一種熒光假單胞菌在植物白粉病防治中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及功能微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體提供了一種熒光假單胞菌在植物白粉病防治中的應(yīng)用。所述的熒光假單胞菌，保藏編號為CCTCC?NO:M?2014274，對單絲殼白粉菌的抑制效果特別顯著，抑菌圈直徑達(dá)到28?mm，能有效防治黃瓜、草莓和煙草的白粉病。本發(fā)明專利技術(shù)提供的含熒光假單胞菌微生物制劑可開發(fā)成生物農(nóng)藥，專門用于植物白粉病的防治，應(yīng)用前景廣闊。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及植物病害防治
，具體涉及一種熒光假單胞菌在植物白粉病防治中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
隨著植物種類的不斷增多，植物栽培方式的不斷多樣化，植物病害日趨嚴(yán)重，而傳統(tǒng)的化學(xué)防治方法存在著許多弊端，比如：化學(xué)農(nóng)藥的大量使用引起了嚴(yán)重的環(huán)境污染，農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留也越來越嚴(yán)重，病菌抗藥性產(chǎn)生速度也越來越快等一系列對人民生活有害的影響。在當(dāng)今倡導(dǎo)低碳經(jīng)濟(jì)、環(huán)保節(jié)約型社會中，尋求能保護(hù)人類生活又可增產(chǎn)的新技術(shù)十分適應(yīng)當(dāng)今社會的發(fā)展。生物防治是利用一種生物或其產(chǎn)物對付另外一種生物的方法，分為以蟲治蟲、以菌治蟲、以菌治菌三大類。它利用了生物物種間的相互關(guān)系，以一種或一類生物或其產(chǎn)物抑制另一種或另一類生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一種。微生物防治主要是利用有益的微生物，通過生物間的競爭作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及誘導(dǎo)抗性等，來抑制某些病原物的存活和活動(dòng)，其優(yōu)越性在于資源豐富、選擇性強(qiáng)、無殘留、無污染、成本低，兼防兼治、增產(chǎn)增收、保持生態(tài)平衡，起到長效的作用。生防菌的種類繁多，生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的主要是真菌和細(xì)菌。生防真菌主要包括木霉菌、毛殼菌、青霉菌、厚壁孢子輪枝菌及菌根真菌、盾殼霉、粘帚霉等，已知的木霉菌至少可寄生18屬29種植物病原菌，如核盤菌屬、長孺孢屬、鐮刀菌屬、蜜環(huán)菌屬、炭疽菌屬、絲核菌屬、輪枝孢屬、黑星菌屬；毛殼菌具有降解纖維素、有機(jī)質(zhì)特性，鑒于此，其廣泛應(yīng)用于植物病原菌的生物防治方面，其中，球毛殼菌、角毛殼菌均可以較好地預(yù)防甘蔗猝倒病，以及較好地防治番茄枯萎病和蘋果斑點(diǎn)病的發(fā)生，對立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌有抑制作用，此外，球毛殼菌還可以較好地保護(hù)谷物、燕麥和大麥免受由雪腐鐮刀菌和禾旋孢霉引起的幼苗枯萎。生防細(xì)菌一般包括芽孢桿菌屬、游動(dòng)放線菌屬、假單孢菌屬、黃單孢菌屬、鏈霉菌屬、土壤桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、節(jié)桿菌屬、固氮菌屬、歐文氏菌屬、黃桿菌屬、小單孢菌屬和根瘤菌屬。其中枯草芽孢桿菌C-22對棉花炭疽病菌、枯萎病菌、立枯病菌、黃萎病菌、棉花疫霉病菌和棉花葉斑病菌均有較好的抑制作用；枯草芽孢桿菌XG-1對西瓜枯萎病菌菌絲生長具有較強(qiáng)的抑制作用，同時(shí)，枯草芽孢桿菌Henu11對禾谷絲核菌具有較好的抑制作用。目前，生防菌在植物病害防治中存在自然條件下定殖能力差、抗藥能力弱及防治效果不穩(wěn)定等問題，因此進(jìn)一步篩選性能優(yōu)良、穩(wěn)定性好的微生物菌種用于防治植物病害，是目前本領(lǐng)域內(nèi)的研究重點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，提供了一種防治植物病害的方法。所述方法是通過在植物葉面施用含熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）的微生物制劑，有效抑制惡苗病和白粉病，效果顯著。本專利技術(shù)一方面提供了一種微生物制劑，是通過將熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）進(jìn)行發(fā)酵制備得到的。所述熒光假單胞菌優(yōu)選熒光假單胞菌HF-3（PseudomonasfluorescensHF-3），已于2014年6月24日保藏于中國武漢武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號為CCTCCNO:M2014274。所述微生物制劑的制備方法，包括如下步驟：將熒光假單胞菌接種至搖瓶中的LB液體培養(yǎng)基中，28～30℃、轉(zhuǎn)速為150rpm條件下培養(yǎng)18h，獲得液體發(fā)酵種子；將液體發(fā)酵種子接種到裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，28～30℃、接種量5～10％，發(fā)酵罐攪拌速度130～180rpm，通氣量5～10％的條件下，發(fā)酵24～48h，即得到含熒光假單胞菌的微生物制劑。所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分及其含量分別為：麥芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸銨4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L。本專利技術(shù)一方面提供了一種防治植物病害的方法，是通過在植物葉面施用上述包含熒光假單胞菌的微生物制劑實(shí)現(xiàn)的。所述植物病害為白粉病。所述微生物制劑為液體制劑。所述微生物制劑中熒光假單胞菌的活菌數(shù)超過109CFU/mL。