一種檢測飼料中新霉素的檢測卡制造技術

本發明專利技術公開了一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原?卵清蛋白偶聯物，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體凍干到玻璃纖維素膜上；其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/L?K2CO3調節30?50mL膠體金溶液pH至8.5，攪拌下逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液反應；逐滴加入4mL?10%BSA攪拌反應；金標抗體溶液常溫離心，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液0?5℃離心，棄上清，收集沉淀，定容即得。本發明專利技術檢測效率高，檢測時間短、靈敏度高、特異型好、方便、快捷，結果準確。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及飼料檢測
，具體是一種檢測飼料中新霉素的檢測卡。
技術介紹
新霉素是一種廣譜抗生素，常用于動物各種傳染病的治療，對于多種病原菌有較強的抑制作用，對革蘭氏陽性和陰性菌皆有效。新霉素存在嚴重的副作用，具有腎毒性和內耳毒性，它對內耳的傷害，往往是不可逆轉的，因此動物食品中的新霉素殘留對人類的健康構成巨大威脅。特別是近年來，由于畜牧業盲目濫用新霉素現象日益嚴重，造成畜產品中新霉素殘留增加，影響人類食品安全，所以新霉素殘留問題已經引起社會的高度重視。檢測動物源食品中新霉素的含量顯得更直接、方便，且可實現宰前檢測，為及時排除食品安全隱患，保障食品的質量安全，特開展本試驗方法研究。現有技術對于新霉素的檢測主要是高效液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些技術的缺陷明顯：設備昂貴、操作復雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適合基層使用的測定方法是極其必要的。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種檢測時間短、靈敏度高、特異型好、結果準確的檢測飼料中新霉素的檢測卡，以解決上述
技術介紹
中提出的問題。為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶聯物，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體凍干到玻璃纖維素膜上；其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/LK2CO3調節30-50mL膠體金溶液pH至8.5，電磁攪拌器100-300r/min攪拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應8-20min；逐滴加入4mL10%BSA，繼續攪拌反應8-20min；金標抗體溶液常溫1000-5000r/min離心5-20min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液0-5℃，8000-15000r/min離心10-30min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1mL，制得膠體金標記的新霉素單克隆抗體。作為本專利技術進一步的方案：膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體以3-10μL/cm的濃度均勻凍干到玻璃纖維素膜上。作為本專利技術進一步的方案：樣品墊需進行以下前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干；其中樣品墊處理液是由0.8-1.5g小牛血清蛋白和0.5-1.5g氯化鈉，用含有0.3-1%TritonX-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。作為本專利技術進一步的方案：檢測卡在使用時，對飼料的處理方法是：準確稱取2±0.05g均質后的飼料樣品于50mL離心管中；加入10mL0.03-0.1MHCl，充分渦動1-5min；加入10mL0.03-0.1MNaOH溶液調pH值至7-8充分渦動20-40s，靜置3-10min，取3-4滴上清液進行檢測。作為本專利技術進一步的方案：檢測卡在使用時，對飼料的處理方法是：準確稱取2±0.05g均質后的飼料樣品于50mL離心管中；加入10mL0.05MHCl，充分渦動1min；加入10mL0.05MNaOH溶液調pH值至7-8充分渦動30s，靜置5min，取3-4滴上清液進行檢測。與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：本專利技術檢測效率高，檢測時間短、靈敏度高、特異型好、方便、快捷，結果準確。與新霉素的其它檢測方法相比，大大縮短檢測時間，無需進行浸樣等待，可連續檢測多個樣本，只需將可檢測樣品直接點入檢測卡中計時5-10min即可進行結果判定。具體實施方式下面將結合本專利技術實施例，對本專利技術實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。實施例1本專利技術實施例中，一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶聯物，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體以3μL/cm的濃度均勻凍干到玻璃纖維素膜上。其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/LK2CO3調節30mL膠體金溶液pH至8.5，電磁攪拌器100r/min攪拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應8min；逐滴加入4mL10%BSA，繼續攪拌反應8min；金標抗體溶液常溫1000r/min離心5min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液0℃，8000r/min離心10min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1mL，制得膠體金標記的新霉素單克隆抗體。樣品墊需要進行以下前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干；其中樣品墊處理液是由0.8g小牛血清蛋白和0.5g氯化鈉，用含有0.3%TritonX-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。所述檢測卡在使用時，對飼料的處理方法是：準確稱取2±0.05g均質后的飼料樣品于50mL離心管中；加入10mL0.03MHCl，充分渦動1min；加入10mL0.03MNaOH溶液調pH值至7.1充分渦動20s，靜置3min，取3滴上清液進行檢測。實施例2本專利技術實施例中，一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶聯物，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體以10μL/cm的濃度均勻凍干到玻璃纖維素膜上。其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/LK2CO3調節50mL膠體金溶液pH至8.5，電磁攪拌器300r/min攪拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應20min；逐滴加入4mL10%BSA，繼續攪拌反應20min；金標抗體溶液常溫5000r/min離心20min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液5℃，5000r/min離心30min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1mL，制得膠體金標記的新霉素單克隆抗體。樣品墊需要進行以下前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60%的條件下，室溫自然晾干；其中樣品墊處理液是由1.5g小牛血清蛋白和1.5g氯化鈉，用含有1%TritonX-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。所述檢測卡在使用時，對飼料的處理方法是：準確稱取2±0.05g均質后的飼料樣品于50mL離心管中；加入10mL0.1MHCl，充分渦動5min；加入10mL0.1MNaOH溶液調pH值至7.8充分渦動40s，靜置10min，取4滴上清液進行檢測。實施例3本專利技術實施例中，一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶聯物，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體以5μL/cm的濃度均勻凍干到玻璃纖維素膜上。其中，膠本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原?卵清蛋白偶聯物，其特征在于，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體凍干到玻璃纖維素膜上；其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/L?K2CO3調節30?50mL膠體金溶液pH至8.5，電磁攪拌器100?300r/min攪拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應8?20min；逐滴加入4mL?10%BSA，繼續攪拌反應8?20min；金標抗體溶液常溫1000?5000r/min離心5?20min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液0?5℃，8000?15000r/min離心10?30min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1mL，制得膠體金標記的新霉素單克隆抗體。

【技術特征摘要】
1.一種檢測飼料中新霉素的檢測卡，包括PVC板、樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸水紙、保護膜以及標簽膜，硝酸纖維素膜上包被新霉素半抗原-卵清蛋白偶聯物，其特征在于，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體凍干到玻璃纖維素膜上；其中，膠體金標記的新霉素單克隆抗體的制備過程是：用0.25mol/LK2CO3調節30-50mL膠體金溶液pH至8.5，電磁攪拌器100-300r/min攪拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗體蛋白的蛋白溶液，反應8-20min；逐滴加入4mL10%BSA，繼續攪拌反應8-20min；金標抗體溶液常溫1000-5000r/min離心5-20min，棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；將制得的上清溶液0-5℃，8000-15000r/min離心10-30min，棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標抗體稀釋液定容至1mL，制得膠體金標記的新霉素單克隆抗體。2.根據權利要求1所述的檢測飼料中新霉素的檢測卡，其特征在于，膠體金墊是將膠體金標記的新霉素單克隆抗體以3-10μL/cm的濃度均勻凍干到玻璃纖維素膜上。3.根據權利要求1所述的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：周朱晨，張根義，胡彬，張進，吳念綺，周合，
申請(專利權)人：百奧森江蘇食品安全科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32