本發明專利技術涉及蝴蝶蘭種苗繁育技術領域，具體涉及一種蝴蝶蘭脫毒快繁方法。本發明專利技術通過摸索初代培養，莖尖伸長培養，脫毒培養，壯苗、生根培養，獲得一套利用物理方法結合化學試劑進行二次蝴蝶蘭脫毒的方法及快繁途徑。創新點在于摸索出莖尖伸長培養的方法、生長點切取大小結合化學試劑提高成活率及脫毒率、二次脫毒提高脫毒率的方法，建立了蝴蝶蘭脫毒及快繁途徑。該方法具有成活率、脫毒率高的優點，成活率達80.13％，脫毒率達92.67％，具有很好的技術效果和推廣前景。
【技術實現步驟摘要】
(一)
：本專利技術涉及蝴蝶蘭種苗繁育
，具體涉及一種蝴蝶蘭脫毒快繁方法。(二)
技術介紹
：蝴蝶蘭(Phalaenopsisspp)屬熱帶或亞熱帶的氣生蘭，又稱蝶蘭，因其姿態優美、色澤艷麗、花期持久，素有“蘭花皇后”之美稱,是室內綠化美化重要的觀賞花卉,國內外市場對其需求量大。蝴蝶蘭的病毒病是當今困擾蘭界的一大難題。目前，在蝴蝶蘭上分離到的病毒超過25種，其中危害最重、分布最廣的是建蘭花葉病毒(Cymbidiummosaicvirus，CyMV)和齒蘭環斑病毒(Odontoglossumringspotvirus，ORSV)。感病植株主要造成花葉、壞死、畸形、花瓣變形等癥狀,導致植株生長不良，花小而少,花期縮短,嚴重影響其觀賞價值和經濟價值。而國內關于蝴蝶蘭脫毒的研究中成活率不高于30％，脫毒率不高于80％，因此，研究一種成活率高、脫毒效果好，操作簡便的方法有著重要的現實意義。(三)
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種蝴蝶蘭脫毒及快繁技術，它包括以下幾個步驟：1)材料的選擇及初代培養：選用生長健壯、開花3-5朵、經檢測后攜帶病毒的蝴蝶蘭開花株，切取花梗，3-5cm一節，每節包含1-2個飽滿腋芽，在超凈工作臺上用75％的酒精表面消毒30-40s，再用用0.1％的HgCl2震蕩消毒8-10min，無菌水沖洗3-5次，用尖頭鑷剝去腋芽苞葉，再0.1％的HgCl2震蕩消毒2-3min，用無菌水沖洗5-8次，切除受HgCl2毒害的兩端，接種于50mL誘導培養基上先暗培養7-10天，后轉入光照培養2-3個月，待兩片真葉展開形成叢生芽即可；所述的誘導培養基為1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4-5.8；光照培養時，培養條件為：溫度25±2℃，光照強度為1500～2000lx，光照時長8-10小時/天；2)莖尖伸長培養：將步驟1)所誘導出的展葉的叢生芽轉入50ml促莖尖伸長培養基，培養40-60天，待第三片或第四片葉成熟即可，得幼苗；促莖尖伸長培養基為：1/3MS+GA31～2mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0～6.5g/L，pH5.4～5.8；培養條件為：溫度25±2℃，光照強度為1500～2000lx，光照時長8～10小時/天；3)第一次脫毒培養：將步驟2)獲得的幼苗，置于10X的冷光源解剖鏡下用解剖針剝取一個微凸、穹形、發亮的生長點，迅速切下置于30mL脫毒培養基表面，進行暗培養7-15天后轉入光培養2-3個月，中間可進行1-2次轉接，防褐化死亡，每瓶培養基可接種3-5個含生長點的莖尖，莖尖切取大小為1-2mm，留取1個葉原基；脫毒培養基為：1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5％氨基寡糖素0.2-0.3mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4～5.8；培養條件為：溫度25±2℃，光照強度為1000～1500lx，光照時長8～10小時/天；4)第二次脫毒培養：將步驟3)獲得的脫毒莖尖，待其長出1或2片成熟小葉后，進行二次脫毒培養，10X冷光源解剖鏡下剝取1-2mm大小生長點后，迅速接于30mL脫毒培養基表面，每瓶培養基接種3-5含生長點的莖尖，進行暗培養7-15天后轉入光照培養2-3個月，每月進行一次轉接，更換培養基，防止褐化死亡。