從丹參中提取高純度丹參素的方法技術

本發明專利技術屬于植物藥技術領域，具體為一種從丹參中提取高純度丹參素的方法。該方法包括用熱浸法從丹參藥材中提取含有丹參素的提取液；用酸調節提取液的ｐＨ值，去除雜質，減壓濃縮；然后用大孔吸附樹脂進行洗脫，富集丹參素；再低溫濃縮，冷凍干燥成固體；最后用乙醇加熱溶解，過濾沉淀后對濾液低溫濃縮，析出結晶，即得純度為９０％以上的丹參素。本發明專利技術方法工藝簡單、可控，提取效率高，而且污染少，成本低，適合于大規模生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于植物藥
，具體涉及從丹參藥材中提取高純度丹參素的方法。
技術介紹
丹參Sa/Wa脂加o〃W加Bumge為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，是我國傳統的中藥， 具有活血化瘀、通經活絡、清心除煩之功效，《神農本草經》列為上品。丹參的活性成分 主要有兩類 一類是以丹參酮為代表的脂溶性成分；另一類是以丹酚酸為代表的水溶性成 分。研究表明，丹參的水溶性成分具有抗氧化、抗凝、抗血栓、抗心腦血管缺血及調節血 脂作用，對多種動物實驗性心、肝、肺等組織損傷均有明顯的保護作用，具有抗炎、增強 免疫功能等多方面藥理活性。目前對丹參水溶性成分研究關注比較多的是丹酚酸B，而忽 視了另一個有效成分一一丹參素。丹參素，又名丹參素甲，命名為D(+)p-(3,4-二羥基苯基)乳酸，屬于苯丙酸類成分。同 時丹參中還含有丹參素乙和丹參素丙等成分，丹參素乙是丹參素(丹參素甲)的三聚體， 丹參素丙是丹參素的二具體。三者的結構如下藥理研究表明，丹參素具有縮小心肌梗死范圍和減輕病程的作用，同時對心肌缺血/ 再灌注損傷具有保護作用；對細胞因子活化內皮細胞有抑制作用，從而有利于保護血管內皮，起到抗血栓形成的作用。近年來的研究結果還表明丹參素對腦損傷也有良好的保護作 用，總之丹參素在治療冠心病、抗血栓、降血脂和防止動脈粥樣硬化方面具有獨特的療效。 然而由于丹參素分子中含有活潑的羥基，見光或受熱易發生氧化反應，給分離制備帶來極 大的難度，目前為止丹參素僅限于作為含有丹參的中成藥的指標性成分的使用，還不能真丹參素(丹參素甲)丹參素丙丹參素乙正走向臨床。隨著對丹參研究的進一步深入，丹參素的分離制備技術已逐漸引起重視，其中純度較 高的丹參素的制備方法有以下幾種方法一CN1161317C中公開了一種丹參素的提取分 離方法，將丹參以常規水提取，提取液依次通過吸附樹脂柱和離子交換樹脂柱，分別以氫 氧化鈉和氯化鈉將含丹參素的部分洗脫下來，洗脫液的pH調節到3，以乙醚進行萃取，可 得到含量為91%的丹參素，得率為0.24% (實施例3);方法二 CN1303052C中公開的方 法是先用水或醇提取丹參藥材，再用稀堿將丹參水提液中丹參素前體轉化為丹參素，轉化 過程中需用抗氧保護劑并通入惰性氣體保護，通過超濾得到粗品丹參素，然后用正相色譜 柱分離出丹參素，純度在90%以上。方法三CN1751706A中公開了丹參藥材的提取方法， 丹參藥材以堿水提取，用酸調節pH后進行醇沉，再經過2次色譜柱分離，洗脫液加堿調 節pH后濃縮得粗品，重結晶后得到丹參素。以上幾種方法過程復雜，多次使用色譜柱分 離，增加了有機溶劑殘留的機會和含量，且使用萃取、超濾等方法，不利于工業化且生產 成本較高。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種收率高、過程穩定可控、適合于大規模生產的從丹參藥材 中提取高純度丹參素的方法，該方法所得丹參素含量大于90%，具有工業應用前景。本專利技術提供的從丹參藥材中提取丹參素的方法，具體步驟如下a. 將丹參藥材切片，采用pH為8 10的堿水溶液熱浸法提取，溫度60 80'C，得到 含丹參素的提取液。b. 對提取液用酸調節pH至1 2，過濾除去沉淀，將上清液于60 7(TC下濃縮。濃縮 液加乙醇進行沉淀，使醇濃度達到70 85%，靜置，除去沉淀，在60-70'C溫度下濃縮濾 液至無醇味。c. 將上述濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以2 3倍樹脂體積的水洗脫，棄去，繼續以3 5倍樹脂體積的水洗脫，收集洗脫液。d. 將上述洗脫液在60-7(TC溫度下濃縮，以堿水調節pH至6 7，冷凍干燥成固體。e. 將上述固體用乙醇加熱溶解，過濾放冷后析出的沉淀，濾液低溫(在60-7(TC溫度 下)濃縮至小體積，析出結晶，即為高純度丹參素。步驟a的主要目的在于初步提取出丹參藥材中的丹參素，所用堿水為氫氧化鈉、氫氧 化鉀或氨水。熱浸法提取次數可以是2 3次，堿水的用量可以是丹參藥材重量的8-15倍， 每次提取時間為0.5 1小時。正如
