馬鈴薯stu-miR9255及其應用制造技術

本發明專利技術提供了一種馬鈴薯stu?miR9255及其應用。RLM?5′RACE測檢結果表明stu?miR9255調控馬鈴薯絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因(PGSC0003DMG?400019726)，可用于研究該絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因的功能，即通過缺失表達或過表達該絲氨酸/蘇氨酸激酶受體時研究植物的生理生化變化。熒光定量PCR測檢結果表明，stu?miR9255的表達受干旱脅迫調控，說明其在馬鈴薯適應干旱脅迫中起著重要作用，可利用其培育出具有高抗旱能力的轉基因馬鈴薯，對提高馬鈴薯產量具有重要意義。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術專利涉及一種microRNA（miRNA）及其應用，具體地說是馬鈴薯stu-miR9255及其應用。
技術介紹
miRNA是一類非編碼的單鏈小分子RNA，長約20nt的內源性非蛋白編碼RNA。miRNA基因最初轉錄產生具有莖環結構的pre-miRNAs。隨后pre-miRNA被轉運出核，在細胞質中被Dicer酶作用，加工成成熟的miRNA。通過序列互補與特定靶基因的mRNA結合，通常在轉錄后水平引起mRNA降解或抑制mRNA翻譯從而對基因的表達起到負調節作用。干旱脅迫是最主要的非生物脅迫之一，其對農作物的生長發育和產量造成極其嚴重的影響。據統計，地球上總土地面積的36%屬于缺水的干旱或半干早區域，我國干旱和半干早區域大約占國土地面積的1/2。即使在半濕潤和濕潤的農業主產區，也通常會受到季節性和周期性的旱災侵襲。干旱脅迫對農作物產量、質量的影響相當于其余自然災害之和，其危害性在各種自然逆境脅迫中占首位，僅次于病蟲害對作物造成的損失。解決干旱問題的途徑，除了節水灌溉來提高水分的利用效率之外，就是培育節水抗旱的新品種以提高作物自身抵御干旱的能力。要達到這一目的，必須了解作物響應干旱脅迫的分子機制。因此，對作物抗旱機理的研究以探索提高作物抗旱能力是各國科學家關注的研究熱點問題。尤其是近年來對擬南芥、水稻等模式植物的深入研究，已鑒定、克隆出大量耐旱相關的基因，已研究清楚了一些耐鹽相關的基因的調控模式。將抗旱、耐鹽基因通過基因工程的手段整合到目標植物基因組中或有目的的抑制或誘導一些干旱相關基因的表達來獲得轉基因植株，開辟了培育高度抗旱性作物新品種的新途徑。隨著對植物抗旱機理的了解以及轉基因技術的日趨成熟，利用轉基因技術來獲得抗旱的育種材料或遺傳改良的新品種，已成為抗旱品種培育最具發展潛力的方向。植物類受體蛋白激酶（receptor-likeproteinkinases，RLKs）是具有內在的激酶活性的信號傳導物質，在植物抗逆信號傳導途徑中其這關鍵的調控作用。Dure（2010）在煙草中發現了2個RLK基因（NtLRR1和NtLRR2）參與鹽脅迫反應調控過程。Esspelund等（1992）也研究發現在擬南芥中RLK7在種子萌發以及氧化脅迫耐受性中起著重要的調控作用作用。郭鵬等（2011）也研究發現在擬南芥中過表達楊樹的LRR-RLK基因PdERECTA，轉基因株系對水分的利用效率顯著提高。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供馬鈴薯stu-miR9255的前體序列、stu-miR9255抑制靶基因表達以研究靶基因功能的應用、stu-miR9255抑制靶基因表達提高植物抗旱能力，培育抗旱植物品種的應用。為解決上述技術問題，本專利技術所采用的技術方案如下：馬鈴薯stu-miR9255的前體序列如下（本專利技術中所列核苷酸序列均為5′→3′）：acauauccaagacccccuuuucugauugacuugugguuuucacauuccuuuucugucauauacacagcccauccaaaaaaggaaugugaaaaccacaagccaaucagaaaa（序列表SEQIDNO：1）。馬鈴薯stu-miR9255的前體序列的二級結構式為：自5′端8bp-10bp和80bp-82bp形成環狀，自5′端33bp-34bp和48bp-58bp形成環狀，自5′端37bp-45bp形成環狀；其他堿基配對形成莖環結構。編碼上述馬鈴薯stu-miR9255的前體序列的DNA序列為：acatatccaagacccccttttctgattgacttgtggttttcacattccttttctgtcatatacacagcccatccaaaaaaggaatgtgaaaaccacaagccaatcagaaaa（序列表SEQIDNO：2）。