本發(fā)明專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種Ficolin-3電化學(xué)免疫傳感器及其制備與應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)所述電化學(xué)免疫傳感器，包括工作電極，所示工作電極包括基底電極和捕獲分子，所述基底電極選用玻碳電極，所述捕獲分子選用Ficolin-3單克隆抗體。與傳統(tǒng)的Ficolin-3檢測(cè)手段相比，本發(fā)明專利技術(shù)的電化學(xué)免疫傳感器具有如下優(yōu)點(diǎn)：（1）靈敏度高，檢測(cè)限低至100?ng/mL；（2）檢測(cè)時(shí)間縮短三分之一，準(zhǔn)確性強(qiáng)；（3）本發(fā)明專利技術(shù)所構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器不需要對(duì)工作電極中的基底電極做修飾，制作及操作更簡(jiǎn)單，成本低，應(yīng)用前景廣闊。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種Ficolin-3電化學(xué)免疫傳感器及其制備與應(yīng)用。
技術(shù)介紹
近年來，糖尿病發(fā)病率逐年增加，已經(jīng)成為全世界嚴(yán)重的公共健康問題。II型糖尿病是代謝性疾病，多見于中、老年人，占糖尿病患者的90％以上。生物標(biāo)志物是用來表達(dá)某種生物學(xué)狀態(tài)或過程的物質(zhì)，能夠反映機(jī)體內(nèi)存在某種微生物或生物學(xué)過程，特殊疾病狀態(tài)，或者具有特殊DNA序列片段或特殊遺傳信息。生物標(biāo)志物可以是蛋白質(zhì)，肽段，核酸，糖化合物，脂類化合物及小分子物質(zhì)等。臨床上，生物標(biāo)志物常常用于疾病篩查和診斷(包括臨床療效判斷)。分子診斷學(xué)是新發(fā)展的臨床診斷方法，主要是對(duì)DNA、RNA和蛋白質(zhì)的檢測(cè)。分子診斷學(xué)主要是利用分子生物學(xué)的技術(shù)和方法研究人體內(nèi)源性或外源性生物大分子的存在、結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控的變化，為疾病的預(yù)防、預(yù)測(cè)、診斷、治療和轉(zhuǎn)歸提供信息和決策依據(jù)。分子診斷技術(shù)的發(fā)展方向是特異性好、靈敏度高、針對(duì)性強(qiáng)、診斷快速。固然，到目前為止，分子雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和DNA序列測(cè)定仍然是檢測(cè)DNA和RNA的基本技術(shù)和主流技術(shù)，蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、蛋白截短測(cè)試和質(zhì)譜法仍然是分析測(cè)定蛋白質(zhì)的主要手段。傳統(tǒng)的檢測(cè)生物標(biāo)志物的方法有PCR、ELISA和電泳等，這些方法基本上是醫(yī)院檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，結(jié)果比較準(zhǔn)確可靠，但是存在一些缺點(diǎn)，如檢測(cè)靈敏度低、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、需要貴重的儀器，不利于生物標(biāo)志物含量低的疾病的早期檢測(cè)。已有很多研究發(fā)現(xiàn)了很多與II糖尿病發(fā)生發(fā)展和早期診斷相關(guān)的生物標(biāo)記物，其中有蛋白質(zhì)、DNA和microRNA等。Ficolin-3是一種補(bǔ)體系統(tǒng)模式識(shí)別蛋白，參與機(jī)體天然免疫，激活補(bǔ)體凝集素途徑，調(diào)理炎癥，清除晚期凋亡細(xì)胞等。2008年發(fā)現(xiàn)Ficolin-3在II型糖尿病人血清中表達(dá)異常，有望作為檢測(cè)II型糖尿病的生物標(biāo)記物，并應(yīng)用大量的臨床樣本證明了Ficolin-3可以作為II型糖尿病預(yù)測(cè)新標(biāo)記物。Ficolin-3在糖尿病領(lǐng)域的重要發(fā)現(xiàn)為糖尿病的早期發(fā)現(xiàn)、及時(shí)干預(yù)提供了必要手段，也為未來糖尿病的有效治療提出進(jìn)一步探索的方向。目前針對(duì)血清Ficolins的檢測(cè)方法有WesternBlotting和ELISA，WesternBlot所需要的設(shè)備方便，使用靈活，但是缺點(diǎn)是定量結(jié)果不準(zhǔn)確、操作復(fù)雜、重現(xiàn)性不理想，穩(wěn)定性差；ELISA法則操作步驟繁瑣且成本高。因此，有必要尋找更好的Ficolins的檢測(cè)方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，本專利技術(shù)的目的在于提供一種Ficolin-3電化學(xué)免疫傳感器及其制備與應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的以及其他相關(guān)目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：本專利技術(shù)的第一方面，提供了一種Ficolin-3電化學(xué)免疫傳感器，包括工作電極，所示工作電極包括基底電極和捕獲分子，所述基底電極選用玻碳電極，所述捕獲分子選用Ficolin-3單克隆抗體。優(yōu)選地，所述捕獲分子固定于所述基底電極上。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述捕獲分子通過靜電引力吸附于所述基底電極上。優(yōu)選地，所示基底電極上捕獲分子的密度范圍是56.62～106.16ng/mm2。更優(yōu)選地，所示基底電極上捕獲分子的密度范圍是56.62～70.77ng/mm2。優(yōu)選地，所述捕獲分子選用鼠抗人Ficolin-3單克隆抗體。優(yōu)選地，所示電化學(xué)免疫傳感器中還含有參比電極和對(duì)電極。優(yōu)選地，所示參比電極選用銀/氯化銀。所示對(duì)電極選用鉑電極。本專利技術(shù)的第二方面，提供了前述電化學(xué)免疫傳感器中工作電極的制備方法，包括步驟：在基底電極表面添加捕獲分子，孵育，獲得工作電極。本專利技術(shù)的第三方面，提供了一種電化學(xué)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，包括前述電化學(xué)免疫傳感器。優(yōu)選地，電化學(xué)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，還包括生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體、親和素修飾的辣根過氧化物酶(Avidin-HRP)、含有過氧化氫的TMB底物溶液。優(yōu)選地，所述生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體為生物素標(biāo)記羊抗人Ficolin-3多克隆抗體。