一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑制造技術

本發明專利技術公開了一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑，包括羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus?reuteri)TR02和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus)TR08；所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus?reuteri)TR02，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?No.M?2016546；所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus)TR08，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?NO.M?2016548。本發明專利技術提供的復合微生物制劑培養條件簡單、發酵時間短、容易保存，適于工業化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于微生物
，尤其涉及一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑。
技術介紹
潰瘍性結腸炎(UC)、隱窩炎和羅恩氏病是炎性腸病(IBD)的主要類型，所述炎性腸病的特征在于腸中的慢性炎癥。臨床癥狀是腹瀉、腹痛、偶然性直腸出血、體重減輕、疲倦和有時發熱。盡管會發生在任何年齡，IBD最常見于青少年和年輕的成年人中，所以這些人可能遭受延遲的發育和矮化的生長。資料顯示，每年美國UC患病率為200/10萬人，治療UC的花費在1至1.5億美元左右，截止到2012年，UC患者總數是2000年的2.5倍，且復發率達72％；近年來我國UC的患病人數呈明顯上升趨勢。在醫學上，通過減少炎癥并從而控制胃腸道征狀來治療IBD。但是，目前尚不能在醫學上治愈IBD。IBD的臨床進程有很大差異，具有輕度至中度征狀的患者無需住院治療，但是，10-15％的患者會發生該疾病的嚴重進程，其在許多情況下繼之以外科手術，結腸切除術可以消除UC，但是會降低生活質量和增加并發癥的風險。用于治療IBS的藥物已經獲得普及，盡管它們在臨床試驗中的效力是不大的，并且它們的臨床實用性受到不利副作用的限制，可利用的藥物包括：使用5-對氨水楊酸(5-ASA)、皮質類固醇和免疫調節藥物。通常使用5-ASA進行輕度至中度IBD征狀的長期治療，而皮質類固醇和免疫調節藥物被用于治療嚴重的征狀；腹瀉或腹痛作為5-ASA的副作用而出現，而皮質類固醇的長期使用經常顯示出嚴重的副作用，包括骨質減輕、感染、糖尿病、肌肉消瘦和精神病學障礙；免疫調節藥物會抑制免疫系統，這會控制IBD征狀。但是，產生的免疫受損的狀態會使患者易感許多疾病。血清素能性藥劑已經表現出對IBS的總體征狀的效力，但是，最近關于安全性的憂慮已經嚴重地限制了它們的應用。益生菌被定義為“活的微生物，其在以特定數目攝入以后，會發揮超出固有的基礎營養以外的健康益處”(ArayaM.等人,2002；GuarnerF.等人,1998)。來自雙歧桿菌屬的幾種乳酸細菌和種是益生菌，這暗示，已經證實它們會促進特定健康效應。益生細菌必須滿足與沒有毒性、生存力、附著和有益效果有關的幾個要求。然而，現有益生菌對治療腸炎效果不佳。
技術實現思路
專利技術目的：本專利技術的第一目的在于提供一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑。本專利技術的第二目的在于提供上述復合微生物制劑在制備抗菌藥物中的應用。本專利技術的第三目的在于提供上述復合微生物制劑在制備治療胃腸道疾病藥物中的應用。本專利技術的第四目的在于提供上述復合微生物制劑在制備治療腸炎藥物中的應用。技術方案：為了解決上述技術問題，本專利技術所采用的技術方案為：一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑，包括羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08；所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02，保藏在中國典型培養物保藏中心，，保藏單位地址：湖北省武漢市武昌區武漢大學，郵政編碼為430072，保藏編號為：CCTCCNo.M2016546，保藏日期為2016年10月10日；所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08，保藏在中國典型培養物保藏中心，，保藏單位地址：湖北省武漢市武昌區武漢大學，郵政編碼為430072，保藏編號為：CCTCCNO.M2016548，保藏日期為2016年10月10日。優選地，所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的質量比為(1-1.5)：1，優選1.2:1。羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02的生理活性特征如下：所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02在MRS培養基平板上菌落較小，乳白色，直徑1-2mm，表面平滑，邊緣較規則。所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02菌體為桿狀，革蘭氏染色陽性，不形成芽孢，產生乳酸，兼性厭氧。羅伊氏乳桿菌的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示。將所測16SrDNA序列通過BLAST比對，鑒定其為羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)。鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的生理活性特征如下：所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08在MRS培養基平板上菌落較小，乳白色，直徑1-2mm，表面平滑，邊緣較規則。所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08菌體為桿狀，革蘭氏染色陽性，不形成芽孢，產生乳酸，兼性厭氧。鼠李糖乳桿菌的16SrDNA序列如SEQIDNo.2所示。將所測16SrDNA序列通過BLAST比對，鑒定其為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)。所述的復合微生物制劑是在制備抗菌藥物中的應用。所述的復合微生物制劑是在制備治療胃腸道疾病藥物中的應用。所述的復合微生物制劑是在制備治療腸炎藥物中的應用。有益效果：與現有技術相比，本專利技術的優點是：(1)本專利技術提供的復合微生物制劑對多種病原菌具有抑制作用；對病原菌的作用方式多樣化；繁殖速度快；能夠人工培養，易于操作，便于生產應用；抗逆能力強等優點。(2)本專利技術提供的復合微生物制劑培養條件簡單、發酵時間短、容易保存，適于工業化生產，具有良好的開發應用前景。附圖說明圖1為羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落圖。圖2為羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落放大圖。圖3為菌種第一批次功能性評價生長曲線。圖4為菌種第二批次功能性評價生長曲線。圖5為菌株耐酸實驗結果圖。圖6為乳酸菌數量與腸炎小鼠的體重關系曲線。圖7為乳酸菌數量與腸炎小鼠的結腸長度關系曲線。圖8為治療前后腸炎小鼠切片圖。圖9為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的菌落圖。圖10為鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08的菌落放大圖。圖11為菌種第一批次功能性評價生長曲線。圖12為菌種第二批次功能性評價生長曲線。圖13為菌株耐酸實驗結果圖。圖14為鼠李糖乳桿菌數量與腸炎小鼠的體重關系曲線。圖15為鼠李糖乳桿菌數量與腸炎小鼠的結腸長度關系曲線。圖16為治療前后腸炎小鼠切片圖。圖17為鼠李糖乳桿菌TR08與羅伊氏乳桿菌TR02混合培養液抑菌效果圖。具體實施方式下面結合實驗例詳細闡述本專利技術的應用。實施例1羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02的分離1、菌種和培養基和培養條件(1)菌源來自中國某軍區健康士兵糞便。(2)培養基平板培養基：1000mL蒸餾水，蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉9g，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸三銨2g，半胱氨酸0.5g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g，吐溫1ml，瓊脂粉15-20g，pH5.5-6.5。2、菌株的分離和鑒定(1)菌株的分離預先經滅菌處理后的手套箱中取適量新鮮糞便置于盛裝有無菌培養基的無菌試管中，充分震蕩渦旋混勻；本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑，其特征在于：包括羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus?reuteri)TR02和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus)TR08；所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus?reuteri)TR02，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?No.M?2016546，保藏日期為2016年10月10日；所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus?rhamnosus)TR08，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?NO.M?2016548，保藏日期為2016年10月10日。

【技術特征摘要】
1.一種低pH條件下抑菌復合微生物制劑，其特征在于：包括羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02和鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08；所述羅伊氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)TR02，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCCNo.M2016546，保藏日期為2016年10月10日；所述鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)TR08，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李珮銣，賈長生，邊高瑞，
申請(專利權)人：天益健康科學研究院鎮江有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32