本發(fā)明專利技術公開一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽及其應用。本發(fā)明專利技術的多肽是：其氨基酸序列中含有SEQ?ID?N0.1或/和SEQ?ID?N0.2或/和SEQ?ID?N0.4或/和SEQ?ID?N0.5，或者由前述序列經(jīng)過一個或/和幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽，也可以是前述序列和添加有具有布魯氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。本發(fā)明專利技術所涉及的各多肽可在制備診斷或預防或治療布魯氏菌引起的疾病的試劑或藥物中的應用。本發(fā)明專利技術篩選多肽為化學合成，經(jīng)刺激DC后可釋放出高濃度的IL-4，可作為目的抗原檢測檢測布魯氏菌病感染的血清，或制備Yajc蛋白單克隆抗體的抗原。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及一種多肽，確切講是一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽及其應用。
技術介紹
布魯氏菌（Brucella)，革蘭氏陰性兼性細胞內(nèi)寄生菌，是嚴重的人獸共患病，廣泛感染家畜、野生動物和人，家畜動物布魯氏菌主要感染羊、牛和豬，其中對人致病的主要有馬耳他布魯氏菌和流產(chǎn)布魯氏菌；布魯氏菌病感染家畜引起公畜的附睪炎和懷孕家畜的流產(chǎn)、胎盤炎癥和不育；對于人類，布魯氏菌病課引起急性炎癥和許多類似流感感染的癥狀，包括波浪熱、多汗、背疼和體質(zhì)虛弱，在一些病人身上，急性臨床癥狀可持續(xù)一年以上最終導致慢性的持續(xù)性感染，慢性臨床癥狀包括不規(guī)則的發(fā)熱、關節(jié)疼、乏力，并發(fā)引起關節(jié)炎、區(qū)部末梢神經(jīng)炎癥、脊柱炎、骨髓炎和粘液囊炎，布魯氏菌病的流行不僅危害著畜牧業(yè)的發(fā)展，造成了巨大的經(jīng)濟損失，而且嚴重威脅著人類的健康和公共衛(wèi)生安全。目前，全世界用于預防布魯氏菌病的有效疫苗均為減毒的活疫苗，各種疫苗的使用不僅干擾著疫苗免疫和自然感染的鑒別診斷，而且所有的疫苗株不同程度的對人有致病毒力，甚至有些疫苗對人為強致病力，安全可靠的滅活疫苗研究效果差，不能起到免疫保護作用。基因工程疫苗的研究近幾十年來一直被全世界研究人員所關注和努力，但由于布魯氏菌本身免疫抗原多樣化，結構復雜，未能發(fā)現(xiàn)可用于田間試驗的疫苗抗原，尋找存在于各種布魯氏菌種間保守存在且具有很好免疫功能的蛋白，研制預防保護力高的亞單位疫苗是解決這一問題的有效辦法。現(xiàn)有技術中大多數(shù)表達工具只能表達一種蛋白，而布魯氏菌存在多種與免疫相關的蛋白，研究表明單個蛋白的表達不能形成有效的保護疫苗用抗原，表達制備多個防控作用的亞單位疫苗成本高，且組合成分復雜；而決定免疫蛋白功能的成分是位于蛋白上微小的抗原決定簇，對免疫相關蛋白免疫抗原表位的挖掘和鑒定，可以有效的提取布魯氏菌中有效的免疫抗原成分，同時也對蛋白的結構和功能研究提供直接的指導，表位抗原成分的確定，可為檢測、預防或治療能提供良好的抗原組分。因此篩選獲得免疫蛋白上這些抗原決定簇多肽為解決現(xiàn)有技術存在的不足提供了一種思路和途徑。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術提供一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽及其應用。本專利技術的布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽其氨基酸序列中含有SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.7或/和SEQIDN0.8。本專利技術的布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽還可以是：其氨基酸序列為SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列經(jīng)過一個或/和幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽，或者是其氨基酸序列為SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列和添加有具有布魯氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。由SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所構成的重組載體或表達盒或轉(zhuǎn)基因細胞或重組菌。本專利技術的多肽可在制備診斷或預防或治療布魯氏菌引起的疾病的試劑或藥物中的應用。布魯氏菌Yajc蛋白是免疫原性膜蛋白，目前功能不詳，但研究發(fā)現(xiàn)Yajc能激發(fā)小鼠產(chǎn)生強烈的免疫反應。