SEQ?ID?NO:12本專利技術還提供一種用于檢測Axenfeld-Rieger綜合征的試劑盒，包含有上述的引物對中的任一種或幾種。本專利技術提供了MMRN1基因的新的用途，從而提供了一種有效的進行Axenfeld-Rieger綜合征疾病基因診斷、產前基因篩查及遺傳咨詢的途徑，應用效果表明本專利技術所提供的基因的SNP位點及檢測引物可以有效的用于臨床患者及胎兒絨毛或羊水進行MMRN1基因突變位點的的快速檢測。附圖說明圖1：實施例1的Axenfeld-Rieger綜合征家系內患者及正常人MMRN1測序圖，其中A：患者；B：家系中正常人。該家系中五名患者MMRN1基因編碼區域由起始密碼子起第1952位發生了雜合突變，其堿基由C為突變為A。圖2：實施例2的Axenfeld-Rieger綜合征患者及其母親MMRN1測序圖，其中A：患者；B：母親。該患者MMRN1基因編碼區域由起始密碼子起第1157位發生了雜合突變，其堿基由T為突變為A。具體實施方式MMRN1基因位于Chr?4:90.8–90.88Mb，可轉錄成大約3687bp的mRNA(NCBI登錄號為NM_007351.2)，直接翻譯形成1228個氨基酸組成的蛋白質。下面結合實施例對本專利技術進行詳細的描述。實施例1：從Axenfeld-Rieger綜合征家系中篩選MMRN1基因的突變位點1、提取外周血基因組DNA：在符合國家相關政策規定，并在取樣對象同意的基礎上，抽取第一個Axenfeld-Rieger綜合征家系成員外周靜脈血2-5ml，放入EDTA抗凝管內，-80℃凍存備用；凍存的EDTA抗凝血在室溫融化后，取500μL放于離心管，加入等體積TE(pH8.0)，混勻，4℃，10000rpm離心10分鐘，棄上清。加入180μL?TE、20μLSDS(10％)、8μL蛋白酶K(l0mg/ml)混勻，置于37℃水浴過夜。從水浴中取出樣品，瞬時離心沉淀樣本。在反應管中加入等體積的Tris-飽和酚(約300μL)，充分混勻，室溫下10000rpm離心10分鐘，吸取上清液(約300μL)至一新離心管中。重復酚抽提一次，吸取上清液至一新離心管中。加入等體積的Tris飽和酚:氯仿混合液(酚、氯仿各150μL)，混勻，室溫10000rpm離心10分鐘，轉移上清液至一新離心管。加入等體積的Tris飽和酚:氯仿:異戊醇混合液(酚、氯仿、異戊醇各10本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種MMRN1基因的用途，其特征在于，所述的用途是制備用于檢測Axenfeld?Rieger綜合征診斷制品中的應用。

【技術特征摘要】
1.一種MMRN1基因的用途，其特征在于，所述的用途是制備用于檢測
Axenfeld-Rieger綜合征診斷制品中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的診斷制品為PCR檢測
引物或探針。
3.一種用于檢測Axenfeld-Rieger綜合征的引物對，其特征在于，所述的
引物對的信息如下：
4.一種用于檢測Axenfeld-Rieger綜合征的試劑盒，其特征在于，所述的試
劑盒包含有權利要求3所述的引物對中的任一種或幾種。
5.一種與Axenfeld-Rieger綜合征疾病相關的SNP位點，其特征在于，所
述的SNP位點...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳鵬，謝立信，孫大鵬，李素霞，張陽陽，
申請(專利權)人：山東省眼科研究所，
類型：發明
國別省市：山東;37