脫毒培養基為：1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5％氨基寡糖素0.2mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4～5.8；培養條件為：溫度25±2℃，光照強度為1000～1500lx，光照時長8～10小時/天；5)脫毒苗的增殖培養：將步驟4)獲得的脫毒苗，檢測后進行增殖培養，切除葉片及褐化部分接于盛100mL培養基的蘭花瓶，每瓶接種5株(待數量增大以后，視生產情況可增至21-35株/瓶)；培養2-3個月后，生長健壯，增殖系數達2-4，即得脫毒分化苗；增殖培養基為：1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+腺嘌呤3-5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4～5.8；培養條件同1)。6)脫毒苗的壯苗培養：待步驟5)獲得的脫毒分化苗長至株高2-3cm，兩葉一心后轉入盛120mL壯苗培養基的蘭花瓶后進行壯苗培養，每瓶轉接16株；培養45-60天后，株高達3-5cm，兩葉一心壯苗完成。壯苗培養基為：1/2MS+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4～5.8。培養條件:溫度25±2℃，光照強度為1500～2000lx，光照時長8～10小時/天；7)脫毒苗的生根培養：將步驟6)獲得的壯苗后植株，接于150mL生根培養基的蘭花瓶中進行生根培養，每瓶轉接11-13株；培養3-4個月后，待植株長至3-4片葉，根系達3條以上，健壯有活力，即可移入溫室馴化移栽。生根培養基：1/2MS+NAA1.0mg/L+香蕉30g/L+土豆40g/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4～5.8。培養條件:溫度25±2℃，光照強度為1500～2000lx，光照時長8～10小時/天。本專利技術通過摸索初代培養，莖尖伸長培養，脫毒培養，壯苗、生根培養，獲得一套利用物理方法結合化學試劑進行二次蝴蝶蘭脫毒的方法及快繁途徑。創新點在于摸索出莖尖伸長培養的方法、生長點切取大小結合化學試劑提高成活率及脫毒率、二次脫毒提高脫毒率的方法，建立了蝴蝶蘭脫毒及快繁途徑。該方法具有成活率、脫毒率高的優點，成活率達80.13％，脫毒率達92.67％，具有很好的技術效果和推廣前景。具體實施方式實施例1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術，具體步驟如下：第一、選用生長健壯、開花3-5朵、經檢測后攜帶病毒的的蝴蝶蘭開花株，切取花梗截段3cm/節，每節1個飽滿腋芽。75％的酒精表面消毒30s，0.1％的HgCl2震蕩消毒8min(外植體表面震蕩后無氣泡為止)，無菌水沖洗3次，用尖頭鑷剝去腋芽苞葉，再0.1％的HgCl2震蕩消毒3min，用無菌水沖洗5次，切除受HgCl2毒害的兩端，接種于誘導培養基上進行誘導培養。第二、將展葉的叢生芽，分株接于促莖尖伸長培養基，培養45天后，第三片葉成熟。促莖尖伸長培養基為：1/3MS+GA31.0mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4-5.8。培養條件同1)。第三、將幼苗切除葉片后，置于10X的冷光源解剖鏡下用解剖針剝取莖尖，快速切下置于脫毒培養基表面，進行暗培養7天后轉入光培養2個月，中間進行1次轉接。每個培養基可接種4個莖尖，莖尖切取大小為1.0mm，留取1個葉原基。脫毒培養基為：1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5％氨基寡糖素0.2mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4-5.8。待長出兩片葉片后，進行二次脫毒。第四、無毒檢測后將無毒苗本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種蝴蝶蘭脫毒及快繁技術，其特征在于，它包括以下幾個步驟：1)材料的選擇及初代培養：選用生長健壯、開花3?5朵、經檢測后攜帶病毒的蝴蝶蘭開花株，切取花梗，3?5cm一節，每節包含1?2個飽滿腋芽，在超凈工作臺上用75％的酒精表面消毒30?40s，再用用0.1％的HgCl2震蕩消毒8?10min，無菌水沖洗3?5次，用尖頭鑷剝去腋芽苞葉，再0.1％的HgCl2震蕩消毒2?3min，用無菌水沖洗5?8次，切除受HgCl2毒害的兩端，接種于50mL誘導培養基上先暗培養7?10天，后轉入光照培養2?3個月，待兩片真葉展開形成叢生芽即可；2)莖尖伸長培養：將步驟1)所誘導出的展葉的叢生芽轉入50ml促莖尖伸長培養基，培養40?60天，待第三片