一種混源單萜生物堿類化合物及其制備方法與作為海洋防污劑的應用技術

一種混源單萜生物堿類化合物及其制備方法與作為海洋防污劑的應用，制備時先對真菌Scopulariopsis?sp.(TA01-33)?進行菌種培養，再對該真菌進行發酵培養，過濾除去菌體，濾液濃縮后，用乙酸乙酯萃取；依次進行正相硅膠柱層析、Sephadex?LH-20?凝膠柱層析、HPLC高效液相色譜，即得式I化合物。本發明專利技術提供一種海洋生物防污劑，其特征在于以本發明專利技術的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，用于防治藤壺附著引起的海洋生物污損。

【技術實現步驟摘要】
一種混源單萜生物堿類化合物及其制備方法與作為海洋防污劑的應用
本專利技術涉及一種混源單萜生物堿類化合物(hybridmonoterpenoid-alkaloid)化合物及其制備方法與應用，特別是涉及一種對海洋污損生物藤壺Balanusamphitrite幼蟲具有極強的抑制活性的混源單萜生物堿類化合物及其制備方法與應用。
技術介紹
海洋生物污損是有機分子、微生物、動物、植物、以及它們的副產物在海洋潛沒設施表面的危害性積聚。這種危害性積聚經常發生在沒有保護的海洋潛沒設施的表面，包括海運和旅游的船舶，海軍軍艦，熱交換器，海洋傳感器以及水產養殖基地等。生物污損引起了巨大的經濟損失，僅以美國海軍軍艦為例，每年在這方面的經濟損失在18到26億美元之間，而美國海軍軍艦數量僅占全球船舶數量的0.5%，因此海洋生物污損是極其嚴重的自然危害。藤壺因其很強的黏附能力是目前所知的污損生物中非常普遍的代表性生物。自2008年全球取消了有毒防污劑有機錫的使用后，尋找安全高效的海洋防污劑成為國際上急需解決的課題。海洋天然產物被認為是新型海洋防污劑的重要來源。實際上，在過去的幾十年里已經從海綿，珊瑚和海藻等海洋生物中發現了很多有強抗污損活性的化合物。然而，從上述大型生物中發現的活性化合物由于受到量的限制而大大影響了其潛在的應用。海洋微生物由于在實驗室中可以大規模發酵，不易破壞自然環境，而成為活性海洋化合物的最重要來源。然而，近年來尚未見到從海洋微生物中獲得有重要抗污損活性的混源單萜生物堿類化合物作為防污劑的使用。（J.A.Callow,M.E.Callow,Nat.Commun.2011,2,244–253；C.M.Kirschner,A.B.Brennan,Annu.Rev.Mater.Res.2012,42,1–19；M.Schultz,J.Bendick,E.Holm,W.Hertel,Biofouling2011,27,87–98；N.Fusetani,Nat.Prod.Rep.2004,21,94–104；N.Fusetani,Nat.Prod.Rep.2011,28,400–410；P.-Y.Qian,Y.Xu,N.Fusetani,Biofouling2010,26,223–234。）
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種來源于海洋真菌的混源單萜生物堿類化合物及其制備方法與作為海洋防污劑的應用，它能滿足現有技術的上述需求。菌種保藏信息：保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；保藏日期：2012年12月17日；保藏編號：CGMCC6959；分類命名：Scopulariopsissp.。本專利技術提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽:，或其藥學上可接受的鹽。本專利技術提供式I化合物的制備方法，其特征在于先在菌種培養基中對分離自柳珊瑚Carijoasp.的內生真菌Scopulariopsissp.(TA01-33)進行菌種培養，再在發酵培養基中對該真菌進行發酵培養，然后將所得發酵液過濾，除去菌體，將濾液濃縮后，用乙酸乙酯萃取；萃取液濃縮后分別進行正相硅膠柱層析、SephadexLH-20凝膠柱層析后，再經HPLC高效液相制備色譜，將所得洗脫液濃縮，即為式I化合物。上述制備方法中菌種培養基優選含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、瓊脂0.1%–3.0%、氯化鈉0.05%–5%，其余為水，培養溫度優選為0–30°C，培養時間優選為3–15天；發酵培養基優選含有葡萄糖0.1%–5.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、氯化鈉0.05%–5%，其余為水，培養溫度優選為0–30°C，培養時間優選為10–60天；所述的正相硅膠柱層析采用的固定相優選200–300目硅膠，流動相優選體積比為5%–95%的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑；所述SephadexLH-20凝膠柱層析采用的流動相優選體積比為石油醚:氯仿:甲醇=2:1:1的混合溶劑；所述HPLC高效液相制備色譜中采用的色譜柱為本領域常規ODSC18柱，優選為Kromasil10×250mm,7μm，流速優選為1.0–5.0mL/min，流動相優選體積比為5%–95%的甲醇-水混合溶劑。本專利技術從海洋真菌中獲得的混源單萜二氫喹啉酮化合物對海洋污損生物藤壺Balanusamphitrite幼蟲具有極強的抑制活性，可用于開發海洋防污劑，應用前景廣闊。本專利技術的另一實施方案提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備海洋防污劑中的應用。本專利技術中術語“藥學上可接受的鹽”是指非毒性的無機或有機酸和/或堿的加成鹽。可參見“Saltselectionforbasicdrugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。為了便于對本專利技術的進一步理解，下面提供的實施例對其做了更詳細的說明。但是這些實施例僅供更好的理解專利技術而并非用來限定本專利技術的范圍或實施原則，本專利技術的實施方式不限于以下內容。實施例1柳珊瑚內生真菌Scopulariopsissp.(TA01-33)的菌種培養菌種培養所用的培養基含有葡萄糖1.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.2%、蛋白胨0.2%、瓊脂1.0%、氯化鈉3.0%，其余為水，使用時制成試管斜面，真菌菌株在30℃下培養5天。柳珊瑚內生真菌Scopulariopsissp.(TA01-33)的發酵發酵培養所用的培養基含有葡萄糖1.0%（重量百分比，下同）、酵母膏0.2%、蛋白胨0.2%、氯化鈉3.0%，其余為水；真菌菌株于28℃培養60天。(3)式I化合物的提取分離取10L步驟（2）得到的發酵液過濾，除去菌體，將濾液濃縮后，用等體積的乙酸乙酯萃取5次；萃取液濃縮后分別進行正相硅膠柱層析（固定相為200–300目硅膠；流動相為30%乙酸乙酯/石油醚混合溶劑，體積比）、SephadexLH-20凝膠柱層析（石油醚：氯仿：甲醇=2：1：1的混合溶劑，體積比）后，再經HPLC高效液相制備色譜分離（色譜柱為Kromasil10×250mm，7μm，流速為2.0mL/min，流動相為75%的甲醇-水混合溶劑，體積比），將所得洗脫液濃縮，得無色結晶，即為式I化合物。式I化合物的結構確證數據:無色結晶;[α]24D=+133.5(c0.017,MeOH);1HNMR(acetone-d6,400MHz,TMS)和13CNMR(acetone-d6,100MHz,TMS),見表1;紅外IR(KBr)νmax3366,2926,1687,1600,1421and1107cm–1;紫外UV(MeOH)λmax(logε):204.8(0.69),211.2(0.64),252.8(0.13),281.6(0.05)nm;質譜EIMSm/z437[M]+;高分辨質譜HREIMSm/z437.2200[M]+(calcdforC26H31NO5,437.2197).表1式I化合物的核磁數據實施例2（1）柳珊瑚內生真菌Scopulariopsissp.(TA01-33)的菌種培養菌種培養所用的培養基含有葡萄本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種混源單萜生物堿類化合物，其特征在于具有式I的結構:，或其藥學上可接受的鹽。

