一種γ?氨基丁酸的提取方法技術

本發明專利技術公開了一種γ?氨基丁酸的提取方法。該提取方法包括下述步驟：(1)將瓜蔞皮粗提取液上陽離子交換樹脂柱，用水洗滌，然后用氨水進行洗脫，將洗脫液濃縮干燥得到固體；(2)將固體用常壓正相柱純化，先用二氯甲烷：甲醇＝1:1進行洗脫，然后用二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑點的洗脫液合并，濃縮得到粗品；(3)將粗品用常壓正相柱純化，先用二氯甲烷：甲醇＝1:1進行洗脫，然后用二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，濃縮即得到γ?氨基丁酸純品。本發明專利技術的方法所得γ?氨基丁酸純度高，可直接用于瓜蔞皮藥材的質量控制。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及藥物化學，具體涉及一種γ-氨基丁酸的提取方法。
技術介紹
γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyricacid，簡稱GABA)，廣泛分布于動植物體內。植物如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有GABA。在動物體內，GABA幾乎只存在于神經組織中，其中腦組織中的含量大約為0.1-0.6mg/克組織，免疫學研究表明，其濃度最高的區域為中腦中黑質。GABA是目前研究較為深入的一種重要的抑制性神經遞質，它參與多種代謝活動，具有很高的生理活性。在人體，GABA還直接調控肌肉張力。瓜蔞(拉丁學名：TrichosantheskirilowiiMaxim)的根(中藥名天花粉)、果肉(中藥名栝樓實)、果皮(中藥名栝樓皮)、種子(中藥名栝樓仁)都是有名的中藥。其中瓜蔞皮被制成注射液(瓜蔞皮注射液，上海上藥第一生化藥業有限公司)，憑其優良的品質和療效，在國內被廣泛用于心絞痛，冠心病等。之前有人報道過瓜蔞根中含有GABA(柱前衍生反相高效液相色譜法測定天花粉中γ-氨基丁酸含量，潘建，中國藥業)，但是作為主要成分，瓜蔞皮中的GABA情況至今未有報道。瓜蔞皮的化學成分比較復雜，其真正的有效成分至今沒有明確的報道，因此對其化學成分進行仔細研究，具有重要的意義?，F有較多文獻報道瓜蔞皮的化學成分，瓜蔞果皮化學成分(山東中醫藥大學博士學位論文，李愛峰，2011)中對瓜蔞皮化學成分進行了詳盡的綜述和分析，在做水溶性化學成分分離時，其選用826型樹脂，分離得到極性相對較小的化合物，對于瓜蔞皮中含量高，極性較大的γ-氨基丁酸卻沒有分離得到。李愛峰等人的專利：一種從瓜蔞皮中分離純化4種核苷類化學成分的方法(CN103304613A)、一種從瓜蔞皮中分離純化5種嘌呤及嘧啶堿基的方法(CN103304490A)、一種從瓜蔞皮中分離純化3種黃酮苷的方法(CN103304611A)等，也只是采用反相制備色譜對其中的黃酮類、嘌呤類、嘧啶類化學成分進行研究，γ-氨基丁酸在反相色譜中無保留，因此沒有分離得到γ-氨基丁酸。瓜蔞皮注射液作為年銷量過兩億的中藥注射液，其所使用的原料瓜蔞皮的化學成分分離和鑒定具有十分重要的意義。因此，從瓜蔞皮中分離、鑒定出γ-氨基丁酸，并將其應用于生物制藥領域，具有重要的意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種γ-氨基丁酸的提取方法，本專利技術利用該方法首次從瓜蔞皮中提取出了γ-氨基丁酸，該方法操作簡便，重復性好，環保安全。本專利技術是通過以下技術方案實現上述目的的：本專利技術提供一種γ-氨基丁酸的提取方法，其包括下述步驟：(1)將瓜蔞皮粗提取液上陽離子交換樹脂柱，用水洗滌，然后用氨水作為洗脫劑進行洗脫，將洗脫液濃縮干燥得到固體；(2)將步驟(1)中的固體用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑點的洗脫液合并，濃縮得到粗品；(3)將步驟(2)中的粗品用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑點的洗脫液合并，濃縮即得到γ-氨基丁酸純品。其中，步驟(1)中所述的瓜蔞皮粗提取液較佳地通過下述步驟制得：將瓜蔞皮與水混合后，常壓下回流提取3～4次，合并提取液；減壓濃縮，加入質量百分比濃度為90％～95％的乙醇，加至乙醇質量百分比為70％～75％，靜置，過濾，取上清液即得瓜蔞皮粗提取液。其中，所述的減壓濃縮較佳地為減壓濃縮至瓜蔞皮的原料重量的0.75～1倍。其中，步驟(1)中所述的陽離子交換樹脂柱中的陽離子交換樹脂較佳地為購自于上海樹脂廠的732型強酸性陽離子交換樹脂。其中，步驟(1)中所述的水較佳地為去離子水。其中，步驟(1)中所述的洗脫的流速較佳地為200～250mL/min。其中，步驟(1)中所述的氨水的濃度較佳地為1～2mol/L。其中，步驟(2)與步驟(3)中，所述的二氯甲烷：甲醇＝1:1作為洗脫劑的用量較佳地以檢測黃酮苷類條帶完全洗脫下來為止。其中，步驟(2)中，常壓正相柱的填料較佳地為200～300目硅膠，所述的硅膠的用量為所述的固體重量的20～30倍。其中，步驟(2)中，常壓正相柱的型號優選如下：直徑為2～3cm、長度為40～50cm。其中，步驟(2)中，所述的檢測較佳地采用薄層層析法(TLC法)進行檢測。其中，步驟(3)中，常壓正相柱的填料較佳地為200～300目硅膠，所述的硅膠的用量為所述的粗品重量的40～60倍。其中，步驟(3)中，常壓正相柱的型號優選如下：直徑為0.7～0.8cm、長度為20～30cm。其中，步驟(3)中，所述的檢測較佳地采用薄層層析法(TLC法)進行檢測。在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。本專利技術所用試劑和原料均市售可得。本專利技術的積極進步效果在于：(1)本專利技術的提取方法不需要復雜的設備，且所使用的試劑和材料安全易得。(2)本專利技術的提取方法能最大程度的提取出瓜蔞皮中的γ-氨基丁酸，節約原料。(3)本專利技術所得γ-氨基丁酸純度較高，可直接用于瓜蔞皮藥材的質量控制。附圖說明圖1為瓜蔞皮提取液中氨基酸檢測情況圖，其中Pro指脯氨酸，Asp指天冬氨酸，Thr指蘇氨酸，Ser指絲氨酸，AspNH2指天冬酰胺，Glu指谷氨酸，a-AAA指a-氨基己二酸，Gly指谷氨酸，Ala指丙氨酸，Cit指瓜氨酸，a-ABA指a-氨基丁酸，Val指纈氨酸，Cys指半胱氨酸，Met指甲硫氨酸，Cysthi指胱硫醚，Ile指異亮氨酸，Leu指亮氨酸，Tyr指酪氨酸，Phe指苯丙氨酸，b-Ala指b-丙氨酸，GABA指γ-氨基丁酸，Trp指色氨酸，EOHNH2指乙醇胺，NH3指氨，Orn指鳥氨酸，Lys指賴氨酸，His指組氨酸，3Mehis指3-甲基組氨酸，Arg指精氨酸。圖2為分離得到的γ-氨基丁酸色譜圖。圖3為分離得到的γ-氨基丁酸H1NMR譜圖。圖4為分離得到的γ-氨基丁酸C13NMR譜圖。具體實施方式下面通過實施例的方式進一步說明本專利技術，但并不因此將本專利技術限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種γ?氨基丁酸的提取方法，其包括下述步驟：(1)將瓜蔞皮粗提取液上陽離子交換樹脂柱，用水洗滌，然后用氨水作為洗脫劑進行洗脫，將洗脫液濃縮干燥得到固體；(2)將步驟(1)中的固體用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑點的洗脫液合并，濃縮得到粗品；(3)將步驟(2)中的粗品用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑點的洗脫液合并，濃縮即得到γ?氨基丁酸純品。