本專利技術利用生物信息學的手段，對布魯氏菌Yajc免疫蛋白氨基酸的組成和功能進行分析，并模擬構建出蛋白的高級結構模型，綜合上述結果發(fā)掘出的蛋白上潛在的具有免疫功能的抗原多肽，化學合成這些多肽后，通過實驗驗證手段最終獲得功能多肽，制備出的布魯氏菌Yajc免疫蛋白多肽為布魯氏菌病的檢測、疫苗、防控提供新的思路，這也對于提高我國動物布魯氏菌病的防治技術水平，保證養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展、提供農(nóng)牧民收入、保證公共衛(wèi)生和畜產(chǎn)品安全同樣具有重大的社會效益。本專利技術的有益效果為：1）本專利技術篩選多肽為化學合成，而不是活的布魯氏菌上提取，因此在生產(chǎn)過程中完全避免了人為的制毒、散毒等安全隱患。2）本專利技術采用生物信息學工具與試驗驗證相結合篩選抗原多肽，縮小的篩選抗原多肽的范圍，提高了篩選效率。3）本專利技術在樹突狀細胞上篩選抗原多肽，由于樹突狀細胞具有強大的抗原加工和遞呈能力，結果更為接近于動物模型。4）本專利技術所獲得的多肽能與布魯氏菌病陽性血清發(fā)生反應，故該重組蛋白可作為目的抗原檢測檢測布魯氏菌病感染的血清，如ELISA方法等。5）本專利技術所表達的目的蛋白，可直接用于制備Yajc蛋白單克隆抗體的抗原。附圖說明圖1是本專利技術實施例的DC培養(yǎng)圖。圖2是本專利技術流式細胞儀檢測DC的表型結果。圖3是本專利技術多肽作用DC后IL-2的分泌量；樣本依次為1-5多肽，6為已知抗原表位對照；7為陰性對照。圖4是本專利技術多肽作用DC后IL-4分泌量；樣本依次為1-5多肽，6為已知抗原表位對照；7為陰性對照。圖5是本專利技術多肽作用DC后IFN-y分泌量；樣本依次為1-5：多肽，6：已知抗原表位對照；7：陰性對照。具體實施方式本專利技術以下結合實施例對本專利技術做進一步的說明。一、實驗材料的制備1）抗原表位多肽的獲得用生物信息學軟件對布魯氏菌Yajc蛋白氨基酸的組成、性質(zhì)以及其高級結構進行分析，結合所有結果，挖掘獲得可能具有免疫原性的五個多肽片段，并委托南京金斯瑞生物科技有限公司合成，得到各多肽序列如下：TPAFAQASGSVVGPDML（SEQIDNO.1在后述的內(nèi)容中為多肽樣本1）；RGDTVVTGGGIVGKVLKVVD（SEQIDNO.2在后述的內(nèi)容中為多肽樣本2）；QRTQMKKRQEMLNSVR（SEQIDNO.4在后述的內(nèi)容中為多肽樣本3）；MSILPFILIFVIMYFLIIRP（SEQIDNO.5在后述的內(nèi)容中為多肽樣本4）；IADGVRIRVVRATLMDVRVKGE（SEQIDNO.3在后述的內(nèi)容中為多肽樣本5）。2）小鼠骨髓源樹突狀細胞（DC）的培養(yǎng)頸椎脫位法處死Balb/c小鼠，無菌狀態(tài)下取股骨和脛骨，浸泡在RPMI-1640培養(yǎng)基中。用1ml注射器吸取RPMI-1640培養(yǎng)液，從骨干的一端刺入骨髓腔，將骨髓沖洗到一無菌培養(yǎng)皿中，每根骨頭反復4～6遍，收集培養(yǎng)皿中的骨髓細胞懸液，離心，1500rpm×10min。棄去上清，加入5ml無菌Tris-NH4Cl溶液懸浮細胞溶解紅細胞，于室溫下靜置2分鐘溶解紅細胞后，再次離心，1500rpm×5min，棄上清。用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌后將細胞用完全培養(yǎng)基懸浮，分至6孔培養(yǎng)板中，并在每孔中加入完全培養(yǎng)基至4ml，再加入rmGM-CSF至終濃度10ng/本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列中含有SEQ?ID?N0.1或/和SEQ?ID?N0.2或/和SEQ?ID?N0.4或/和SEQ?ID?N0.5。
【技術特征摘要】
1.一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列中含有SEQID
N0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5。
2.一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列為SEQIDN0.1或/
和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列經(jīng)過一個或/和幾個氨基
酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽。
3.一種布魯氏菌Yajc蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列為SEQIDN0.1或/
和SEQIDN0....
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：曹小安，周繼章，李兆才，婁忠子，景志忠，付寶權，尚佑軍，
申請(專利權)人：中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：甘肅;62
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