上述馬鈴薯stu-miR9255的成熟序列如下：ucugauugacuugugguuuuc（序列表SEQIDNO：3）。stu-miR9255的成熟序列是前體序列自5′端21bp-41bp的一段RNA序列。上述馬鈴薯stu-miR9255的前體序列在研究基因功能中的應用，stu-miR9255抑制靶基因絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因(PGSC0003DMG400019726)的表達，所述絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因序列如序列表SEQIDNO：4所示。上述馬鈴薯stu-miR9255的前體序列在培育抗旱轉基因植物中的應用。優選地，所述轉基因植物為馬鈴薯（Solanumtuberosum）。優選地，在馬鈴薯中過表達SEQIDNO：1所述miRNA，或者抑制SEQIDNO：1所述miRNA的表達，培育出具有高抗旱能力的轉基因馬鈴薯。采用上述技術方案所產生的技術效果在于：本專利技術提供了一種馬鈴薯stu-miR9255及其應用。RLM-5′RACE測檢結果表明stu-miR9255調控絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因(PGSC0003DMG400019726)，可用于研究該絲氨酸/蘇氨酸激酶受體基因的功能，即通過缺失表達或過表達該絲氨酸/蘇氨酸激酶受體時研究植物的生理生化變化。熒光定量PCR測檢結果表明，stu-miR9255的表達受干旱脅迫調控，說明其在馬鈴薯適應干旱脅迫中起著重要作用，可利用其培育出具有高抗旱能力的轉基因馬鈴薯，對提高馬鈴薯產量具有重要意義。附圖說明圖1是本專利技術馬鈴薯stu-miR9255的二級結構圖。圖2是本專利技術馬鈴薯靶基因降解電泳圖。圖3是本專利技術馬鈴薯靶基因降解組測序圖。圖4是本專利技術馬鈴薯stu-miR9255的熒光定量PCR圖。具體實施方式為使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚，下面對具體實施方式進行詳細說明。本專利技術的實施方式僅僅是示例性的，并且本專利技術并不限于這些實施方式。在此，還需要說明的是，為了避免因不必要的細節而模糊了本專利技術，以下實施例僅僅示出了與根據本專利技術的方案密切相關的結構和/或處理步驟，而省略了關系不大的其他細節。并且，本專利技術所使用的各種原料以及各項設備均為常規市售產品，均能夠通過市場購買直接獲得；所有定量試驗均設置三次重復試驗，結果取平均值。實施例一：stu-miR9255和靶基因序列的確認馬鈴薯stu-miR9255的前體序列如下（本專利技術中所列核苷酸序列均為5′→3′）：acauauccaagacccccuuuucugauugacuugugguuuucacauuccuuuucugucauauacacagcccauccaaaaaaggaaugugaaaaccacaagccaaucagaaa本文檔來自技高網...

【技術保護點】
馬鈴薯stu?miR9255，其特征在于所述stu?miR9255的前體序列如序列表SEQ?ID?NO：1所示。

【技術特征摘要】
1.馬鈴薯stu-miR9255，其特征在于所述stu-miR9255的前體序列如序列表SEQIDNO：
1所示。
2.根據權利要求1所述的馬鈴薯stu-miR9255，其特征在于所述stu-miR9255的二級結
構為：自5′端8bp-10bp和80bp-82bp形成環狀，自5′端33bp-34bp和48bp-58bp形成環狀，自
5′端37bp-45bp形成環狀；其他堿基配對形成莖環結構。
3.根據權利要求1所述的馬鈴薯stu-miR9255，其特征在于編碼所述stu-miR9255前體
序列的DNA序列如序列表SEQIDNO：2所示。
4.根據權利要求1所述的馬鈴薯stu-miR9255，其特征在于所述stu-miR9255的成熟序
列如序列表SEQIDNO：3所示。
5.根據權利要求4所述的馬鈴薯stu-miR92...

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊江偉，張寧，司懷軍，周香艷，文義凱，唐勛，
申請(專利權)人：甘肅農業大學，
類型：發明
國別省市：甘肅;62