所述防治植物病害的方法，具體為：將上述包含熒光假單胞菌的微生物制劑稀釋0-900倍，按10-15mL/m2的用量將含熒光假單胞菌的微生物制劑均勻噴灑在植物葉面上；7-10天后再按相同用量噴灑一遍；連用3-5次。本專利技術(shù)提供的含熒光假單胞菌微生物制劑對尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、白腐墊殼孢菌和粉紅單端孢菌的抑制效果不明顯，但其對單絲殼白粉菌的抑制效果特別顯著，抑菌圈直徑達(dá)到28mm，能有效防治植物白粉病。所述微生物制劑稀釋100倍后，對黃瓜白粉病的防治效率高達(dá)95.8%；稀釋至900倍時(shí)，對草莓白粉病的防治效率仍能高于85%，效果非常顯著；稀釋300倍后，對煙草白粉病的防治效率超過80%，與化學(xué)藥物對照組的防治效率相當(dāng)，取得了意料不到的技術(shù)效果。本專利技術(shù)提供的含熒光假單胞菌微生物制劑可開發(fā)成生物農(nóng)藥，專門用于植物白粉病的防治，應(yīng)用前景廣闊。具體實(shí)施方式本專利技術(shù)實(shí)施例中所述熒光假單胞菌選用熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）HF-3，已于2014年6月24日保藏于中國武漢武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號為CCTCCNO:M2014274。該菌株篩選自煙臺東方海洋集團(tuán)三文魚循環(huán)水養(yǎng)殖廢水處理塔內(nèi)的水樣中。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)該菌株能高效降解養(yǎng)殖廢水中的亞硝態(tài)氮，具有凈化水體的功效。申請人在本專利技術(shù)中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)該菌株在植物病害防治方面也有顯著的應(yīng)用效果。下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本專利技術(shù)。對于實(shí)施例中所用到的具體方法或材料，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本專利技術(shù)技術(shù)思路的基礎(chǔ)上，根據(jù)已有的技術(shù)進(jìn)行常規(guī)的替換選擇，而不僅限于本專利技術(shù)實(shí)施例的具體記載。實(shí)施例1含熒光假單胞菌微生物制劑的制備方法1、種子液制備將熒光假單胞菌HF-3接種至搖瓶中的LB液體培養(yǎng)基中，28～30℃、轉(zhuǎn)速為150rpm條件下培養(yǎng)18h，獲得液體發(fā)酵種子；2、發(fā)酵方法：將液體發(fā)酵種子按5～10％的接種量接種到裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中各組分及其含量分別為：麥芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸銨4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L）的發(fā)酵罐中，28～30℃，130～180rpm，通氣量5～10％的條件下，發(fā)酵24～48h，即得到含熒光假單胞菌的微生物制劑。其中，熒光假單胞菌的活菌量約為109CFU/mL。實(shí)施例2抑菌實(shí)驗(yàn)（1）病原菌制備：將尖孢鐮刀菌、立枯絲核菌、白腐墊殼孢菌、粉紅單端孢菌和單絲殼白粉菌（由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)贈(zèng)送）的菌塊（Φ7mm）分別接于PDA固體培養(yǎng)基中央，30℃培養(yǎng)7d；（2）打孔擴(kuò)散法篩選：將滅菌后的PDA培養(yǎng)基溫度保持在55℃，然后用無菌水輕輕沖洗上述病原菌的斜面獲得病原菌孢子懸液，并取適量分別加入PDA培養(yǎng)基中，混勻后倒平板。待凝固后，即制得病原菌含量約為107cfu/ml的PDA固體培養(yǎng)基。用牛津杯在距培養(yǎng)皿中央25mm的對稱兩側(cè)各打一個(gè)孔（Φ7mm），并加入150μl實(shí)施例1制備得到的微生物制劑于孔內(nèi)，每種病原菌設(shè)3個(gè)平行。將平板放入30℃培養(yǎng)箱，72h后測量抑菌圈的直徑本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是通過將熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescens）進(jìn)行發(fā)酵制備得到的。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種微生物制劑，其特征在于，所述微生物制劑是通過將熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）進(jìn)行發(fā)酵制備得到的。2.如權(quán)利要求1所述的微生物制劑，其特征在于，所述的熒光假單胞菌的保藏編號為CCTCCNO:M2014274。3.權(quán)利要求1或2所述的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：將熒光假單胞菌接種至搖瓶中的LB液體培養(yǎng)基中，28～30℃、轉(zhuǎn)速為150rpm條件下培養(yǎng)18h，獲得液體發(fā)酵種子；將液體發(fā)酵種子接種到裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，28～30℃、接種量5～10％，發(fā)酵罐攪拌速度130～180rpm，通氣量5～10％的條件下，發(fā)酵24～48h，即得到含熒光假單胞菌的微生物制劑。4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的液體發(fā)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宗睿，李佩佩，劉魯民，劉金，
申請(專利權(quán))人：青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司，青島和協(xié)生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：山東;37