一種吡唑啉酮縮噻吩酰肼合銅配合物的制備及生物活性制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種4?酰基吡唑啉酮縮噻吩酰肼合銅配合物的制備及生物活性。通過溶液法制備得到該六核銅配合物，其結(jié)構(gòu)式為[Cu6L6]（配體H2L=1?苯基?3?甲基?4?丙酰基?5?吡唑啉酮縮2?噻吩酰肼），具有六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。其不對(duì)稱單元中Cu(II)與一個(gè)配體的兩個(gè)氧原子、一個(gè)氮原子以及相鄰配體吡唑環(huán)上的一個(gè)氮原子發(fā)生配位，形成CuN2O2的配位環(huán)境。經(jīng)MTT細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)證實(shí)該配合物具有很好抗腫瘤活性，能夠抑制HeLa細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡細(xì)胞，使細(xì)胞周期被阻滯在S期，因此可以用于制備抗癌藥物。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)公開一種4-?；吝蜻s噻吩酰肼合銅配合物的制備及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
自1969年Rosenberg發(fā)現(xiàn)順鉑具有抗癌活性以來，各種新型抗腫瘤金屬配合物相繼被合成，如新型鉑配合物（卡鉑，奧沙利鉑等）、有機(jī)錫配合物、席夫堿過渡金屬配合物等，并逐步投入臨床應(yīng)用。其中，席夫堿及其配合物在抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多方面具有優(yōu)異的性能。而吡唑啉酮類席夫堿是龐大的席夫堿家族中重要的分支之一。其中4-?；吝蜻驂A金屬配合物的抗腫瘤作用日益受到重視。具有強(qiáng)大修飾功能的吡唑啉酮衍生物以及與其螯合后的金屬配合物具有非常豐富的結(jié)構(gòu)和更有效的藥物活性，使其可能成為高效的臨床使用藥物。這些配合物主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗癌作用，其功效與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力有著密切聯(lián)系。凋亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程，是由基因介導(dǎo)的個(gè)別細(xì)胞發(fā)生的程序性細(xì)胞死亡。細(xì)胞增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡是多細(xì)胞生物維系其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、內(nèi)環(huán)境功能平衡以及生長(zhǎng)發(fā)育所必需的最基本的生物學(xué)過程。而腫瘤的發(fā)生可能就是由于細(xì)胞增殖和凋亡的平衡失調(diào)造成。當(dāng)配合物進(jìn)入細(xì)胞中，與細(xì)胞中的微量金屬元素生成藥物-金屬-酶的混合配合物從而而阻止病毒的復(fù)制。與此同時(shí)，一些核酸和蛋白質(zhì)又是很好的配位體，能與從配合物中解離出來的金屬離子發(fā)生作用，使一些活性的官能團(tuán)失活，因此具有明顯的細(xì)胞毒活性。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，吡唑啉酮金屬配合物能誘導(dǎo)人骨肉瘤HOS細(xì)胞，人宮頸癌HeLa細(xì)胞和人口底癌細(xì)胞及多藥耐藥性的KBv200細(xì)胞的凋亡。本專利技術(shù)在4-?；吝蜻幕A(chǔ)上縮合2-噻吩甲酰肼，合成4-?；吝蜻驂A1-苯基-3-甲基-4-丙?；?5-吡唑啉酮縮2-噻吩酰肼，以此為配體，合成出一種新型配合物1-苯基-3-甲基-4-丙?；?5-吡唑啉酮縮2-噻吩酰肼合銅，該配合物具有很好抗腫瘤活性，能夠抑制HeLa細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此所述六核銅配合物是一個(gè)潛在的抗癌治療的候選藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一類新型配合物1-苯基-3-甲基-4-丙?；?5-吡唑啉酮縮2-噻吩酰肼合銅及其制法與作為抗腫瘤的藥物。使用常規(guī)的溶液合成法，可得到六核銅配合物。該配合物能夠抑制HeLa細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，具有較好的抗癌活性。本專利技術(shù)提供的六核銅配合物的結(jié)構(gòu)式分別為[Cu6L6]。配體H2L為1-苯基-3-甲基-4-丙酰基-5-吡唑啉酮縮2-噻吩酰肼。所述的銅配合物由六個(gè)配體分別失去兩個(gè)氫離子變?yōu)長(zhǎng)2-后與六個(gè)金屬組成一個(gè)六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。其不對(duì)稱單元中Cu(II)與一個(gè)配體的兩個(gè)氧原子、一個(gè)氮原子以及相鄰配體吡唑環(huán)上的一個(gè)氮原子發(fā)生配位，形成CuN2O2的配位環(huán)境。本專利技術(shù)提供的六核銅配合物的制備方法包括如下步驟：步驟A（配體的合成）：將2-噻吩酰肼的乙醇溶液在攪拌下緩慢滴加到溶有等摩爾量的1-苯基-3-甲基-4-丙?；?5-吡唑啉酮的熱乙醇溶液中，滴加適量冰醋酸。攪拌回流4h，靜置冷卻，抽濾，乙醇洗，得黃色粉末狀產(chǎn)物。步驟B（配合物的合成）：稱取上述配體0.05g于燒杯中，加入10mL乙醇使之溶解，再向其中滴加5mL醋酸銅(0.0282g)的乙醇溶液。室溫?cái)嚢?h，經(jīng)過緩慢揮發(fā)析出塊狀晶體，過濾洗滌干燥后得純凈配合物。經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)表明所述六核銅配合物對(duì)對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞具有較好的抑制作用，并且具有濃度依賴性。通過Hoechst33258熒光染色實(shí)驗(yàn)以及透射電鏡實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)所述六核銅配合物使細(xì)胞核固縮，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體。