【技術特征摘要】
1.一種γ-氨基丁酸的提取方法，其包括下述步驟：
(1)將瓜蔞皮粗提取液上陽離子交換樹脂柱，用水洗滌，然后用氨水
作為洗脫劑進行洗脫，將洗脫液濃縮干燥得到固體；
(2)將步驟(1)中的固體用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：
甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)
作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑
點的洗脫液合并，濃縮得到粗品；
(3)將步驟(2)中的粗品用常壓正相柱純化，先用體積比為二氯甲烷：
甲醇＝1:1作為洗脫劑進行洗脫，然后用體積比為二氯甲烷：甲醇＝1:(2～3)
作為洗脫劑進行洗脫，分段接收3～5個柱體積的洗脫液，將檢測只有一個斑
點的洗脫液合并，濃縮即得到γ-氨基丁酸純品。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述的瓜
蔞皮粗提取液通過下述步驟制得：將瓜蔞皮與水混合后，常壓下回流提取3～4
次，合并提取液；減壓濃縮，加入質量百分比濃度為90％～95％的乙醇，加
至乙醇質量百分比為70％～75％，靜置，過濾，取上清液即得瓜蔞皮粗提取
液。
3.如權利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述的減壓濃縮為減
壓濃縮至瓜蔞皮的原料重量的0.75～1倍。
4.如權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述的陽
離子交換樹脂柱...

【專利技術屬性】
技術研發人員：袁永雷，丁金國，黃臻輝，狄穎峰，
申請(專利權)人：上海上藥第一生化藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：上海;31