技術介紹
所述，丹參藥材中除了含有丹參素外，還含有 丹參素的二聚體和三聚體，其中的內酯結構在堿水作用下發生水解，生成丹參素，但由于丹參素結構中含有多酚結構，不能用太濃的堿在高溫下提取，因此采用的提取方法為以pH 8 10的堿水60 8(TC下熱浸法提取。步驟b中，調節pH所用的酸為鹽酸、乙酸或硫酸。此時有大量沉淀析出，為雜質成 分，過濾除去雜質后濃縮上清液，由于丹參素結構的不穩定，采用減壓的方法在60 7(TC 下濃縮。濃縮后的醇沉過程加入乙醇使乙醇濃度達70 85%，充分攪拌后，在室溫到4'C 下靜置12 24小時。醇沉的目的是為了除去糖、淀粉、糅質等成分，若醇的濃度低于70 %，醇沉效果差；但如果醇的濃度高于85%，丹參素的溶解度降低，使得收率下降，因此 醇的最佳濃度在70 85%之間。步驟c中大孔吸附樹脂為AB-8、 D101或HP-20，優選HP-20。先以2 3倍樹脂體積 的水洗去糖等雜質，柱洗脫過程中薄層色譜(TLC)點板跟蹤，發現3倍以上柱體積時丹 參素開始出現，雜質洗脫結束后以3 5倍體積的水洗脫富集丹參素。目前可以選用的大 孔吸附樹脂類型較多，經過篩選得出AB-8、 D101禾卩HP—20的效果較好，其中優選的是 HP-20。 HP-20不像其它樹脂那樣需要復雜的酸堿前處理和后處理過程，使用比較方便，且 可以多次使用而不需要像其它樹脂那樣再生處理。HP-20的另外一個優點是，樹脂殘留量 低，尤其是二乙烯基苯這個關鍵指標比其它樹脂處理的要低很多，不會超過國家標準的規 定。步驟d先將洗脫液在低溫下濃縮至小體積，約1Kg藥材200ml，再用堿液調節pH至6 7，所用堿液為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水，與步驟a中提取所用堿液相同。該液體采用 冷凍干燥的方法凍干，冷凍干燥是一種成熟的工藝，能有效的去處水分，得到固體。用堿 液調過pH的液體，由于其中還含有一些低極性的成分和糖類，很難通過減壓濃縮的方法 完全去除其中的水分。因此我們采用冷凍干燥法將其制成固體，利于下一步雜質的除去。步驟e將步驟d所得固體用乙醇溶解，此時會析出一些小極性成分和糖類，所用乙醇 為無水乙醇或95%乙醇。濾液經過低溫減壓濃縮后即析出結晶，為高純度的丹參素。本專利技術所述的高純度丹參素的提取制備工藝具有以下特點本專利技術工藝過程簡單、可控。用稀堿溶液提取丹參藥材，采用熱浸提取的方法，既使 得一些丹參素的前體成分向丹參素轉變，又防止了丹參素發生氧化變質，保證了提取的效 率。得率在O. 4%以上。本專利技術工藝過程污染小、成本低。在整個過程中僅采用了水、稀酸、稀堿以及工業常 用的乙醇，避免了萃取和正相色譜會大量使用的有機溶劑，減少了污染，適合于大規模生 產。本專利技術所得的高純度丹參素以高效液相色譜法測定，結果表明，丹參素含量大于90%。具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡明本專利技術。丹參素的提取從丹參藥材2kg到50kg的生 產規模，過程可操作性強，產品質量和得率穩定，說明該工藝已經克服了一些工藝無法在 工業生產中重現和控制的問題，確實是可行的。 實施例l取丹參切片5kg，粉碎后加入pH 8的氫氧化鈉溶液75L， 6(TC下熱浸提取3次，每 次提取0.5h，合并3次提取液。以稀鹽酸調節pH至本文檔來自技高網...

【技術保護點】
從丹參中提取高純度丹參素的方法，其特征在于具體步驟如下：　　　　ａ、將丹參藥材切片，采用ｐＨ為８～１０的堿水溶液熱浸法提取，溫度６０～８０℃，得到含丹參素的提取液；　　　　ｂ、對提取液用酸調節ｐＨ至１～２，過濾除去沉淀；將上清液于６０～７０℃下濃縮；濃縮液加乙醇進行沉淀，使醇濃度達到７０～８５％，靜置，除去沉淀，６０－７０℃溫度下濃縮濾液至無醇味；　　　　ｃ、將上述濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以２～３倍樹脂體積的水洗脫，棄去，繼續以３～５倍樹脂體積的水洗脫，收集洗脫液；　　　　ｄ、將上述洗脫液６０－７０℃溫度下濃縮，以堿水調節ｐＨ至６～７，冷凍干燥成固體；　　　　ｅ、將上述固體用乙醇加熱溶解，過濾放冷后析出的沉淀，濾液低溫濃縮至小體積，析出結晶，即為高純度丹參素，含量達９０％以上。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張川，鄒豪，張寧，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第二軍醫大學，
類型：發明
國別省市：31[中國|上海]