或第四片葉成熟即可，得幼苗；3)第一次脫毒培養：將步驟2)獲得的幼苗，置于10X的冷光源解剖鏡下用解剖針剝取一個微凸、穹形、發亮的生長點，迅速切下置于30mL脫毒培養基表面，進行暗培養7?15天后轉入光培養2?3個月，中間可進行1?2次轉接，防褐化死亡，每瓶培養基可接種3?5個含生長點的莖尖，莖尖切取大小為1?2mm，留取1個葉原基；4)第二次脫毒培養：將步驟3)獲得的脫毒莖尖，待其長出1或2片成熟小葉后，進行二次脫毒培養，10X冷光源解剖鏡下剝取1?2mm大小生長點后，迅速接于30mL脫毒培養基表面，每瓶培養基接種3?5含生長點的莖尖，進行暗培養7?15天后轉入光照培養2?3個月，每月進行一次轉接，更換培養基，防止褐化死亡；5)脫毒苗的增殖培養：將步驟4)獲得的脫毒苗，檢測后進行增殖培養，切除葉片及褐化部分接于盛100mL培養基的蘭花瓶，每瓶接種5株；培養2?3個月后，生長健壯，增殖系數達2?4，即得脫毒分化苗；6)脫毒苗的壯苗培養：待步驟5)獲得的脫毒分化苗長至株高2?3cm，兩葉一心后轉入盛120mL壯苗培養基的蘭花瓶后進行壯苗培養，每瓶轉接16株；培養45?60天后，株高達3?5cm，兩葉一心壯苗完成；7)脫毒苗的生根培養：將步驟6)獲得的壯苗后植株，接于150mL生根培養基的蘭花瓶中進行生根培養，每瓶轉接11?13株；培養3?4個月后，待植株長至3?4片葉，根系達3條以上，健壯有活力，即可移入溫室馴化移栽。...
【技術特征摘要】
1.一種蝴蝶蘭脫毒及快繁技術，其特征在于，它包括以下幾個步驟：1)材料的選擇及初代培養：選用生長健壯、開花3-5朵、經檢測后攜帶病毒的蝴蝶蘭開花株，切取花梗，3-5cm一節，每節包含1-2個飽滿腋芽，在超凈工作臺上用75％的酒精表面消毒30-40s，再用用0.1％的HgCl2震蕩消毒8-10min，無菌水沖洗3-5次，用尖頭鑷剝去腋芽苞葉，再0.1％的HgCl2震蕩消毒2-3min，用無菌水沖洗5-8次，切除受HgCl2毒害的兩端，接種于50mL誘導培養基上先暗培養7-10天，后轉入光照培養2-3個月，待兩片真葉展開形成叢生芽即可；2)莖尖伸長培養：將步驟1)所誘導出的展葉的叢生芽轉入50ml促莖尖伸長培養基，培養40-60天，待第三片或第四片葉成熟即可，得幼苗；3)第一次脫毒培養：將步驟2)獲得的幼苗，置于10X的冷光源解剖鏡下用解剖針剝取一個微凸、穹形、發亮的生長點，迅速切下置于30mL脫毒培養基表面，進行暗培養7-15天后轉入光培養2-3個月，中間可進行1-2次轉接，防褐化死亡，每瓶培養基可接種3-5個含生長點的莖尖，莖尖切取大小為1-2mm，留取1個葉原基；4)第二次脫毒培養：將步驟3)獲得的脫毒莖尖，待其長出1或2片成熟小葉后，進行二次脫毒培養，10X冷光源解剖鏡下剝取1-2mm大小生長點后，迅速接于30mL脫毒培養基表面，每瓶培養基接種3-5含生長點的莖尖，進行暗培養7-15天后轉入光照培養2-3個月，每月進行一次轉接，更換培養基，防止褐化死亡；5)脫毒苗的增殖培養：將步驟4)獲得的脫毒苗，檢測后進行增殖培養，切除葉片及褐化部分接于盛100mL培養基的蘭花瓶，每瓶接種5株；培養2-3個月后，生長健壯，增殖系數達2-4，即得脫毒分化苗；6)脫毒苗的壯苗培養：待步驟5)獲得的脫毒分化苗長至株高2-3cm，兩葉一心后轉入盛120mL壯苗培養基的蘭花瓶后進行壯苗培養，每瓶轉接16株；培養45-60天后，株高達3-5cm，兩葉一心壯苗完成；7)脫毒苗的生根培養：將步驟6)獲得的壯苗后植株，接于150mL生根培養基的蘭花瓶中進行生根培養，每瓶轉接11-13株；培養3-4個月后，待植株長至3-4片葉，根系達3條以上，健壯有活力，即可移入溫室馴化移栽。2.如權利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術，其特征在于，步驟1)中所述的誘導培養基為1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L，pH5.4-5.8。3.如權利要求1所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙學彩，陳晉鑾，趙紅霞，胡東關，李媛媛，
申請(專利權)人：山東博華高效生態農業科技有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37
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