一種用于鑒別人參產地的多肽微陣列芯片制造技術

本發明專利技術基于發現能夠與從不同產地的人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應的多肽序列，利用多肽微陣列技術，提供了一種用于鑒別人參產地的多肽微陣列芯片。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物檢測領域，尤其涉及一種用于鑒別人參產地的生物芯片。
技術介紹
人參由于“大補元氣”，茲補強壯、安神益智，廣泛用于延緩衰老、防治抑郁，尤其是衰老、應激等所致的各種學習記憶減退性疾病。以人參為來源的藥品和保健品是我國中藥類產品市場占有量最大的品種。目前我國人參以栽培為主，產地主要集中在寒溫帶東北地區：黑龍江省和吉林省。這兩個省的人參產量約占全國的80％以上。由于受生長環境的影響，不同產地的人參，其主要藥效成分如人參皂苷和人參多糖等的種類和含量各有不同，從而導致人參的價格會有很大差異。因此，需要能夠快速、高效和準確地對人參的產地進行鑒定，從而快速確定人參的品質。過去人們主要根據人參的外形、重量、主側根形狀不同來鑒別不同產地的人參。這是一種較粗放的主觀的鑒別方法，在區別野生人參方面有一定的優勢。隨著栽培人參規模的不斷擴大，這種方法已經不能夠滿足市場的需求。目前，區分人參不同產地的方法主要是通過對人參進行理化分析，根據不同產地的人參中多糖、皂苷和微量元素的含量不同來進行鑒別。但是這種鑒別方法過程繁瑣，而且缺乏特異性，難以用于大規模快速地對人參產地進行篩查識別。目前，市場上急需一種精確客觀易于操作的方法對不同產地人參給予快速檢測判定的方法。
技術實現思路
本專利技術基于發現能夠與從不同產地的人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應的多肽序列，利用多肽微陣列技術，提供一種多肽微陣列芯片。具體來說，根據本專利技術的一個方面，本專利技術提供了一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽(以下字母是組成生物體蛋白的二十種氨基酸的縮寫形式，下同)：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF中的至少一種；FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL中的至少一種；DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT中的至少一種；以及TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ中的至少一種。在優選的實施方案中，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP、PGADFPIF、FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI、NDRPLDIL、DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG、NFLRIHMT、TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ。在前述這些多肽中，TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP、PGADFPIF能夠與從產地為黑龍江木蘭縣的栽培人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應。同樣地，FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI、NDRPLDIL能夠與從產地為黑龍江遜克縣的栽培人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應；DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG、NFLRIHMT能夠與從產地為吉林長白縣的栽培人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應；TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH、AFLVQVSQ能夠與從產地為吉林撫松縣的栽培人參中提取的人參總蛋白發生特異性反應。因此，該多肽微陣列芯片能夠鑒別栽培人參的產地。根據本專利技術的另一個方面，本專利技術還提供了一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF中的至少一種。在優選的實施方案中，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF。該多肽微陣列芯片能夠鑒別人參是否為黑龍江木蘭縣的栽培人參。根據本專利技術的另一個方面，本專利技術還提供了一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL中的至少一種。在優選的實施方案中，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL。該多肽微陣列芯片能夠鑒別人參是否為黑龍江遜克縣的栽培人參。根據本專利技術的另一個方面，本專利技術還提供了一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT中的至少一種。在優選的實施方案中，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT。該多肽微陣列芯片能夠鑒別人參是否為吉林長白縣的栽培人參。根據本專利技術的另一個方面，本專利技術還提供了一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ中的至少一種。在優選的實施方案中，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ。該多肽微陣列芯片能夠鑒別人參是否為吉林撫松縣的栽培人參。在本專利技術的多肽微陣列芯片中，所述基片為纖維素膜、玻璃板或者不銹鋼板等。連接有多肽的區域的面積至少0.005cm2，優選至少0.01cm2，更優選0.01-0.1cm2，更優選0.02-0.05cm2，最優選約0.03cm2；每個區域中多肽的含量至少2nmol，優選至少4nmol，進一步優選5-50nmol，更優選10-20nmol，最優選約12nmol。本專利技術進一步提供了制備多肽微陣列芯片的方法，包括如下步驟：(1)將表面帶有羥基的基片用染色液染色；(2)在基片上進行多肽微陣列原位合成；(3)對氨基酸殘基進行側鏈鈍化；(4)去除氨基酸殘基的氨基保護基團；(5)用染色液染色，；(6)重復步驟(2)-(5)，直至合成多肽的最后一個氨基酸；(7)去除多肽側鏈保護基團；和(8)干燥，密封包裝。在優選的技術方案中，在上述步驟(1)中，首先將表面帶有羥基的基片用染色液染色10s-1min，優選約30s，染色液為溴酚藍乙醇溶液或茚三酮乙醇溶液，優選溴酚藍乙醇溶液，更優選質量分數為約0.1％的溴酚藍乙醇溶液；然后用無水乙醇或DCM(二氯甲烷)，優選無水乙醇洗脫1-5次，優選2次，每次1-5min，優選約2min；最后干燥。在上述步驟(2)中，在基片上進行多肽微本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF中的至少一種；FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL中的至少一種；DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT中的至少一種；以及TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ中的至少一種。優選，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP、PGADFPIF、FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI、NDRPLDIL、DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG、NFLRIHMT、TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ。

【技術特征摘要】
1.一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF中的至少一種；FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL中的至少一種；DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT中的至少一種；以及TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ中的至少一種。優選，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP、PGADFPIF、FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI、NDRPLDIL、DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG、NFLRIHMT、TACKASCH、RMFAYQEQ、AQCEMDDH和AFLVQVSQ。2.一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF中的至少一種。優選，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：TYPCVRLN、HWYKRNIL、PLYLRAFP和PGADFPIF。3.一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL中的至少一種。優選，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：FPTYDMNK、HQSNYIAA、WPRDNDSI和NDRPLDIL。4.一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽彼此互不干擾，所述基片通過其所帶有的羥基與多肽C端的羧基反應從而與多肽相連，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT中的至少一種。優選，所述不同的多肽包括具有如下序列的多肽：DLLANPFV、MGHVNFGA、MMRYYVAG和NFLRIHMT。5.一種多肽微陣列芯片，包括基片，在該基片上的不同區域連接有不同的多肽，連接于所述不同區域的不同的多肽...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙樹民，鮑勇剛，石松傳，王利峽，邱國松，
申請(專利權)人：北京博肽未名生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11