【技術特征摘要】
2015.09.06 CN 201510558342X1.一種混源單萜生物堿類化合物，其特征在于具有式I的結構:，或其藥學上可接受的鹽。2.權利要求1所述的式I化合物的制備方法，其特征在于先在菌種培養基中對真菌Scopulariopsissp.(TA01-33)進行菌種培養，再在發酵培養基中對該真菌進行發酵培養，后將所得發酵液過濾，除去菌體，將濾液濃縮后，用乙酸乙酯萃取；萃取液濃縮后分別進行正相硅膠柱層析、SephadexLH-20凝膠柱層析后，再經HPLC高效液相制備色譜，將所得洗脫液濃縮，得無色結晶，即為式I化合物；其中所述菌種培養基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、瓊脂、粗海鹽、水；所述的發酵培養基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、瓊脂、粗海鹽、水；所述的色譜分離為正相硅膠柱色譜分離、凝膠柱層析分離和高效液相色譜分離。3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述菌種培養基優選含有葡萄糖0.1%–5.0%、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、瓊脂0.1%–3.0%、氯化鈉0.05%–5...

【專利技術屬性】
技術研發人員：邵長倫，王長云，胥汝芳，牟曉鳳，魏美燕，
申請(專利權)人：中國海洋大學，
類型：發明
國別省市：山東;37