本專利技術(shù)的第四方面，提供了一種使用前述電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)Ficolin-3的方法，包括步驟：(1)封閉電化學(xué)免疫傳感器中工作電極上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)；(2)在步驟(1)所得已經(jīng)封閉其他非特異性結(jié)合位點(diǎn)的工作電極上添加待測(cè)樣本，孵育；(3)再在步驟(2)所得工作電極上添加生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體，孵育；(4)再在步驟(3)所得工作電極上添加親和素修飾的辣根過氧化物酶(Avidin-HRP)；(5)將步驟(4)所得工作電極放在含有過氧化氫的TMB底物溶液中，進(jìn)行檢測(cè)。優(yōu)選地，所述方法為非疾病診斷目的的方法。優(yōu)選地，步驟(1)中，采用BSA封閉電化學(xué)免疫傳感器中工作電極上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。優(yōu)選地，步驟(2)中，孵育溫度為4～25℃，孵育時(shí)間為45～75min。更優(yōu)選地，孵育時(shí)間為60min。優(yōu)選地，步驟(3)中，所述生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體為生物素標(biāo)記羊抗人Ficolin-3多克隆抗體。優(yōu)選地，步驟(3)中，孵育溫度為4～25℃，孵育時(shí)間為60～90min。更優(yōu)選地，孵育時(shí)間為60min。優(yōu)選地，步驟(3)中，生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體的濃度為25～30μg/ml。更優(yōu)選地，生物素標(biāo)記Ficolin-3多克隆抗體的濃度為25μg/ml。優(yōu)選地，步驟(4)中，檢測(cè)時(shí)采用三電極系統(tǒng)，除了工作電極以外，還包括對(duì)電極和參比電極。優(yōu)選地，采用鉑電極為對(duì)電極，銀/氯化銀為參比電極。本專利技術(shù)第四方面提供了前述電化學(xué)免疫傳感器在制備Ficolin-3檢測(cè)產(chǎn)品中的用途。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有如下有益效果：與傳統(tǒng)的Ficolin-3檢測(cè)手段相比，本專利技術(shù)的電化學(xué)免疫傳感器具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)靈敏度高，檢測(cè)限低至100ng/mL；(2)檢測(cè)時(shí)間縮短三分之一，準(zhǔn)確性強(qiáng)；(3)本專利技術(shù)所構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器不需要對(duì)工作電極中的基底電極做修飾，制作及操作更簡(jiǎn)單，成本低，應(yīng)用前景廣闊。附圖說明圖1：本專利技術(shù)電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)原理圖。圖2：電化學(xué)阻抗圖譜法的尼奎斯特圖。圖3：(A)構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)0μg/ml(實(shí)線)、25μg/ml(長(zhǎng)虛線)和50μg/ml(短虛線)的Ficolin-3時(shí)響應(yīng)的循環(huán)伏安曲線；(B)電化學(xué)免疫傳感器對(duì)0μg/ml(實(shí)線)、25μg/ml(長(zhǎng)虛線)和50μg/ml(短虛線)Ficol本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種Ficolin?3電化學(xué)免疫傳感器，包括工作電極，所示工作電極包括基底電極和捕獲分子，所述基底電極選用玻碳電極，所述捕獲分子選用Ficolin?3單克隆抗體。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種Ficolin-3電化學(xué)免疫傳感器，包括工作電極，所示工作電極包括基底電極和捕獲
分子，所述基底電極選用玻碳電極，所述捕獲分子選用Ficolin-3單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述捕獲分子固定于所述基底
電極上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述捕獲分子通過靜電引力吸
附于所述基底電極上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所示基底電極上捕獲分子的密
度范圍是56.62～106.16ng/mm2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述捕獲分子選用鼠抗人
Ficolin-3單克隆抗體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所示電化學(xué)免疫傳感器中還含
有參比電極和對(duì)電極。
7.如權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述電化學(xué)免疫傳感器中工作電極的制備方法，包括步
驟：在基底電極表面添加捕獲分子，孵育，獲得工作電極。
8.一種電化學(xué)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，包括如權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述電化學(xué)免疫傳感器。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的電化學(xué)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，還包括生物素標(biāo)記Ficolin-3
多克隆抗體、親和素修飾的辣根過氧化物酶、含有過氧化氫的TMB底物溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的電化學(xué)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述生物素標(biāo)記Ficolin-3
多克隆抗體為生物素標(biāo)記羊抗人Ficolin-3多克隆抗體。
11.一種使用如權(quán)利要求1～6任一權(quán)利要求所述電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)Ficolin-3的方法，
包括步驟：
(1)封閉電化學(xué)免疫傳感器中工作電極上的...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宓現(xiàn)強(qiáng)，散麗黎，吳家睿，曾冬冬，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院上海高等研究院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：上海;31
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