Annexin-V/PI雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，所述六核銅配合物處理HeLa細(xì)胞后，細(xì)胞周期被阻滯在S期?？傊緦＠夹g(shù)提供的六核銅配合物癌細(xì)胞具有較好的抗癌活性。本專利技術(shù)制備方法簡(jiǎn)單，可靠。附圖說明圖1為銅配合物晶體結(jié)構(gòu)圖。圖2為銅配合物對(duì)HeLa細(xì)胞體外抗增殖作用。圖3為銅配合物對(duì)HeLa細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響。圖4為流式細(xì)胞儀檢測(cè)銅配合物誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞的早期凋亡效應(yīng)。圖5為銅配合物處理HeLa細(xì)胞后細(xì)胞周期分布。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖所示實(shí)施例，對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳述。實(shí)施例1：配體H2L的合成。將2-噻吩酰肼的乙醇溶液在攪拌下緩慢滴加到溶有等摩爾量的1-苯基-3-甲基-4-丙酰基-5-吡唑啉酮的熱乙醇溶液中，滴加適量冰醋酸。攪拌回流4h，靜置冷卻，抽濾，乙醇洗，得黃色粉末狀產(chǎn)物。C18H18N4O2S（分子量：354.12）。元素分析實(shí)驗(yàn)值（理論值%）：C60.94（61.31）；H5.08（5.11）；N15.80（15.46）；S9.02（8.89）。實(shí)施例2：銅配合物的合成。稱取上述配體0.05g于燒杯中，加入10mL乙醇使之溶解，再向其中滴加5mL醋酸銅(0.0282g)的乙醇溶液。室溫?cái)嚢?h，經(jīng)過緩慢揮發(fā)析出塊狀晶體，過濾洗滌干燥后得純凈配合物。通過X射線單晶衍射儀分析（圖1）和元素分析，證明該晶體為[Cu6L6]。C108H102N24O12S6Cu6（分子量：2501.86）。元素分析實(shí)驗(yàn)值（理論值%）：C51.80（51.86）；H4.08（4.11）；N13.43（13.40）S7.67（7.69）。實(shí)施例3：實(shí)施例2得到的六核銅配合物的相關(guān)測(cè)試和試驗(yàn)。一、細(xì)胞活性檢測(cè)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HeLa細(xì)胞，以1×105個(gè)細(xì)胞/mL接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加樣90μL。培養(yǎng)24h后分別加入10μL不同濃度化合物，繼續(xù)分別培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，避光加入5mg/mLMTT每孔20μL，繼續(xù)孵育4h。棄上清，加100μLDMSO，待完全溶顯色后，用酶標(biāo)儀測(cè)定540/655nm處OD值。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（%）=[1-（藥物組OD值-空白組OD值）/（control組OD值-空白組OD值）]×100%，利用統(tǒng)計(jì)軟件prism計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖2所示，化合物作用HeLa細(xì)胞72h后，所述六核銅配合物對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用具有濃度依賴性，作用HeLa細(xì)胞72h后半數(shù)細(xì)胞抑制濃度IC50值為1.287μg/mL，與空白對(duì)照組相比差異顯著（P<0.01），而與陽性藥物順鉑DDP作用組相比（IC50=15.24μg/mL）也有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果表明，該六核銅配合物對(duì)HeLa細(xì)胞有顯著的體外抗增殖作用。二、Hoechst33258染色觀察：將無菌蓋玻片置于六孔板內(nèi)，滴一滴培養(yǎng)液使其與底面貼合，加入濃度為1×105個(gè)/mLHeLa細(xì)胞2mL，貼壁后分別加入不同濃度化合物孵育24h，取出蓋玻片，PBS洗兩遍。加入0.5μg/mL的Hoechst33258染色液0.5mL，避光染色5min，PBS洗兩遍。取出蓋玻片，將蓋玻片貼有細(xì)胞的一面蓋在載玻片上，用細(xì)胞培養(yǎng)液濕潤(rùn)細(xì)胞后熒光顯微鏡鏡檢。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖3所示，六核銅配合物處理HeLa細(xì)胞24h后，光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加，貼壁細(xì)胞數(shù)量逐漸在減少。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈現(xiàn)出凋亡細(xì)胞細(xì)胞特有的染色特性，核漿比例增大，核物本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
本專利技術(shù)公開一種4??；吝蜻s噻吩酰肼合銅配合物的制備及生物活性，其結(jié)構(gòu)式為[Cu6L6]（配體H2L=1?苯基?3?甲基?4?丙?；?5?吡唑啉酮縮2?噻吩酰肼），具有六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。

【技術(shù)特征摘要】
1.本發(fā)明公開一種4-酰基吡唑啉酮縮噻吩酰肼合銅配合物的制備及生物活性，其結(jié)構(gòu)式為[Cu6L6]（配體H2L=1-苯基-3-甲基-4-丙?；?5-吡唑啉酮縮2-噻吩酰肼），具有六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。
2.權(quán)利要求1所述的銅配合物是通過一定量的4-?；吝蜻s噻吩酰肼配體與等摩爾比的金屬銅醋酸鹽經(jīng)過室溫?cái)嚢璺ㄖ苽涞玫健?br>3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銅配合物，通過X射線單晶衍射法...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：許貫誠，李玥，孫素榮，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：新疆大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：新疆;65